抗核抗體及抗核抗體譜與反復體外受精-胚胎移植失敗的相關性分析

陸碧玉 黃誠 黃李霜 伍萍芝 蒙瞻瞻 嚴提珍( 通訊作者)

（柳州市婦幼保健院<柳州市生殖與遺傳研究所；廣西科技大學附屬婦產醫院、兒童醫院> 廣西 柳州 545001）

反復種植失敗（repeated/recurrent implantation failure，RIF）即指不孕癥患者經歷多個體外受精-胚胎（in vitro fertilization，IVF）/卵細胞漿內單精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）周期并移植了多枚優質胚胎而未發生胚胎種植或臨床妊娠[1]。El-Toukhy 等[2]等將反復種植失敗（repeated implantation failure，RIF）定義為≥2 次或3 次胚胎移植周期的失敗，或累積移植＞10 個優質胚胎仍未成功。IVF/ICSI 助孕治療中 RIF 的發生率可達5%～10%[3]。自身免疫性疾病已被證明與特發性不育、卵巢早衰、子宮內膜異位和多囊卵巢綜合征等疾病有關，并且會影響生育的各個階段，包括卵巢和睪丸衰竭到著床失敗和妊娠丟失[4]。本文旨在闡明抗核抗體及抗核抗體譜和RIF 的相關性。

1.資料和方法

1.1 一般資料

選取2017 年7 月—2019 年12 月來我院就診的200 例進行IVF 和/或ICSI 移植手術后，兩次或更多次植入都失敗的患者作為研究組，本方案經倫理學委員會批準，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。納入標準：排除了雙方染色體異常，女方子宮形態異常、自身免疫性疾病，研究組年齡22 歲到48 歲。同期100 例IVF/ICSI 手術后妊娠成功孕婦作為對照組，對照組年齡23 歲到42 歲，成功標準為：移植后B 超確定為臨床妊娠；持續妊娠＞13W。檢測兩組患者的血清抗核抗體（ANA）和抗核抗體譜（ANAs）。

1.2 試劑和檢測方法

流式熒光免疫法所用試劑由美國宙斯科技公司提供，儀器為美國Luminex 200。該試劑盒可檢測抗核抗體（ANA）和9 項抗核抗體譜（ANAs），包括SSA、SSB、Sm、RNP、Scl 70、Jo 1、Cent B、Histone、dsDNA。嚴格參照試劑說明書操作，以測定值≥100U/ml 判為陽性。

1.3 觀察指標

觀察研究組和對照組的血清抗核抗體和抗核抗體譜陽性例數和陽性率。

1.4 統計學方法

采用SPSS19.0 統計學軟件對數據進行統計分析，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05 表示差異具有統計學意義，用百分率表示研究組和對照組抗核抗體譜檢測分布情況。

2.結果

2.1 研究組不同種植失敗次數的病例數分布情況

種植失敗2 次有122 例，種植失敗3 次有51 例，種植失敗4 次有24 例，種植失敗5 次有2 次，種植失敗5 次以上有1 例。

2.2 兩組ANA 和ANAs 檢測結果比較

研究組和對照組ANA 與ANAs 陽性例數和陽性率比較，研究組共檢出ANA 陽性41 例，陽性率為20.5%；對照組檢出陽性數為6 例，陽性率為6%；研究組檢出ANAs 陽性22 例，陽性率為11.0%，對照組檢出陽性2 例，陽性率為2.0%。兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組ANA 與ANAs 陽性數和陽性率分布情況[n（%）]

2.3 ANAs 檢測分布情況

ANAs 共檢測了7 項，研究組7 項均有陽性例數，總ANAs 檢出陽性數為22 例，陽性率為11%。對照組中僅RNP 這一項有陽性例數，ANAs 的陽性檢出率為2%，兩組比較差異有統計學意義（χ2=7.34，P＜0.05）。見表2。

表2 研究組和對照組抗核抗體譜檢測分布情況[n（%）]

3.討論

ANA 又稱抗核酸抗原抗體，是一系列抗細胞核抗原自身抗體的總稱，能與動物細胞核發生反應，主要存在于血清中。它們被定義為與細胞核內某些結構結合的分子，包括DNA、RNA、蛋白質或其復合物。抗核抗體譜（ANAs）是具有結合和破壞細胞核內某些結構的能力的特定類型的自身抗體[5]。本文中RIF 實驗組中ANA 和ANAs 陽性率分別為20.5%和6%，明顯大于對照組的陽性率11%和2%。而近幾年來，RIF 和ANA/ANAs 的研究中， Motak-Pochrzest H 等[6]的研究中，與對照組的血清ANA 陽性率（10.5%）相比，研究組中的ANA 陽性率高達43.1%，該研究顯示ANA 是復發植入失敗患者血清中最常檢測到的自身抗體。 Birkenfeld A 等[7]認為ANA 陽性患者植入失敗的主要原因可能與卵母細胞和胚胎受損有關。李穎等[8]的研究中ANA 在首次體外受精-胚胎移植的不孕患者中的陽性率為35.18%，但此研究未區分病例是否為反復種植失敗患者。本文的反復種植失敗患者中的ANA 陽性率（20.5%），比之前的幾項研究中的陽性率要偏低。存在差異這可能是與研究對象的不同及不同地區、民族人群中存在區別，以及檢測方法的差別有關。但這些研究都提示ANA 與種植失敗有著密切的關系，引起IVF-ET 患者種植后更壞的結局。

ANA 與ANAs 的陽性檢出率存在有差異（20.5%和11%），主要因為抗核抗體譜的型別眾多，本次只檢測ANAs 中的7 種，當出現ANA 陽性而ANAs 非陽性時，可能是本實驗室未檢測到的其它種類的ANAs。其中檢出最高的ANAs 為抗RNP，陽性率為3%（6/200），而Sm、Histone 未見檢出陽性病例。而在對照組中檢測到的抗核抗體譜均為抗RNP。研究組中未檢出抗核抗體譜中的抗Sm、Histone 的可能原因：①病例數不夠，可以繼續加大病例數繼續研究，觀察是否會出現這兩類抗核抗體譜陽性病例；②在反復種植失敗患者中此兩類抗核抗體譜確實無陽性，無研究價值，可以不用在反復種植失敗病例中檢測這兩項抗核抗體譜。目前對于ANAs 對于體外受精-胚胎移植影響的研究罕見，Fan J等[9]研究中提示抗dsDNA 與體外受精-胚胎移植結局有關，導致反復種植失敗。ANAs 具體檢測種類的確定需要首先研究哪種型別的抗核抗體譜與外受精-胚胎移植有關，進而確定在反復種植失敗患者中檢測何種ANAs，以便探討ANAs 對IVF-ET 結局的影響機制。

本文采用多重微球流式熒光免疫技術對ANA 及ANAs 進行檢測，此方法能半定量或定量檢測特異性自身抗體，尚曉瑩等[10]研究表明流式熒光免疫法的診斷靈敏度雖然低于免疫印跡法與間接免疫熒光法，但特異度高于后兩者，而間接免疫熒光法法檢測ANA 的靈敏度高于其余兩方法。運用流式熒光免疫法檢測ANA及ANAs 特異度更高，且其自動化程度高，檢測速度快，能幫助評估反復種植失敗患者的病情變化、監測治療效果，指導臨床合理用藥，因此可以用多重微球流式熒光免疫法替代免疫印跡法來檢測ANA 及ANAs。