牛病毒性腹瀉病毒滅活疫苗的制備及其免疫效果

錢 坤，王 虹

（1.天津市農業生態環境監測與農產品質量檢測中心 300402；2.天津市動物疫病預防控制中心 300402）

所謂牛病毒性腹瀉（BVDV），主要指的是牛病毒性腹瀉病毒所引發的牛類出現呼吸道疾病、腹瀉、繁殖異常、免疫機能受損等為主要特點的傳染病。 當該病毒進入到人體之后，會造成免疫抑制以及持續化感染現象。 當其持續感染牛類之后，會令其終身帶有病毒并排毒， 最終形成傳染源。 這在一定程度上加大了BVDV 疾病的診斷以及防治的難度水平。 和以往相比，BVDV 于中國感染情況更為嚴重。 這種情況給我國養禽業造成了不可挽回的經濟損失[1]。 疫苗接種為防控此類疾病發生以及發展的重要舉措。 但值得說明的是，現如今中國還沒有商品化BVDV 疫苗，進口疫苗雖然說能夠取得一定效果， 但價格較為昂貴， 較難推廣。 基于此，本試驗全面分析牛病毒性腹瀉病毒滅活疫苗的制備以及免疫效果，現將相關內容報告如下。

1 研制牛病毒性腹瀉病毒滅活疫苗的意義

牛病毒性腹瀉病毒會感染多類宿主，其在全球范圍內廣泛流行。 依照BVDV 5’UTR，Npro 等基因序列的差異能夠將BVDV分成兩類基因型[2]。 即為：BVDV-1 以及BVDV-2。 就生物學角度進行分析， 每個基因型也可以被分為致細胞病變型以及不致細胞病變型兩種。當發生BVDV 感染之后，機體會呈現出較為典型的臨床癥狀。具體表現為免疫抑制、腹瀉、發燒等。當病毒感染牛類之后， 其會形成相當重要的感染源。 現如今， 國際上用于BVDV 的防護措施主要有兩種： 一是有效鑒別以及撲殺持續性感染動物；二是疫苗免疫。 而針對于BVDV 的診斷，主要從抗原以及抗體方面著手。 滅活疫苗由于在使用過程中安全性好，其有較高經濟價值，可以有效的預防該病的發生和流行。 相關研究證實，在接種BVDV 疫苗以后，能夠全面減少懷孕母牛流產、減少持續性感染流產等。 由此能夠看出，研制我國自主開發的牛病毒性腹瀉病毒滅活疫苗，有著相當重要的現實意義。

2 牛病毒性腹瀉病毒滅活疫苗制備過程

2.1 病毒增殖和細胞毒量測定

2.2 病毒液滅活以及檢驗

2.3 油佐劑滅活疫苗相關制備。 在此其中包含了有效的制備以及水相的制備、乳化3 個步驟。

2.4 滅活疫苗無菌檢驗。 在進行該項工作過程中，應當全面依照《中華人民共和國獸藥典（2010 版）》三部中的方法，針對于所制備的BVDV 有所系滅活疫苗開展無菌檢驗。

2.5 滅活細胞性狀檢驗。 其中包含外觀檢驗進行檢驗、穩定性檢驗以及年度水平檢驗。

2.6 滅活疫苗，安全性檢驗。

2.7 滅活疫苗免疫成果實驗。在此其中包含抗體效價檢測以及免疫攻毒保護試驗兩個步驟。

3 牛病毒性腹瀉病毒滅活疫苗具體免疫效果

有文獻證實，依照BVDV 的病毒基因序列差異，可將其分為BVDV-1 以及BVDV-2 的基因型。 前者又被分為18 個基因亞型，在此其中，在全球范圍內所流行的主要2 個亞型，具體為：BVDV-1a 以及BVDV-1b。 現如今，BVDV-1b 為我國牛群最優勢流行毒株。 自從牛病毒性腹瀉病毒被發現之后，其短時間內在全世界范圍內廣泛流行。 并且這種病毒有著難以防控的特點。由此能夠看出， 全面強化BVDV 疫苗接種是控制牛病毒性腹瀉發生以及發展的重要舉措。 因為當前中國主要依靠進口BVDV 疫苗，且現如今國際市面上所出售的商品化BVDV 疫苗幾乎所有都是通過BVDV-1a 亞型毒株所制備。 BVDV 各個基因型以及亞型都有著一定的交叉保護性。 交叉保護力和毒素自身特點存在一定關聯性。

從一定角度來講，BVDV-1a 亞型疫苗較難針對于中國地區所發生的BVDV-1b 亞型流行毒株不能提供周全保護成效[3]。 因此， 有必要針對于BVDV-1b 亞型流行毒株的新型疫苗開展研究。 當前，滅活疫苗以及弱毒活疫苗為BVDV 常用的疫苗種類。前者免疫期相比較長，而后者的免疫期則較短。 因為該病毒類型會持續化感染。 所以說，BVDV 弱毒疫苗的安全性不佳。 特此，選擇白油視為疫苗佐劑所制備出的BVDV-1b 亞型油乳劑滅活疫苗，能夠在一定程度上提升其安全性。 通過抗體消長規律實驗證實：此類疫苗在免疫4.0mL 后，中和抗體水平會呈現出一個較為顯著的快速上升過程。 并且在維持一段時間之后呈現出緩緩降低趨勢。免疫之后的第30d，綜合抗體效價會達到高峰值，并一直維持其水平。直至第120d 后，呈現出下降表現。 到了免疫后的第180d，綜合效價依舊在6.0lb 以上。 通過免疫攻毒保護實驗，結果證實： 予以免疫該疫苗2.0mL 之后21d 之內， 能夠對BVDV-1b強毒株攻擊起到保護作用。 這種疫苗安全性以及免疫原性均較好，不會造成免疫抑制現象，并且也不存在三度風險，其能夠為BVDV 流行毒株預防控制提供了安全有效的預防方式，因此值得推廣。