養肝茶抗氧化能力測定

馮娟

摘 ?要：為研究養肝茶抗氧化作用，采用NaN02-A1（N03）3-NaOH比色法測定了4種市售養肝茶的總黃酮含量，并以（DPPH）、鐵離子還原能力2種體外抗氧化活性方法測定了市售4種養肝茶的抗氧化活性。結果表明，1#某黃罐養肝茶總黃酮含量最高，達到44.4 mL到100mL，其對DPPH自由基清除能力和鐵離子還原能力也最強，通過總黃酮含量與抗氧化活性比較發現，其抗氧化活性與總黃酮含量成良好的線性正相關。養肝茶抗氧化活性強表明其具有較好的預防上火的作用，總黃酮含量可作為養肝茶預防上火作用的評價指標。

關鍵詞：養肝茶;總黃酮;抗氧化能力;還原能力

1引言

目前市場養肝茶品種很多，但對其抗氧化活性研究較少，特別是對目前市場占有率較大的罐裝養肝茶抗氧化活性研究未見有報道。本文通過DPPH法、鐵離子還原能力法對市場4個品牌罐裝養肝茶抗氧化活性進行研究，從而對養肝茶預防上火作用預測提供依據，同時為養肝茶產品的開發提供依據。

2實驗研究

2.1材料與方法

2.1.1材料與試劑

某黃罐養肝茶、某金罐養肝茶、某紅罐養肝茶、某大罐養肝茶：市售。

三氯乙酸、三氯化鐵、鐵氰化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、無水乙醇、甲醇：天津市寧平化學制品有限公司

DPPH：美國Sigma公司;

蘆丁、Vc：中國食品藥品檢定研究院。

2.1.2儀器與設備

Lambda 35紫外可見分光光度計：PerkinElmer公司。

2.1.3方法

總黃酮含量測定黃酮類化合物檢測方法：

參照《中國藥典》2015版中總黃酮測定及張雪等方法，通過方法學驗證，確定如下NaN02-A1（N03）3-NaOH比色法測定養肝茶中總黃酮含量方法。

2.2清除DPPH自由基能力的測定

參照KUMARAN等方法，經過預實驗，分別取0.5，1，2，3，4，5 mL養肝茶樣品于25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻備用。取上述配好樣品0.5 mL及1 x 10 mol/L DPPH溶液3.5 mL加人同一具塞試管中搖勻，在室溫下密閉靜置30min，用純溶劑作參比，用分光光度計測定其在517 nm波長處的吸光度。

2.3還原能力測定

參照呂樹祥等方法，經過預實驗，分別取1，2，3，4，5，6 mL養肝茶樣品于25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻備用。在2.5 mL pH6.6的磷酸鹽緩沖液中加人上述稀釋后的不同濃度養肝茶溶液2.5 mL，1 g/100 mL的鐵氰化鉀溶液2.5 mL，混合物在50℃恒溫20 min后，再加人2.5 mL 10 g/100 mL的三氯乙酸溶液，然后以3000 r/min離心分離10 min，取上層清液5 mL加蒸餾水5 mL和0.1 g/100 mL FeCl3溶液1 mL，在波長700 nm處測定吸光度，吸光度越高，還原能力越強。

2.4統計學分析

采用SAS8.0統計軟件對數據進行統計學分析，每組實驗中每種養肝茶樣品平行測定3次，采用單因素方差分析不同組之間數據差異性（P<0.05）。

3結果與分析

3.1養肝茶總黃酮含量測定

以吸光度為橫坐標、蘆丁質量濃度（mg/mL）為縱坐標，得回歸方程：y=1.9961x-0.0026（R20.9999）。樣品中總黃酮的含量在標準曲線中查出相應的值，某黃罐養肝茶、某金罐養肝茶、某紅罐養肝茶、某大罐養肝茶的總黃酮含量分別為44.4mg/mL、32.2mg/mL、28.8mg/mL、20.0mg/mL。4種市售養肝茶總黃酮含量大小依次為：某黃罐養肝茶>某金罐養肝茶>某紅罐涼茶>某大罐養肝茶。通過方差分析，1#黃罐養肝茶總黃酮含量遠高于其他品牌養肝茶中總黃酮含量，且差異顯著著（（P<0.01）。1#某黃罐養肝茶較其他3個品牌養肝茶中本草植物種類多為羅漢果、桑葉、淡竹葉?？傸S酮含量差異表明了1#黃罐養肝茶用料量大或者黃酮含量多的植物投料量多。

3.2養肝茶清除DPPH自由基能力

分別配制不同濃度養肝茶樣品，并測定其對清除DPPH自由基清除率，其結果如表2所示。根據每種養肝茶不同濃度對DPPH自由基清除率，繪制每種養肝茶清除DPPH自由基能力曲線圖。

由圖2可知，同一養肝茶樣品隨著反應體系中養肝茶量增大，其清除DPPH自由基能力逐漸增大，并且4種養肝茶在（0.01-0.1）mL范圍內，其線性關系良好。由不同量養肝茶清除DPPH自由基能力可知，1#某黃罐養肝茶清除DPPH自由基能力最強，其次為某金罐養肝茶、紅罐養肝茶，而某大罐養肝茶清除DPPH自由基能力最差。4種養肝茶清除DPPH自由基IC50分別為0.068，0.097，0.098，0.123 mL，其中1#某黃罐養肝茶與其他養肝茶IC50差異極，R著（P<0.01）。配制不同濃度Vc作為對照物，以Vc質量濃度（mg/mL）為橫坐標、清除率為縱坐標，得回歸方程：y1784x-4.771（R20.9998）。

3.3養肝茶還原能力測定

通過還原力測定可以檢測樣品是否為良好的電子供體。具有還原能力的物質能夠還原脂質過氧化過程中產生的中間體，從而表現其抗氧化作用。

由圖3可知，同一養肝茶樣品，隨著反應體系中樣品量增大，其吸光度值越大，即還原能力越強，且在（0.1-0.6）mL線性范圍內，吸光度值與反應體系中樣品量線性關系良好;且不同涼茶，按照同一樣品量下，其吸光度值大小從大到小依次為同仁堂養肝茶>某金罐養肝茶>某紅罐養肝茶>某大罐養肝茶。對照樣品Vc濃度與吸光度關系線性方程為：y=25.1024x+0.0792（R20.9996），根據線性方程計算不同養肝茶在反應體系中0.5 mL樣品相對于Vc的量。

3.4養肝茶總黃酮含量與其抗氧化能力分析

為比較養肝茶總黃酮含量與其抗氧化關系，以不同養肝茶總黃酮含量為橫坐標，分別以不同養肝茶清除DPPH自由基IC50倒數及不同品牌養肝茶0.5 mL還原能力相當于Vc的量為縱坐標，分析其總黃酮含量與其抗氧化能力關系。其中IC50倒數值越大，其抗氧化活性越強;且養肝茶還原能力相當于Vc量值越大，其還原能力越強，抗氧化活性越強。其總黃酮含量與抗氧化能力關系見圖4。

由圖4可知，養肝茶清除DPPH自由基能力及還原能力與總黃酮含量呈線性關系，且線性關系良好。因此養肝茶抗氧化活性與總黃酮含量呈良好的線性關系。總黃酮含量可作為判斷養肝茶抗氧化活性的指標，同時可以作為養肝茶預防上火作用的指標。

4結論與討論

通過研究表明，4個品牌罐裝養肝茶總黃酮含量差異較大，其抗氧化活性差異也較大，因此其預防上火作用也存在差異。1#某黃罐養肝茶總黃酮含量及抗氧化能力遠高于其他品牌養肝茶，分析其原因是其養肝茶中本草原料與其他3個品牌不同，同時也可能其添加本草原料高。而其他3個品牌養肝茶本草原料配方相同，但4#某大罐養肝茶遠低于2#，3#養肝茶，其原因可能是原料投料量不同或提取方法不同導致。目前養肝茶品種較多，但市場混亂，因此即將實現的《植物飲料養肝茶》行業標準將總黃酮含量作為其主要控制指標，此項標準實施將規范養肝茶產業發展，提升養肝茶產品品質。

參考文獻

[1] ?田平平，李仁宙，簡永健，李健明，王杰.連翹茶的強抗氧化活性成分及其抗氧化穩定性[J].中國農業科學，2016，03：543-553.

[2] ?鄭淋.抗氧化肽的構效關系及定向制備的研究[D].華南理工大學，2015.