金錢通淋口服液質量標準研究

吳燕紅，許妍，蔡靖波，丁銀平，鄔秋萍

江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室，江西省藥品與醫療器械質量工程技術研究中心，南昌 330029

金錢通淋口服液是江西省藥物研究所與江西鹿迪制藥有限公司共同研制生產的中藥三類新藥，處方由金錢草、海金沙、忍冬藤、白茅根、石韋五味藥組成，功能為清熱祛濕，利水通淋。用于下焦濕熱所致淋證，癥見尿頻尿急，灼熱刺痛，腰痛拒按，尿色黃赤；急性膀胱炎、急性腎盂腎炎及慢性腎盂腎炎急性發作見上述證候者。近年來有關金錢通淋口服液的藥學研究報道有：工藝方面主要是膜分離技術在金錢通淋口服液中的應用以及正交試驗對金錢通淋口服液進行工藝優選［1-3］；標準方面的研究報道主要是對其中綠原酸的含量進行測定［4-5］；目前尚無對金錢通淋口服液進行標準提高方面的報道。金錢通淋口服液法定標準檢驗項目主要有金錢草和忍冬藤的薄層鑒別以及總黃酮的含量。故本研究擬在對現行標準進行方法驗證的基礎上對其現行質控方法進行全面提升以更科學地控制產品的質量。

1 儀器與試藥

LC-20AD 高效液相色譜儀（日本Shimadzu 公司）；TLC Visualizer 薄層成像系統（瑞士 Camag 公司）；色譜柱：Agela Venusil MP C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；BT25S 型十萬分之一電子天平（賽多利斯）；CP225D 型萬分之一電子天平（賽多利斯）。

金錢草對照藥材（批號：121187-201403）、忍冬藤對照藥材（批號：121069-201004）、馬錢苷對照品（批號：121187-201403，含量：98.3%）均購自中國食品藥品檢定研究院；金錢通淋口服液由江西誠志永豐藥業有限責任公司（批號分別為：160501-1、160502-1、160503-1）和江西青峰藥業有限公司（批號分別為：20160923、20160924、20160925）提供。

硅膠GF254薄層板（10 cm×20 cm,青島海洋化工有限公司）。試劑：乙腈為色譜純，其他均為分析純。

2 方法與結果

2.1 TLC 鑒別

2.1.1 金錢草TLC 鑒別 取本品10 mL，用乙酸乙酯振搖提取3 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘渣加乙醇1 mL 使溶解,作為供試品溶液。另取金錢草對照藥材2 g，加水100 mL，煎煮1 h，放冷，濾過，濾液濃縮至約20 mL，加乙醇30 mL，攪勻，靜置，濾過，濾液蒸至無醇味，加水至約10 mL，同法制成對照藥材溶液。按處方配比，取缺金錢草的其他藥味，按照制法制成陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備缺金錢草的陰性對照溶液。吸取上述三種溶液各10 μL，照薄層色譜法（中國藥典2015 年版四部通則0502）試驗，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.1.2 忍冬藤TLC 鑒別 取本品20 mL，用水飽和的正丁醇振搖提取3 次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2 次，每次20 mL，棄去洗滌液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇1 mL 使溶解，作為供試品溶液。另取忍冬藤對照藥材2 g，加水80 mL，煎煮30 min，放冷，濾過，濾液同法制成對照藥材溶液。按處方配比，取缺金錢草的其他藥味，按照制法制成陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備缺忍冬藤的陰性對照溶液。吸取上述三種溶液各5～10 μL 照薄層色譜法（中國藥典2015年版四部通則0502）試驗，分別點于同一硅膠GF254 薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）10 ℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點。

2.2 忍冬藤的含量測定

2.2.1 色譜條件 采用Agela Venusil MP C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱（200 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（8∶92）；流速：1.0 mL/min；檢測波長分別為236 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2.2.2 對照品溶液的配制 精密稱取馬錢苷對照品11.21 mg，置50mL 量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品母液；再精密量取馬錢苷對照母液5 mL 至25 mL 量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.3 樣品溶液的制備 精密量取本品2 mL，置25 mL 量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4 專屬性實驗 分別吸取供試品溶液、對照品溶液以及陰性對照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，比較供試品溶液、對照品溶液及去忍冬藤的陰性對照溶液色譜圖。結果表明供試品中馬錢苷色譜峰與雜質峰有較好的色譜分離，陰性對照無干擾。

2.2.5 線性關系的考察 精密量取“2.2.2”項下馬錢苷對照品1、2、5、10、20 μL、對照品母液5、10、20 μL，注入液相色譜儀進行測定，以峰面積積分值為縱坐標，以馬錢苷對照品進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為Y=1 579 956.425 1X-2 195.285 4，r=1.000 0，馬錢苷在0.044 08～4.407 7 μg 之間呈良好的線性。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取馬錢苷對照品溶液10 μL，連續進樣6 次，結果馬錢苷峰面積RSD為0.3%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 重復性試驗 取本品（批號:160503-1）6 份，照“2.2.3”項下方法制備樣品測定，結果樣品中馬錢苷的平均含量為6.453 7 mg/g，RSD 為1.5%。

2.2.8 穩定性試驗 精密吸取供試品溶液（批號:160503-1）10 μL，每隔一定時間進樣一次，結果表明樣品溶液中的馬錢苷在24 h 內峰面積無明顯變化，RSD 為0.6%。

2.2.9 回收率試驗 采用加樣回收試驗，精密量取已知含量的本品（批號：160503-1，含馬錢苷0.562 3 mg/mL）1mL，共六份，置25 mL 量瓶中，精密加入馬錢苷對照品溶液（0.275 24 mg/mL）2 mL，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液進行測定，計算回收率，結果回收率良好，適合本品的含量測定。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.2.10 樣品測定 取本品6 批，照“2.2.2”項下方法制備樣品溶液，照“2.2.1”項下測定，結果誠志永豐藥業三批樣品的含量分別為0.574 6、0.574 6、0.562 3 mg/mL，青峰藥業三批樣品含量分別為0.402 4、0.404 2、0.399 2 mg/mL。

3 討論

3.1 金錢草和忍冬藤的薄層色譜鑒別

在對現行標準進行方法驗證中發現金錢草和忍冬藤的薄層鑒別陰性均有干擾，無法避免假陽性結果，故對鑒別進行了修訂。修訂后的方法專屬性強，可很好地對金錢草和忍冬藤的投料質量進行控制。

3.2 含量測定樣品制備方法的考察

試驗考察了超聲處理30 min、超聲處理1 h、直接稀釋三種提取方法對馬錢苷含量的影響，結果顯示三種提取方法差異不大，因直接稀釋操作簡單，故確定本品提取方法為直接稀釋。試驗還考察了甲醇、50%甲醇、乙醇、50%乙醇4 種提取溶劑對含量的影響，結果以50%甲醇為提取溶劑效果最佳。

3.3 關于本品馬錢苷含量的限度

根據本品6 批樣品的測定結果，并參考《中國藥典》2015 年版一部忍冬藤飲片限度［即含馬錢苷（C17H26O10）不得少于0.10%］，因制劑中忍冬藤經水煎煮提取工藝，故制劑中轉移率按50%折算，擬定限度為“本品每1 mL 含忍冬藤以馬錢苷（C17H26O10）計，不得少于0.25 mg”。

本研究對金錢通淋口服液質量標準進行了全面提高，建立的薄層鑒別和含量測定方法專屬性強，操作簡便，能夠很好地對金錢通淋口服液的質量進行控制。