牙周牙髓聯合病變牙周袋內厭氧菌的培養檢測和藥敏試驗

林璐，張春春，沈肖明

龍巖人民醫院 （福建龍巖 364000）

牙周牙髓聯合病變指患牙同時出現牙髓炎癥、牙周破壞的一種細菌感染性疾病[1]。目前，牙周牙髓聯合病變是導致失牙的主要原因，備受人們重視，而徹底消除感染源是該病的主要治療原則。相關研究發現，厭氧菌感染是導致牙周牙髓聯合病變牙周袋發生的主要原因，臨床多采取抗生素治療[2]。基于此，對牙周牙髓聯合病變牙周袋內厭氧菌進行培養檢測，并開展藥敏試驗，可以提高抗生素的治療效果，對改善患者癥狀，提高患者生命質量具有重要意義。本研究對74例牙周牙髓聯合病變患者厭氧菌進行培養檢測，并開展藥敏試驗，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年4月至2017年4月我院收治的牙周牙髓聯合病變患者74例，其中男38例，女36例；年齡24～68歲，平均（46.86±3.14）歲。本研究獲得我院醫學倫理委員會審核批準。

診斷標準：存在牙髓炎、根尖周炎病史；X線檢查顯示根尖周區、牙根側存在齒槽骨破壞的X線透影區，可探到牙周袋、電活力測驗敏感、溫度測驗疼痛（或者無反應）[3]。

納入標準：確診為牙周牙髓聯合病變；患者自愿簽署同意書[4]。

排除標準：3個月內應用過抗生素治療的患者；存在全身性疾病的患者；精神障礙患者[5]。

1.2 細菌培養及檢測

（1）試劑：10%羊血Oxoid布氏血瓊脂培養基，10%脫纖維羊血的Oxoid 厭氧菌基礎瓊脂培養基，青霉素、甲硝唑、克林霉素、阿莫西林（所有藥物試劑均由中國藥品生物制品檢定所提供）。（2）采樣及接種：對患者進行采樣前，先用濃度為3%的過氧化氫（廣東恒健制藥有限公司，國藥準字H44023919，100 ml/瓶）漱口，用紗條隔濕，用碘酊、乙醇棉球對患牙、牙齦進行消毒3次，達到無菌；去除菌斑后，將紙尖放置在深牙周袋中20 s，在1 h內將其置于羊血瓊脂培養基平板上，放入厭氧袋內，進行厭氧培養。（3）培養及鑒定：設置培養溫度為35～38 ℃，時間為48～72 h，CO2、H2、N2濃度分別為5%、10%、85%；應用的培養基為10%脫纖維羊血的Oxoid厭氧菌基礎瓊脂培養基、選擇性培養基（加入卡那霉素100 mg/L），培養后得到的細菌進行耐氧試驗2次，保證所有細菌均為專性厭氧菌；對各致病菌進行分離、革蘭染色，在電子顯微鏡下進行觀察，并應用API20a試劑（厭氧菌鑒定試劑條，江蘇澤源生物科技有限公司）進行生化鑒定；加入甘油、脫纖維羊血（20%、80%）在溫度為-70 ℃下進行保存，留備藥敏試驗。

1.3 藥敏試驗

采用瓊脂稀釋法進行藥敏試驗，將菌落懸浮在厭氧瓊脂Wikins-Chalgren液體培養基（上海信裕生物科技有限公司）中，調整菌落濃度至1×106cfu/ml，借助多點接種器點種于10%脫纖維羊血布氏培養基中（含抗生素），培養時間為45 h，最低抑菌濃度（MIC）為無菌落形成或者形成菌落數量低于5個，用2個10%羊血布氏平板（不含抗生素）分別作為有氧對照、厭氧對照，質控菌株為 ATCC25285（脆弱擬桿菌）。以美國臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）標準為依據，對各抗生素的耐藥濃度判斷如下：青霉素、甲硝唑、克林霉素、阿莫西林最低抑菌濃度分別為不低于2 mg/L、32 mg/L、8 mg/L、16 mg/L[6]。

2 結果

2.1 厭氧菌分布結果

74例牙周牙髓聯合病變患者經耐氧試驗，結果顯示，厭氧菌檢出率為100%，分離厭氧菌株77株，其中牙周源性牙周牙髓聯合病變培養的厭氧菌37株（48.05%），牙髓源性牙周牙髓聯合病變培養的厭氧菌40株（51.95%），經生化鑒定，以鏈球菌屬最多，其次為普雷沃屬，見表1。

表1 厭氧菌分布結果[株（%）]

2.2 藥敏試驗結果

藥敏試驗結果顯示，克林霉素耐藥最高，其次為青霉素，見表2。

表2 藥敏試驗結果

3 討論

牙髓組織和牙周組織在解剖學方面是相互溝通的，因此兩者的感染和病變可以互相影響和擴散，導致聯合病變的發生。牙周牙髓聯合病變的發生包括3種：（1）牙周發生細菌感染進而導致牙髓病變；（2）牙髓病變感染導致牙周病變；（3）牙周、牙髓獨立存在，并出現交叉感染[7]。牙周牙髓聯合病變的發生對人們的牙齒健康具有極大的危害，且影響人們的生活與工作，因此，采取積極的治療至關重要[8]。在對患者進行治療時，選取有效的抗生素將直接影響整體療效，因此，治療前需要掌握致病菌分布情況，并進行藥敏試驗，找出最敏感的抗生素，從而合理應用，達到治療的目的。

本研究結果顯示，分離出的77株厭氧菌株，經生化鑒定，以鏈球菌屬最多，其次為普雷沃屬；耐藥試驗方面，克林霉素耐藥最高，分析原因在于，克林霉素可以滲透牙骨質，對生物膜形成具有抑制作用[9-10]。

綜上所述，牙周牙髓聯合病變與厭氧菌關系密切，藥敏試驗可以找出敏感的治療藥物，為臨床治療提供借鑒依據。