探究影響布魯氏菌病抗體檢測的因素

顧叢叢

本文主要探究影響布魯氏菌病抗體檢測的因素。以布魯氏菌病抗體檢測方法為出發點，分析采血管、標本放置時間、試驗溫度、前帶現象均會對布魯氏菌抗體檢測造成一定影響，出現假陽性情況。并以此為基礎提出樣本準備、操作方法、評定結果的對策，以期為相關工作者提供參考。

一、布魯氏菌病抗體檢測方法

1、布魯氏菌病主要是通過布魯氏菌所引起的傳染病，具有人獸共患特點，世界動物衛生組織將其歸納為B類動物疫病之中，我國將其列入到二級動物疫病。豬、牛、羊最易感染此病，犬與60多種家禽、家畜、野生動物易感性有所不同，主要是侵害生殖系統，易引發不孕、流產等。近幾年中，布魯氏菌病陽性率逐漸升高，已成為重點防范病種。

2、本次主要使用虎紅平板凝集試驗。由于培養布魯氏菌營養條件苛刻，時間漫長，因此診斷布魯氏菌病主要依據血清學診斷標準。原理是依據相應抗體可在體外產生特異性結合，并展現出可見反應，通過已知抗原進行未知抗體檢測。因為在酸性條件下抑制IgM活性，主要對IgG類凝集抗體進行檢查，具有良好特異性，與二巰基乙醇試驗、補體結合試驗等吻合率較高。虎紅平板凝集試驗具有價格便宜、靈敏度高、操作便捷、檢測速度快，更加適合普查群體布魯氏菌病，也是國際貿易中豬、牛、羊布魯氏菌病指定檢測試驗。

二、布魯氏菌病抗體檢測影響因素

1、采血管影響。在布魯氏菌抗體檢測中，首先將標本放置在采血管中，以此進行后續檢測。而不同采血管對于抗體檢測結果具有一定影響。經研究表明，選擇鄉鎮牛羊各50頭檢測布魯氏菌病抗體，使用負壓采血管在羊頸靜脈與牛尾靜脈采血共2管，采血管一個是普通采血管，另一個則含有肝素鈉抗凝劑，以以每分鐘2500轉的速度離心10分鐘，取上清液檢測。結果表明，在虎紅平板凝集試驗中，普通采血管檢測結果均為陰性，而含抗凝劑的采血管試驗結果則為陽性，在不同抗凝條件下，同一血液樣品的實驗結果產生兩種不同結果。主要是由于普通采血管中沒有抗凝劑，血液樣品采集后通常放置30分鐘離心，產生的上清液則為血清而含有抗凝劑的采血管，血液樣品混合而后離心，上清液則是血漿，前者沒有纖維蛋白質，后者則與之相反。使用血漿試驗，將會因為纖維蛋白質與試管凝集抗原及布魯氏菌病虎紅平板凝集抗原相結合，出現假陽性情況。通過上述實驗可知，日常工作中應當使用普通采血管進行標本采集，避免產生假陽性問題。

2、放置時間影響。試驗中采集血清后，需將放置一定時間才能進行后續實驗。不同放置時間對于檢測結果也存在相應影響。經研究表明，在試驗中使用普通采血管，將其分別放置10、30、60分鐘進行虎紅平板凝集試驗，結果表明血液標本在放置10至30分鐘后陽性率從8.7%向4.3%降低，而放置60分鐘后，血液標本陽性率逐漸穩定。由此可知，隨著血清標本增加放置時間，將會降低假陽性率，主要是由于血清中存在少量纖維蛋白，導致血清凝結成塊，此時試驗纖維蛋白將會與抗原相結合，出現假陽性，而經過長時間放置后，血清中纖維蛋白會逐漸收縮，可提高檢測結果準確率。因此，工作人員在檢測過程中，應當將抗原與血清放置一段時間，避免影像檢測結果。

3、實驗溫度影響。試驗中放置血清時，應當將其放在那種溫度環境下是主要研究問題，不同溫度對于試驗結果同樣具有一定影響。經研究表明，在實驗中采集血清后，將其分別放置在5℃、15℃、30℃、35℃、至5℃溫度中進行試驗，結果表明，在虎紅平板凝結實驗中，隨著溫度不斷提高，假陽性率也隨之降低。試驗溫度在15℃以上時，檢測結果準確率趨近于100%。因此，試驗溫度可穩定在20至30℃左右，保證所用試劑與標本室溫平衡，避免出現溫度差對檢測結果造成影響。

4、前帶現象影響。在檢測布魯氏菌陽性血清標本時，易產生試管凝結前帶現象，產生此種現象后進行虎紅平板凝結實驗，結果表明均為強陽性，而使用試管凝集試驗，血清稀釋度較低為陰性，而血清稀釋度較高時，檢測結果方為陽性。因此，在虎紅平板凝集試驗中，其檢測結果為強陽性，而采取試管凝集試驗表明結果為陰性，則表明實驗中可能產生前帶現象，此時共走人員應當將血清稀釋度加大，超過1：1600時，才能將前帶現象所導致的假陽性誤差減少，保證檢測結果準確性。

三、布魯氏菌病抗體檢測影響因素對策

通過上述分析，在應用虎紅平板凝結實驗進行布魯氏菌病抗體檢測中，應當注意以下幾點：

1、標本準備。備好標準陰性與陽性血清、虎紅平板凝集抗原（由畜牧站提供），按說明使用;使用普通采血管采集標本，血清應當無腐敗氣味、無溶血、無蛋白凝塊，樣品新鮮;干凈玻璃板或玻片，劃分若干方格（4cm2）;移液器或吸管，可滴加0.03mL液體;混合棒或牙簽，以便攪拌。

2、操作方法。在實驗之前，抗原與血清應當在室溫內放置約30至60分鐘，標記玻璃板被檢血清標號，添加相應0.03mL血清后，繼續添加0.03mL虎紅平板凝集抗原，使用小棒攪拌抗原與血清，讓兩者充分融合，5分鐘后觀察結果，與準備的陽性及陰性血清做對照。

3、判定結果。在對照的陽性與陰性血清下，可判定被檢血清，若是4分鐘內被檢血清呈現肉眼可變的凝集現象，則可判定其為陽性（+），若是并無凝結現象產生，或出現均勻粉紅色，則可判定血清是陰性（至）。

總之，在應用虎紅平板凝結實驗檢測布魯氏菌病抗體時，其將會受到采血管、標本放置時間、溫度、前帶現象的影響，出現假陽性結果。因此，工作人員在抗體檢測中，應當加強對抗原與標本的檢查，樣品應當無明顯蛋白凝塊、腐敗其為、無溶血，血清樣品運送與保存中避免出現反復受熱凍結情況，確保標本與實驗要求相符，從而提高檢測準確率，以免誤殺牲畜，對農牧民利益造成損害。

（作者單位：256400山東省淄博市桓臺縣畜牧獸醫事務服務中心）