不同時(shí)機(jī)針刺對卵巢早衰模型大鼠中樞及外周激素水平的影響

陳瀅如,董峰,李春華,陳虹,肖濤

·動(dòng)物實(shí)驗(yàn)·

不同時(shí)機(jī)針刺對卵巢早衰模型大鼠中樞及外周激素水平的影響

陳瀅如1,董峰1,李春華2,陳虹3,肖濤1

(1.中國中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所,北京 100700;2.首都醫(yī)科大學(xué)電力教學(xué)醫(yī)院,北京 100073;3.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院,咸陽 712000)

探討不同時(shí)機(jī)針刺對卵巢早衰模型大鼠中樞及外周激素水平的影響。50 只清潔級性成熟未交配雌性SD大鼠,隨機(jī)分為模型組(10只)、預(yù)針刺組(10只)、針刺組(10只)、佐劑組(5只)、空白組(5只)。模型組、針刺組及預(yù)針刺組連續(xù)15 d腹腔注射去氧乙烯基環(huán)己烯(4-vinylcyclohexene diepoxide, VCD)160 mg/kg建立卵巢早衰動(dòng)物模型;佐劑組連續(xù)15 d注射同等劑量佐劑二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide, DMSO);預(yù)針刺組在開始造模時(shí)即開始針刺,造模成功后繼續(xù)治療4周;針刺組于造模成功后開始針刺治療,連續(xù)治療4周;空白組不干預(yù)。治療結(jié)束后,采用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)試劑盒檢測各組下丘腦促性腺激素釋放激素(gonadotropin release hormone, GnRH)、垂體促卵泡生成素(follicle stimulatin hormone, FSH)、垂體促黃體生成素(luteotropic hormone, LH),卵巢中促卵泡生成素受體(follicle stimulatin hormone receptor, FSHr)、促黃體生成素受體(luteotropic hormone receptor, LHr)、雌激素受體(estradiol receptor, Er)、雌二醇(estradiol, E2),血清中GnRH、FSH、LH和E2水平。VCD腹腔注射可以造成大鼠卵巢早衰的動(dòng)物模型,成功率為83.3%。與空白組比較,模型組大鼠下丘腦GnRH含量升高(＜0.05),垂體FSH和LH含量均升高(＜0.05);血清中 GnRH、FSH、LH含量均升高(＜0.05),E2含量降低(＜0.05);卵巢組織中FSHr、LHr含量均升高(＜0.05),Er和E2含量均降低(＜0.05)。與模型組比較,預(yù)針刺組和針刺組大鼠下丘腦GnRH含量降低(＜0.05),垂體FSH含量降低(＜0.05);預(yù)針刺組和針刺組大鼠血清中GnRH、FSH含量均降低(＜0.05);預(yù)針刺組和針刺組大鼠卵巢組織中FSHr、LHr含量均降低(＜0.05),E2含量升高(＜0.05)。 預(yù)針刺組和針刺組各項(xiàng)指標(biāo)組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05)。針刺對POF模型大鼠中樞及外周激素水平均可產(chǎn)生一定的調(diào)節(jié)作用,不同時(shí)機(jī)針刺組間比較無差異。

針刺療法;卵巢早衰模型;大鼠;促性腺激素釋放激素;促卵泡生成素;促黃體生成素;促黃體生成素受體;雌激素受體;雌二醇

卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)是指女性在40歲以前發(fā)生的自然絕經(jīng)[1],伴隨不孕、更年期綜合征等一系列健康問題[2]。實(shí)驗(yàn)室檢查表現(xiàn)為雌激素(estradiol, E2)水平下降、促性腺激素升高(促卵泡生成素,follicle stimulatin hormone, FSH)升高,其發(fā)病與遺傳、放化療、卵巢手術(shù)史、自身免疫功能異常、化學(xué)物質(zhì)及不良生活方式等相關(guān)[3-6]。

研究認(rèn)為下丘腦-垂體-卵巢-顆粒細(xì)胞通路在POF發(fā)病中具有重要作用,下丘腦合成的促性腺激素釋放素(gonadotropin release hormone, GnRH)調(diào)控促性腺激素(FSH/LH)的合成與分泌;促性腺激素(FSH/LH)到達(dá)卵巢后,調(diào)節(jié)卵泡的生長、發(fā)育、成熟以及排卵[7-9]。前期臨床觀察發(fā)現(xiàn)針刺有助于降低POF患者血清FSH、LH水平,升高血清E2水平,并可緩解患者精神壓力,改善圍絕經(jīng)期癥狀[10-11]。而針刺治療本病的機(jī)制研究報(bào)道尚不多,因此,有必要進(jìn)行相關(guān)的基礎(chǔ)研究,探討針刺治療POF的可能作用機(jī)制,為臨床推廣針灸治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本研究通過腹腔注射氧乙烯基環(huán)己烯建立POF大鼠動(dòng)物模型,觀察不同時(shí)機(jī)針刺對模型大鼠中樞及外周激素水平的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

性成熟未交配雌性SD大鼠40只,清潔級,體質(zhì)量210～220 g,周齡8周。在安靜環(huán)境下分籠飼養(yǎng)于屏障環(huán)境實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室。實(shí)驗(yàn)大鼠由中國食品藥品檢定研究院提供,動(dòng)物許可證號(hào)SCXK(京)2014-0013。

1.2 主要試劑與儀器

去氧乙烯基環(huán)己烯(CAS 106-87-6,上海麥克林生化科技有限公司),二甲基亞砜(CAS 67-68-5,上海麥克林生化科技有限公司),ELISA試劑盒,GnRH(CSB- E08037R),FSH(CSB-E06869R),LH(CSB-E12654R),FSHr(CSB-E09673R),LHr(CSB-139832R),Er(CSB-06848R),E2(CSB-E05110R)武漢華美生物工程有限公司,瑞氏-姬姆薩染色套組(G1007,武漢谷歌生物科技有限公司)。全波長掃描式多功能酶標(biāo)儀(型號(hào)Thermo VARIOSKAN FLASH,美國Thermo公司),離心機(jī)(型號(hào) Eppendonf 5430R,德國Sigma公司),生化培養(yǎng)箱(型號(hào)LRH-70中國上海一恒科技有限公司),制冰機(jī)(型號(hào)XB70-FZ,中國寧波格蘭特制冷設(shè)備制造有限公司),水純化系統(tǒng)(型號(hào)Milli-Q Integral,法國Merck Milipore公司)。

1.3 模型選擇

目前較為常見的POF動(dòng)物模型有化療藥物模型、自身免疫性疾病模型、半乳糖血癥模型、基因敲除模型、環(huán)境化學(xué)物質(zhì)模型等,每種動(dòng)物模型都側(cè)重于不同的病因?qū)W,有著各自的獨(dú)特性和局限性[12]。本研究所采用的模型,即環(huán)境化學(xué)物質(zhì)VCD模型,是近幾年逐漸被關(guān)注的一種模型,在國內(nèi)的應(yīng)用尚不廣泛。該造模方法能選擇性破壞雌鼠和靈長類動(dòng)物的原始卵泡和初級卵泡,對次級卵泡和竇卵泡無影響[13],其所造成的因卵泡耗竭而致的卵巢早衰與生理性卵巢功能衰退表現(xiàn)類似;該大鼠模型成功地復(fù)制了人類絕經(jīng)前期及絕經(jīng)后期的狀態(tài),且對性腺以外的器官幾乎無影響[14],與臨床中POF患者多為特發(fā)性[15]的特點(diǎn)吻合。課題組前期臨床研究所納入的POF患者均是特發(fā)性(50%的發(fā)病病例無明確的病因,被稱為特發(fā)性或原發(fā)性POF),為了使本次研究選擇的POF模型大鼠更好地模擬臨床,故選擇VCD模型。

1.4 動(dòng)物分組與模型制備

根據(jù)體質(zhì)量隨機(jī)分為空白對照組(5只)、佐劑組(5只)、模型組(10只)、預(yù)針刺組(10只)、針刺組(10只)。空白對照組大鼠只進(jìn)行抓取,不施加其他干預(yù)措施;佐劑組大鼠每天注射同等劑量DMSO 5 mL/kg,連續(xù)腹腔注射15 d;模型組、預(yù)針刺組、針刺組進(jìn)行POF模型制備。

模型制備:將VCD溶于佐劑DMSO中,配成32 mg/mL的濃度,以5 mL/kg(即160 mg/kg)的劑量腹腔注射,連續(xù)注射15 d。VCD腹腔注射結(jié)束后,連續(xù)5 d對雌性SD大鼠進(jìn)行陰道分泌液采樣涂片。經(jīng)瑞氏染色后光鏡下觀察脫落細(xì)胞(見圖1)。動(dòng)情前期為大量不規(guī)則形有核上皮細(xì)胞,偶見少量角化上皮細(xì)胞;動(dòng)情期見大量不規(guī)則形角化上皮細(xì)胞,多成堆積狀互聯(lián)成片;動(dòng)情后期見不規(guī)則角化上皮細(xì)胞、有核上皮細(xì)胞和白細(xì)胞;動(dòng)情間期見大量白細(xì)胞、少量有核上皮細(xì)胞,偶見角化上皮細(xì)胞。鏡下連續(xù)5 d呈現(xiàn)無規(guī)律動(dòng)情周期變化則可確定為POF大鼠模型建立。經(jīng)篩查共計(jì)造模成功大鼠25只。

陰道涂片操作:左手食指和中指壓住大鼠頸部,掌根部壓于腰背部限制活動(dòng),右手翻起尾巴露出陰道口,將鼠尾交與左手拇指與食指固定,右手用沾有生理鹽水的棉簽在陰道口稍作停留以讓雌鼠適應(yīng),稍后輕輕插入大鼠陰道壁緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)半圈,抽出棉簽并將棉簽上的附著物均勻涂在載玻片上鏡檢。

瑞氏-姬姆薩染色操作:①滴加瑞氏-姬姆薩A溶液于涂片上,并讓染液覆蓋整個(gè)標(biāo)本涂片染色0.5 min;②再將瑞氏-姬姆薩B溶液滴加于A液上面(滴加量為A液的2～3倍),以嘴或洗耳球吹出微風(fēng)使液面產(chǎn)生漣漪狀,使兩液充分混合,染色2～5 min;③水洗、干燥、封片、鏡檢。

圖1 陰道脫落細(xì)胞(×200)

1.5 干預(yù)方法

模型組,每天腹腔注射VCD 5 mL/kg,連續(xù)注射15 d;佐劑組,每天注射同等劑量DMSO 5 mL/kg,連續(xù)注射15 d。預(yù)針刺組與針刺組給予針刺干預(yù);預(yù)針刺組,自開始造模即同步開始針刺治療,連續(xù)治療6周(治療結(jié)束時(shí)間同針刺組);針刺組,于造模成功后開始針刺,連續(xù)治療4周;在針刺組開始進(jìn)行治療時(shí),空白對照組、模型組、佐劑組只進(jìn)行抓取,不進(jìn)行任何治療。

針刺方法:應(yīng)用華佗牌一次性無菌針灸針(0.25 mm×25 mm,0.20 mm×13 mm),按全國協(xié)編教材《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》大鼠標(biāo)準(zhǔn)穴位圖譜定位。穴位分兩組,關(guān)元、足三里(雙)、三陰交(雙);百會(huì)、次髎(雙),各穴位直刺或平刺3～5 mm。兩組穴位交替使用。同側(cè)足三里、三陰交為一組,采用雙側(cè)兩組電針,次髎穴采用電針,選連續(xù)波,強(qiáng)度0.1～0.3 mA,治療頻次為每周3次,療程為4周。

1.6 指標(biāo)檢測

實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉麻醉,經(jīng)腹主動(dòng)脈取血,分別取雙側(cè)卵巢、下丘腦、垂體。

1.6.1 血清GnRH、FSH、LH、E2含量檢測

實(shí)驗(yàn)大鼠戊巴比妥麻醉,經(jīng)腹主動(dòng)脈取血4℃靜置30 min后,低溫3000 r/min離心取上清低溫保存。血清室溫解凍后,1000 r/min離心15 min,①將所需試劑室溫平衡至少30 min;②取出酶標(biāo)板,設(shè)立空白孔(不加任何液體)、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,每孔上樣50mL;③每孔加入酶結(jié)合物50mL,再按同樣順序加入抗體50mL,充分混勻,貼上不干膠封片,37℃孵育1 h;④手工洗板,重復(fù)3次;⑤每孔加顯色劑A液50mL,顯色劑B液50mL,振蕩混勻后,37℃避光顯色15 min,每孔加終止液50mL;⑥在反應(yīng)終止10 min內(nèi)用酶標(biāo)儀在450 nm波長依序測量各孔光密度(OD值);⑦按標(biāo)準(zhǔn)品及OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,獲得直線回歸方程式,計(jì)算出樣本實(shí)際濃度。

1.6.2 組織GnRH、FSH、LH、FSHr、LHr、Er、E2含量檢測

實(shí)驗(yàn)大鼠戊巴比妥麻醉,經(jīng)腹主動(dòng)脈取血后,依次取大鼠垂體、下丘腦、雙側(cè)卵巢,經(jīng)液氮迅速降溫后移至低溫冰箱保存。①組織塊稱重(50～500 mg),用鑷子移入玻璃勻漿管中;②用移液槍量取預(yù)冷的0.86%生理鹽水于玻璃勻漿管中(在冰水浴中進(jìn)行操作),生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍;③左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次(6～8 min),充分研碎,使組織勻漿化;④將制備好的10%勻漿用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)4000 r/min離心15 min;⑤取上清。組織上清中激素含量的ELISA檢測步驟同上。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行處理。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。數(shù)據(jù)正態(tài)性分布采用-(檢驗(yàn)),多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析,組間均數(shù)兩兩比較,方差齊時(shí)采用法,方差不齊時(shí)采用’3法。a=0.05。

2 結(jié)果

2.1 模型評價(jià)

給予VCD腹腔注射的30只大鼠動(dòng)情周期均出現(xiàn)不同程度的紊亂,多表現(xiàn)為動(dòng)情間期,其中有25只大鼠在連續(xù)給藥后出現(xiàn)無規(guī)律動(dòng)情周期變化,其中模型組9只、預(yù)針刺組8只、針刺組8只,有5只大鼠仍可觀察到類似規(guī)律動(dòng)情周期的變化,造模成功率為83.3%。在實(shí)驗(yàn)過程中模型組和針刺組各有1只大鼠死亡。

2.2 各組大鼠下丘腦、垂體激素水平變化

各組數(shù)據(jù)-(檢驗(yàn))均＞0.05,為正態(tài)分布,各數(shù)據(jù)方差齊性檢驗(yàn)()均＞0.05,方差齊。

由表1可知,與空白組比較,模型組大鼠下丘腦GnRH含量升高(＜0.05),垂體FSH和LH含量均升高(＜0.05);佐劑組下丘腦GnRH含量、垂體FSH和LH含量均無明顯變化(＞0.05)。與模型組比較,預(yù)針刺組和針刺組大鼠下丘腦GnRH含量降低(＜0.05),垂體FSH含量降低(＜0.05),垂體LH含量有下降但無明顯差異(＞0.05)。與預(yù)針刺組比較,針刺組大鼠下丘腦GnRH含量、垂體FSH和LH含量均無明顯差異(＞0.05)。

表1 各組大鼠下丘腦、垂體激素水平比較 (±s)

注:與空白組比較1)＜0.05;與模型組比較2)＜0.05

2.3 各組大鼠血清中激素水平變化

各組數(shù)據(jù)-(檢驗(yàn))均＞0.05,為正態(tài)分布,各數(shù)據(jù)方差齊性檢驗(yàn)()均＞0.05,方差齊。

由表2可知,與空白組比較,模型組大鼠血清中GnRH、FSH、LH含量均升高(＜0.05),E2含量降低(＜0.05);佐劑組大鼠血清中GnRH、FSH、LH含量均無明顯變化(＞0.05)。與模型組比較,預(yù)針刺組和針刺組大鼠血清中GnRH、FSH含量均降低(＜0.05)。與預(yù)針刺組比較,針刺組大鼠血清中GnRH、FSH、LH、E2含量均無明顯變化(＞0.05)。

表2 各組大鼠血清中GnRH、FSH、LH、E2含量比較 (±s)

注:與空白組比較1)＜0.05;與模型組比較2)＜0.05

2.4 各組大鼠卵巢組織中激素水平變化

各組數(shù)據(jù)-(檢驗(yàn))均＞0.05,為正態(tài)分布,各數(shù)據(jù)方差齊性檢驗(yàn)()均＞0.05,方差齊。

由表3可知,與空白組比較,模型組大鼠卵巢組織中FSHr含量和LHr含量均升高(＜0.05),Er含量和E2含量均降低(＜0.05);佐劑組大鼠卵巢組織中GnRH、LHr、Er含量和E2含量均無明顯變化(＞0.05)。與模型組比較,預(yù)針刺組和針刺組大鼠卵巢組織中FSHr含量和LHr含量均降低(＜0.05),E2含量升高(＜0.05)。與預(yù)針刺組比較,針刺組大鼠卵巢組織中FSHr、LHr、FSHr、LHr含量均無明顯變化(＞0.05)。

表3 各組大鼠卵巢組織中FSHr、LHr、Er、E2含量比較 (±s)

注:與空白組比較1)＜0.05;與模型組比較2)＜0.05

3 討論

卵巢早衰是典型的異質(zhì)性疾病,病因復(fù)雜,機(jī)制尚且不明,造模方法多樣,每種動(dòng)物模型都側(cè)重于不同的病因?qū)W。本研究所采用的環(huán)境化學(xué)物質(zhì)VCD模型是近幾年逐漸被關(guān)注的一種模型,造模物質(zhì)VCD是4-乙烯基環(huán)己烯的主要代謝產(chǎn)物,制造殺蟲劑、橡膠等副產(chǎn)品。該造模方法能選擇性破壞雌鼠和靈長類動(dòng)物的原始卵泡和初級卵泡,對次級卵泡和竇卵泡無影響,成功地復(fù)制了人類絕經(jīng)前期及絕經(jīng)后期的狀態(tài)。本研究采用VCD腹腔注射可以造成大鼠卵巢早衰的動(dòng)物模型,成功率為83.3%,說明該方法能夠建立POF大鼠模型。

POF在歷代中醫(yī)典籍中無記載,但根據(jù)其癥狀可統(tǒng)歸屬于“閉經(jīng)”“血枯”“年未老經(jīng)先斷”等范疇,腎精虛損、沖任失調(diào)、肝血不足是該病的基本病機(jī),情志不遂、精神壓抑、暗耗氣血是主要誘因。本研究選用百會(huì)、關(guān)元、足三里、三陰交、次髎穴,肝腎同源,肝藏血調(diào)情志,主升發(fā)疏泄,取穴百會(huì)以益髓充腦調(diào)神;任脈為妊養(yǎng)之本,沖脈為血海,沖脈起于關(guān)元,關(guān)元深部即為胞宮所在,是治療婦科疾病的要穴,取穴關(guān)元有培元固本、調(diào)理沖任、補(bǔ)腎益精之功;足三里、三陰交穴健運(yùn)脾胃,補(bǔ)益氣血,肝脾腎三臟同調(diào);次髎穴為婦科疾病常用要穴,從現(xiàn)代解剖學(xué)角度看該穴與盆腔受相同神經(jīng)節(jié)段支配,故取該穴以促進(jìn)局部氣血運(yùn)行,改善盆腔功能狀態(tài)。本研究發(fā)現(xiàn),采用該穴位組合,兩個(gè)針刺治療組中POF模型大鼠的激素水平在治療后均有著顯著變化,而兩個(gè)針刺治療組之間無顯著差異。

下丘腦-垂體-卵巢軸對維持女性正常生殖功能具有重要作用。下丘腦中促性腺激素釋放素促進(jìn)垂體中促性腺激素FSH和LH分泌,二者到達(dá)卵巢后誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞合成及分泌雌孕激素,調(diào)節(jié)卵泡的生長、發(fā)育、成熟以及排卵;雌激素水平的升高對垂體FSH的分泌起負(fù)反饋?zhàn)饔?中樞與外周之間形成有效的反饋與負(fù)反饋,使女性機(jī)體的性激素水平維持在動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。臨床中發(fā)生POF患者,以促性腺激素FSH、LH水平升高和E2水平下降為特點(diǎn),打破了中樞與外周之間原有的反饋與負(fù)反饋機(jī)制。本研究發(fā)現(xiàn),針刺治療可顯著降低POF模型大鼠下丘腦GnRH含量及垂體FSH含量,提示針刺可調(diào)節(jié)下丘腦、垂體的激素分泌水平,通過中樞層面對POF的高促性腺激素水平產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用;同時(shí),針刺可顯著降低POF模型大鼠血清中GnRH和FSH含量,即在針刺干預(yù)下,POF模型大鼠外周血清激素表現(xiàn)出與中樞一致的變化趨勢,提示針刺通過降低POF模型大鼠血清中GnRH和FSH水平,改善了POF高促性腺激素水平狀態(tài)對卵巢功能的抑制和影響;到達(dá)卵巢的促性腺激素FSH、LH通過與相應(yīng)受體結(jié)合進(jìn)而發(fā)揮作用,本研究發(fā)現(xiàn),通過針刺干預(yù),POF模型大鼠卵巢組織中FSHr含量和LHr含量均顯著降低,E2含量顯著升高, FSHr和LHr水平的下降有助于緩解高FSH和LH水平對卵巢功能的抑制,E2含量的升高對改善卵巢-中樞的負(fù)反饋具有促進(jìn)作用,進(jìn)而對改善POF模型大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸的失衡狀態(tài)產(chǎn)生積極影響。

鑒于前期臨床觀察認(rèn)為早期針刺干預(yù)對患者卵巢功能的改善更為顯著的推論,本研究在針刺時(shí)點(diǎn)上采用不同時(shí)間干預(yù)設(shè)計(jì),分別是與造模同步干預(yù)、造模成功后干預(yù),從造模來看,預(yù)針刺組、針刺組在POF模型制備所需時(shí)間上并無差異;在后期針刺治療影響激素水平的結(jié)果來看兩組間亦無差異;即通過本次研究尚未發(fā)現(xiàn)早期針刺干預(yù)的優(yōu)勢。

綜上所述,針刺治療能夠降低POF模型大鼠中樞促性腺激素水平,降低外周促性腺激素水平及其受體含量,增加E2水平;提示針刺對POF模型大鼠中樞及外周激素水平均可產(chǎn)生一定的調(diào)節(jié)作用,不同時(shí)機(jī)針刺組間比較無差異。

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Effect of Acupuncture at Different Times on Central and Peripheral Hormone Levels in a Rat Model of Premature Ovarian Failure

-1,1,-2,3,1.

1.,100700,; 2.,100073,; 3.S,712000,

To investigate the effect of acupuncture at different times on central and peripheral hormone levels in a rat model of premature ovarian failure.Fifty clean-grade sexually mature non-mating female SD rats were randomized to model (10 rats), pre-acupuncture (10 rats), acupuncture (10 rats), adjuvant (5 rats) and blank (5 rats) groups. An animal model of premature ovarian failure was made by intraperitoneal injection of 4-vinylcyclohexene diepoxide (VCD) 160 mg/kg for 15 consecutive days in the model, acupuncture and pre-acupuncture groups. The adjuvant group was injected with the same dose of Dimethyl sulfoxide (DMSO) for 15 consecutive days. The pre-acupuncture group received acupuncture before model making and four consecutive weeks of treatment after successful model making. The acupuncture group received four consecutive weeks of acupuncture treatment after successful model making. The blank group was not given intervention. Hypothalamic gonadotropin-releasing hormone (GnRH), pituitary follicle stimulating hormone (FSH) and luteotropic hormone (LH), ovarian follicle stimulating hormone receptor (FSHr), luteotropic hormone receptor (LHr), estradiol receptor (Er) and estradiol (E2), and serum GnRH, FSH, LH and E2 levels were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in every group after the completion of treatment.Intraperitoneal injection of VCD could make a rat model of premature ovarian failure with a successful rate of 83.3%. Compared with the blank group, hypothalamic GnRH content increased (＜0.05), pituitary FSH and LH contents increased (＜0.05), serum GnRH, FSH and LH contents increased (＜0.05), serum E2 content decreased (＜0.05), ovarian LHr and Er contents increased (＜0.05) and ovarian E2 and Er contents decreased (＜0.05) in the model group of rats. Compared with the model group, hypothalamic GnRH content decreased (＜0.05), pituitary FSH content decreased (＜0.05), serum GnRH and FSH contents decreased (＜0.05), ovarian LHr and Er contents decreased (＜0.05) and ovarian E2 content increased (＜0.05) in the pre-acupuncture and acupuncture groups of rats. There were no statistically significant differences in various indicators between the pre-acupuncture and acupuncture groups (＞0.05).Acupuncture can produce a certain regulating effect on central and peripheral hormone levels in a rat model of POF. There is no difference between the groups of acupuncture at different times.

Acupuncture therapy; Model of premature ovarian failure; Rats; Gonadotropin release hormone (GnRH); Follicle stimulatin hormone (FSH); Luteotropic hormone (LH); Luteotropic hormone receptor (LHr); Estradiol receptor (Er); Estradiol (E2)

北京市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(7174324)

陳瀅如(1981—),女,主治醫(yī)師,博士,Email:tcmacu@163.com

2019-05-25

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2020.02.0220

1005-0957(2020)02-0220-06