長春地區(qū)成人血清甲胎蛋白、癌胚抗原參考區(qū)間適用性驗證

朱學(xué)彤， 王凱瑾， 周 琪， 許建成

吉林大學(xué)第一醫(yī)院 a.檢驗科； b.新生兒科， 長春 130021

血清甲胎蛋白和癌胚抗原為臨床常用的消化系統(tǒng)腫瘤標志物。血清甲胎蛋白是原發(fā)性肝癌特異性較強的標志物，應(yīng)用于肝癌的早期監(jiān)測、診斷及預(yù)后判斷，在其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤中也有不同程度增高[1]。血清癌胚抗原在結(jié)直腸等消化系統(tǒng)癌組織中顯著增高，是一種敏感性較高的廣譜性腫瘤標志物[2]。參考區(qū)間是分析檢驗指標必不可少的依據(jù)，能夠幫助臨床醫(yī)生診斷疾病、指導(dǎo)用藥、監(jiān)測病情、判斷預(yù)后等。2018年12月12日國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T 645.2-2018[3]，并于2019年6月1日正式實施，此標準的發(fā)布和實施對血清甲胎蛋白和癌胚抗原參考區(qū)間的建立和應(yīng)用具有重要的指導(dǎo)意義。根據(jù)WS/T 645.2-2018和EP28-A3c[4]要求，地區(qū)、人群、種族、飲食、性別、年齡等差異可能影響參考區(qū)間的應(yīng)用，因此引用新參考區(qū)間時需要進行適用性驗證。本研究用體檢者血清甲胎蛋白和癌胚抗原測定值，驗證國標發(fā)布的參考區(qū)間是否適用于長春地區(qū)。

1 資料與方法

1.1 研究對象 驗證個體均來自2016年1月-2019年4月本院體檢中心，且符合WS/T 645.2-2018體格檢查:(1)無急、慢性疾病；(2)收縮壓<140 mm Hg，舒張壓<90 mm Hg；(3)BMI<28 kg/m2且≥18. 5 kg/m2；(4)6個月內(nèi)未進行手術(shù)，4個月內(nèi)未獻血、輸血或大量失血，2周內(nèi)未服用藥物；(5)女性未處于妊娠或哺乳期；(6)無酗酒、嗜煙；(7)心電圖無明顯異常；(8)B超結(jié)果顯示肝臟內(nèi)部回聲，大小、形態(tài)無明顯異常。實驗室排除標準:(1)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，男性>50 U /L，女性>40 U/L；(2)血清白蛋白<40 g/L；(3)血清肌酐，男性20～59歲>97 μmol/L，60～79歲>111 μmol/L；女性20～59歲>73 μmol/L，60～79歲>81 μmol/L；(4)空腹血糖≥7.0 mmol/L；(5)白細胞計數(shù)<3.5×109/L或>9.5×109/L；(6)血紅蛋白，男性<130 g/L，女性<115 g/L；(7)總膽固醇≥6.22 mmol/L或甘油三酯≥2. 26 mmol/L；(8)HBsAg、抗-HCV、抗-HIV任意一項陽性。符合排除標準體檢者共計5547例，剔除離群值后剩余5420例，其中男性2636例，女性2784例。根據(jù)年齡(10歲為間隔)和性別將數(shù)據(jù)劃分為12個亞組：20～29歲856例(男295例、女561例)，30～39歲1562例(男624例、女938例)，40～49歲1712例(男861例、女851例)，50～59歲853例(男552例、女301例)，60～69歲280例(男202例、女78例)，70～79歲157例(男102例、女55例)。本研究方案經(jīng)由吉林大學(xué)第一醫(yī)院倫理委員會審批(批號：2019-249)。

1.2 儀器與試劑 本研究采用Roche Cobas E602全自動電化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)，試劑、校準品購自羅氏診斷產(chǎn)品有限公司、質(zhì)控品購自美國伯樂有限公司。

1.3 標本采集 研究對象采血前3天飲食及行動正常，空腹8 h后于次日上午7∶30-9∶30靜坐采集靜脈血2 ml，常溫送至檢驗科，采血管為紅色分離膠-促凝劑真空采血管，由廣州陽普醫(yī)療科技股份有限公司生產(chǎn)。

1.4 質(zhì)量控制 Roche Cobas E602全自動電化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)每年均參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質(zhì)評且合格，每個項目使用高、中、低質(zhì)控品測定，室內(nèi)質(zhì)控的變異系數(shù)在允許范圍內(nèi)(甲胎蛋白室內(nèi)變異系數(shù)<8.33%，癌胚抗原室內(nèi)變異系數(shù)<8.33%)。2016年-2019年均進行精密度、分析測量范圍、臨床可報告范圍、攜帶污染等檢測系統(tǒng)性能驗證。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 利用SPSS22.0軟件分析數(shù)據(jù)。采用Dixon方法剔除異常值：R為極值(最大值與最小值差值)，D為最大值和最小值與相鄰數(shù)值之差，若D/R≥1/3，則將最大值或最小值剔除，重復(fù)此過程直至剔除所有離群值。剔除離群值后每個亞組保持至少20例健康成人個體數(shù)據(jù)，將各亞組數(shù)據(jù)與國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的參考區(qū)間比對，若落在參考區(qū)間內(nèi)數(shù)據(jù)>90%則通過驗證；若<90%則需要重新選擇至少20例合格個體按上述標準驗證。K-S檢驗進行正態(tài)性檢驗，兩組比較采用Mann-WhitneyU檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 驗證血清甲胎蛋白、癌胚抗原參考區(qū)間 12個亞組落在參考區(qū)間內(nèi)的數(shù)據(jù)均>90%，血清甲胎蛋白符合率最低94.9%，最高100%；血清癌胚抗原符合率最低95.9%，最高100%，驗證通過(表1)。

2.2 分析血清甲胎蛋白、癌胚抗原分布特征 血清甲胎蛋白在30～39歲存在性別差異(Z=-4.51,P<0.05)；血清癌胚抗原在20～29歲、30～39歲、40～49歲、50～59歲、60～69歲均存在性別差異(Z值分別為-13.45、-18.15、-17.34、-10.82、-3.65，P值均<0.05)(表1)。

血清甲胎蛋白在女性20～69歲隨年齡緩慢上升，而男性隨年齡變化趨勢不明顯，70～79歲男性及女性均顯著下降(圖1)；血清癌胚抗原在女性20～79歲、男性20～69歲隨年齡上升，女性檢測值始終低于男性(圖2)。

表1 長春地區(qū)成人血清甲胎蛋白、癌胚抗原參考區(qū)間的驗證

注：與同年齡段女性比較，1)P<0.05。

3 討論

建立參考區(qū)間是一項耗時長、費用高、工作量大的工程，針對不同實驗室、檢測系統(tǒng)、檢測方法、檢測項目建立不同的參考區(qū)間并不現(xiàn)實，故部分臨床實驗室選擇生產(chǎn)廠家的試劑說明書作為參考區(qū)間。國家衛(wèi)生健康委員會于2018年發(fā)布WS/T 645.2-2018，此項標準的發(fā)布明確定義了包括血清甲胎蛋白、癌胚抗原在內(nèi)5種腫瘤標志物的參考區(qū)間，為參考區(qū)間的建立和應(yīng)用提供指導(dǎo)?？紤]到不同地區(qū)、不同檢測系統(tǒng)的差異，各臨床實驗室在引用參考區(qū)間時需要驗證以確認參考區(qū)間的可靠性和適用性，從而判斷是否可應(yīng)用于本地區(qū)。

本研究使用羅氏全自動電化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)，以體檢中心健康人群為研究對象，納入驗證個體5420例，年齡20～79歲，以10歲為間隔劃分為6組，每組再以性別劃分，最終得到12個亞組(每組數(shù)據(jù)均超過20例)。WS/T 645.2-2018用羅氏檢測系統(tǒng)建立的血清甲胎蛋白參考區(qū)間≤7 ng/ml，無性別差異；血清癌胚抗原參考區(qū)間≤5 ng/ml，無性別差異，按照行業(yè)標準文件進行驗證，血清甲胎蛋白、癌胚抗原落入?yún)⒖紖^(qū)間范圍內(nèi)的數(shù)據(jù)均>90%，符合驗證通過標準，因此國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的血清甲胎蛋白和癌胚抗原可以應(yīng)用于長春地區(qū)。

本研究發(fā)現(xiàn)，血清甲胎蛋白和癌胚抗原存在年齡及性別差異，血清甲胎蛋白性別差異不明顯，70歲前女性隨年齡緩慢上升；血清癌胚抗原70歲前性別差異明顯，男性高于女性，這與國內(nèi)部分文獻相符[5-6]，形成這種性別差異的原因可能與吸煙、飲酒密切相關(guān)[7]。本研究中發(fā)現(xiàn)70～79歲血清甲胎蛋白顯著下降，血清癌胚抗原男女差異顯著減小，與部分研究文獻存在差異[8]，可能是由于該年齡段樣本數(shù)量過少或地區(qū)差異引起。

參考區(qū)間是判斷生物個體健康與否的重要指標，準確且適用的參考區(qū)間對臨床意義重大[9]，新發(fā)布的參考區(qū)間行業(yè)標準以中國人群為研究對象重新定義參考區(qū)間，不同地區(qū)引用此參考區(qū)間時需進行驗證。本研究首次驗證了血清甲胎蛋白和癌胚抗原參考區(qū)間適用長春地區(qū)。