全自動血型檢測系統在無償獻血者血液檢測中的應用及其臨床價值探討

宋飛峰 吳安明 張柳英 歐靖 楊倩

(黔南州中心血站 1.行政科，2.檢驗科，貴州黔南 558000)

對無償獻血者血液標本中的不規則抗體、Rh(D)、ABO 血型檢測是血站血液篩查的重點工作，Rh(D)血型、ABO 血型鑒定的要求是準確率100%，因其會對輸血患者的生命安全造成直接的影響。ABO 定型的方法主要有梯型板法、U 型板法、試管法、紙片法等。常規的試管法、紙片法檢測效率較低，且結果容易受到主觀因素影響，另外，不能進行較長時間的保存，也無法進行批量血型檢測[1]。全自動血型檢測系統不僅可以提高血液標本檢測效率，而且還能減少由于人為原因導致的差錯發生，有利于保證輸血患者的生命安全。因此，應用高效率、高通量、結果精確的自動化檢測系統對于提高血液標本質量非常重要。全自動血型檢測系統省時省力，可以減少人為失誤的發生，使最終的結果判斷更加直接、客觀，數據可以長時間進行保存，近幾年在無償獻血標本中應用越來越廣泛[2]。我站在無償獻血者血液檢測中，使用全自動血型檢測系統進行檢測，檢測結果準確、可靠，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源

選取2019 年本站無償獻血者2 634 例，對所有獻血者的血液樣本進行全自動血型檢測系統檢測、試管法檢測、U 形微板法檢測。2 634 例獻血者中，男1 661 例，女973 例；年齡18～55 歲，平均年齡（33.3±1.2）歲；均知曉并同意此次檢測。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑

試劑主要有血清抗A、抗B（上海血液生物醫藥有限公司提供）；Rh(D)（德國Biotest 公司提供）；A 細胞、B 細胞、O 細胞懸液（2%，北京金豪制藥股份有限公司提供）[3]。

1.2.2 儀器、材料

全自動血型檢測系統、預稀釋板、0LYMPUS120孔V 型梯度板。

1.2.3 試管法

嚴格按照全國臨床檢驗規程進行此操作，應用可調微量移液器在試管中加入自制的血漿、新鮮紅細胞，離心1min 后進行輕微震蕩觀察，如果存在細沙狀或者是凝塊則為凝集，反之為不凝集[4]。

1.2.4 U 形微板法

U 型微板法又叫做半自動法，主要是根據紅細胞通過微板在鹽水介質中凝集的原理進行，在U 型微板上經過全自動樣本加樣儀(ML-STAR)對標本與試劑進行處理。反定型板布局為Oc、Bc、Ac，每塊樣板檢測標本30 份，正定型布局抗-A、抗-B，每塊樣板檢測標本44 份；Rh(D)檢測在單獨的微板上，Rh(D)與正、反定型檢測樣本與試劑的比例為30μL :50μL[5]。完成分配微板手工后將其轉入到孵育振蕩器中，選擇轉速400r、振蕩6min、振幅3F；手工轉移到平板離心機中，選擇500r 轉速離心1min；后將其轉移到孵育振蕩器中，選擇轉速1000r、振蕩2min、振幅1F，后靜置3min，使用HT3 酶標儀進行判讀，同時通過ITSWELL 軟件對結果進行分析與判斷，同時用肉眼對結果符合性進行判斷[6]。對可疑的標本進行重復檢測，如果仍然無法對結果進行明確，后送到血型室進行確認。

1.2.5 全自動血型檢測系統

編制加樣程序，按照ABO 正、反定型、不規則抗體、Rh(D)檢測。①Xantus 加樣：取樣本血漿13μl 加入3 孔，分別為不規則抗體1 孔、反定型2孔，分別加入30μl 的O 細胞懸液(2%)、B 細胞懸液(2%)、A 細胞懸液(2%)。②將16μl 紅細胞樣本與450μl 生理鹽水混合，使之形成紅細胞懸液，再分別取25μl 加入到兩孔中，再次加入生理鹽水對抗A、抗B 血清進行稀釋，各25μl[7]。③Rh(D)在另一塊V 型梯度板中單獨進行，將稀釋好的紅細胞懸液25μl 加入到V 型板孔中，再次加入生理鹽水1 :20 稀釋25μl 的Rh(D)試劑。④加樣完成后充分振蕩10s，放到室溫下靜置1h 后自動對結果進行判讀[8]。

1.2.6 結果判斷

U 形微板法、試管法：陽性：有凝集；陰性：無凝集。全自動血型檢測系統：對血型進行自然沉降反應，根據孔底透光率對結果進行判斷。陽性：細胞均勻的分布在V 型孔底；陰性：細胞沉降且主要聚集在孔底中央；Rh(D)血型、ABO 正反定型血型相同且正常后對血型進行判斷，如果結果不相同，則進行進一步鑒定[9]。

1.3 觀察指標

（1）比較試管法與全自動血型檢測系統檢測結果符合率。

（2）比較全自動血型檢測系統檢測與U 形微板法檢測結果。

（3）比較全自動血型檢測系統檢測與U 形微板法Oc 凝集發現的鹽水不規則抗體參比結果。

（4）比較全自動血型檢測系統檢測與U 形微板法對倍比稀釋后血漿反定型檢測結果。

（5）比較全自動血型檢測系統檢測與U 形微板法對溶血、脂血標本檢查結果。

1.4 統計學方法

數據應用SPSS 18.0 進行分析，其中計數進行χ2檢驗，計量數據進行t檢驗，P＜0.05 提示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 試管法與全自動血型檢測系統檢測結果符合率對比

從2 634份樣本中抽取480份樣本的Rh(D)血型、ABO 正反定型血型進行試管法與全自動血型檢測系統檢測，符合率為100%，見表1。

2.2 全自動血型檢測系統檢測與U 形微板法檢測結果對比

在2 634 份樣本中，有10 份樣本正反定型不符，通過血型室檢測有2 份為亞型，其中的1 份送至相關血液中心血液研究所，發現該標本為少見的cisAB 型，通過PCR-SSP 分型法進行進一步檢測發現，該標本確定為cisAB 中的01 型，同時進行DNA 基因測序后，發現該獻血者的血型為001 型與cisAB01 型雜合，同時發現該標本中有cisAB01型的803G＞C、467C＞T、467C＞T 典型變異，同時還有724C＞T 的突變，抗體減弱有1 份，不規則抗體陽性6 份；檢出的Rh(D)陰性有3 份，通過血型室確定為陰性，一次結果判斷準確性為100%。U 形微板法檢出的正反定型不符有43 份，有38 份經過試管法檢測與全自動血型檢測系統檢測與判讀結果相同，還有3 份經過血型室確定為不規則抗體陽性；Rh(D)陰性檢出2 份，經過血型室確定為陰性，見表2。

2.3 全自動血型檢測系統檢測與U 形微板法Oc 凝集發現的鹽水不規則抗體參比結果對比

全自動血型檢測系統檢測Oc 凝集結果與正反定型不符的例數多于U 形微板法檢測結果，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

2.4 全自動血型檢測系統檢測與U 形微板法對倍比稀釋后血漿反定型檢測結果對比

隨著稀釋倍數的增加，全自動血型檢測系統檢測的陽性率比U 形微板法檢測的陽性率高，見表4。

2.5 全自動血型檢測系統檢測與U形微板法對溶血、脂血標本檢查結果對比

全自動血型檢測系統判斷正確率高于U 形微板法，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表5。

表1 試管法與全自動血型檢測系統檢測結果符合率對比（例）

表2 U 形微板法檢測與全自動血型檢測系統檢測結果對比（例）

表3 全自動血型檢測系統檢測與U 形微板法Oc 凝集發現的鹽水不規則抗體參比結果對比[例（%）]

表4 全自動血型檢測系統檢測與U 形微板法對倍比稀釋后血漿反定型檢測結果對比

表5 全自動血型檢測系統檢測與U 形微板法對溶血、脂血標本檢查結果對比[例（%）]

3 討論

3.1 臨床血液標本檢測現狀

隨著無償獻血人數的不斷增加，提高血液標本檢測質量非常重要，血液的安全對輸血患者的生命安全有直接的影響，且Rh(D)血型、ABO 血型的準確率必須達到100%[10]。

3.2 全自動血型檢測系統檢測在無償獻血標本檢測中的應用

無償獻血標本檢測在臨床上屬于重要工作，臨床上一般鑒定血型的方法為試管法，該方法是鑒定Rh(D)血型、ABO 血型的經典方法，結果比較準確、可靠，但是操作步驟不夠規范、科學，很容易使大量的樣本無法很好地處理與長時間保存[11]。U 型微板法是臨床上檢測血液血型的常規方法，主要用于血站血型鑒定，但是，該方法的全自動加樣儀需要試劑與標本，還需要一系列其他的步驟,比如結果比對、比色、振蕩、微板離心等都需要人為進行操作，操作人員的操作水平與臨床經驗會對最終的血型鑒定結果造成直接的影響[12]。全自動血型檢測系統是近些年興起的一種血型檢測方法，不管是加樣還是判定，整個過程都是通過血型儀完成，同時在進行試驗的期間，CCD 成像結果、凝集結果會進行自動保存，全部過程都可以進行監控，可以真正達到全自動血型檢測，有效減少了人為因素導致的誤差發生[13]。本研究顯示，從2 634 份樣本中抽取480 份樣本的Rh(D)血型、ABO 正反定型血型進行試管法與全自動血型檢測系統檢測，符合率為100%，這就說明，在無償獻血者血液檢測中，應用全自動血型檢測系統檢測，檢測結果準確、可靠，且有效減少了由于人為原因所導致的誤差發生。

研究顯示，隨著稀釋倍數的增加，全自動血型檢測系統檢測的陽性率比U 形微板法檢測的陽性率高，這就說明，在無償獻血者血液檢測中，應用全自動血型檢測系統檢測，檢測結果準確度、靈敏度較高，且對每一份標本均進行全自動血型檢測系統檢測，有效降低了血型試劑成本，提高了準確率。

紅細胞血型不規則抗體是導致輸血患者發生交叉配型困難、血型鑒定困難、輸血出現不良反應的主要原因[14]。臨床為了提高輸血標本的質量，減少為輸血患者輸注不規則抗體血液，保證患者生命安全，使用全自動血型檢測系統檢測，檢測結果顯著，可以檢出血液中的鹽水不規則抗體，提高了血液標本安全性[15]。本研究顯示，全自動血型檢測系統檢測Oc 凝集結果與正反定型不符的例數多于U 形微板法檢測結果(P＜0.05)，在2 634 份樣本中，有10份樣本正反定型不符，通過血型室檢測有2 份為亞型，其中的1 份送到了相關血液中心研究室，發現該標本為少見的cisAB 型，通過PCR-SSP 分型法進行進一步檢測，該標本確定為cisAB 中的01 型，同時進行DNA 基因測序后，發現該獻血者的血型為001 型與cisAB01 型雜合，同時發現該標本中有cisAB01 型的803G＞C、467C＞T、467C＞T 典型變異，同時還有724C＞T 的突變，抗體減弱有1 份，不規則抗體陽性6 份。檢出的Rh(D)陰性有3 份，通過血型室確定為陰性，一次結果判斷準確性為100%。U 形微板法檢出的正反定型不符有43 份，有38 份經過試管法檢測與全自動血型檢測系統檢測與判讀結果相同，還有3 份經過血型室確定為不規則抗體陽性；Rh(D)陰性檢出2 份，經過血型室確定為陰性。這就說明，對無償獻血者血液標本進行檢測時，應用全自動血型檢測系統檢測，可以對鹽水不規則抗體進行初篩，更容易檢出血液標本中的鹽水不規則抗體，從而提高了血液標本質量，保證了輸血患者生命安全。

3.3 全自動血型檢測系統檢測在無償獻血標本檢測中對準確率的影響

研究顯示，全自動血型檢測系統判斷正確率高于U 形微板法(P＜0.05)，這就說明，對無償獻血者血液標本進行檢測時，應用全自動血型檢測系統檢測，可以提高結果判讀準確性。常規檢測方法出現判讀誤差后，需要工作人員進一步進行試管法確定，這從一定程度上增加了工作人員的工作量，同時還延誤了報告的輸出時間。應用全自動血型檢測系統，可以顯著提高溶血標本、脂血標本的檢測準確率，這主要與全自動血型儀所使用的試劑量較少、標本血漿量較少、反應體積較小、生理鹽水的稀釋都有很大的關系，從而降低了結果判讀誤差率。另外,全自動血型儀判讀時從板底進行，有效降低了上清液的渾濁程度，提高了判讀結果準確性。

綜上所述，無償獻血者血液檢測中，全自動血型檢測系統的檢測結果準確可靠，應該在臨床上廣泛推廣與應用。