外源性生殖激素對北極狐的生殖機能的影響

王巨龍 ，王西軍，蕭 晟，王本忠，黎 婷

(1.蕪湖職業技術學院生物工程學院，安徽蕪湖 241003；2.山東濰坊盛世富民合作社，山東濰坊 261100)

0 引言

特種經濟動物北極狐作為重要的皮毛動物，已成為我國皮裘市場的支柱產業之一.近年來，隨著北極狐大規模的養殖，在自然發情的狀態下出現初產母狐乏情、發情不明顯、產仔數低和無法集中發情等生殖機能障礙[1].這些現象嚴重影響北極狐的繁殖力，加重養殖戶的飼養成本.早在20世紀初，我國科研工作者便開展了家畜動物發情研究[2].當前研究多為外源性生殖激素FSH和PMSG對卵泡發育及LH和hCG 對排卵影響.這些方法和技術已成功應用于牛、羊、豬等家畜動物中[3-5]，并取得重大的經濟效應.1994年，白云君、劉志平等人對藍狐和銀黑狐進行了休情期的超排處理，初步探索了藍狐和銀黑狐超數排卵技術的基本方法和影響因素[6-7].對于使用外源性生殖激素孕馬血清促性腺激素PMSG對狐貍促發情效果的觀察研究，崔青山等人的研究結果表明，采用PMSG450 IU和hCG600 IU可獲得較好的發情效果[8].當前，關于PMSG和hCG對北極狐發情及組合使用對其繁殖性能的影響，目前尚未有報道.本研究我們擬探究外源性生殖激素PMSG和hCG對初產北極狐繁殖性能的影響，以此提高養殖戶的經濟效益.

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗選用體重達11～13 Kg健康初產雌性北極狐，這些試驗狐均來自山東濰坊富民合作社.這些狐隨機分籠飼養，2～3只一籠，1月份后單籠飼養，定時投喂飼料(注：試驗喂養的北極狐飼糧是由合作單位提供的飼料.飼料中動物性飼料占60%～70%，主要有魚類、血、蝦類及畜禽副產品，植物性飼料占30%左右，主要有玉米、小麥、麥麩等)，自由飲水.

1.1.1 試驗藥品及器械 生理鹽水、孕馬血清促性腺激素PMSG(寧波第二激素廠)、人絨毛膜促性腺激素hCG(寧波第二激素廠)、人工授精器械、10 mL 注射器、消毒酒精、載玻片、顯微鏡、鑷子.

1.1.2 試驗時間 2018.2.4-2019.7.15

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗設計一 選取60只母狐隨機分成4組，每組15只.其中A、B和C為試驗組，D為對照組，外源生殖激素處理如表1所示.然后統計發情率、受胎率、產仔數.

1.2.2 試驗設計二 選取55只母狐隨機分成4組，其中A、B和C為試驗組.按試驗設計一注射后進行發情鑒定，對發情母狐在人工授精前12 h注射對應等量的hCG.統計發情率、受胎率和產仔數.

1.3 發情鑒定的判定

北極狐的發情表現主要包括其外生殖道變化、行為表現以及陰道上皮細胞變化等方面.通過外生殖器官及陰道上皮細胞檢查綜合判定發情，確保母狐處于最佳的人工授精時間，確保母狐受胎率.

1.3.1 外生殖器官檢查 母狐發情期通常在春季出現，外生殖器官發生特征性生理變化，大致分為3個時期.

第一時期：由靜止期到發情前期，陰毛覆蓋的陰門開始變為外凸腫脹，陰門略開，極少可見有粘液流出，陰毛分開，陰蒂開始增大.此時，母狐貍出現生理性沖動，接近公狐貍但不接受爬跨.

第二時期：發情期，陰門持續腫脹近圓形，腫脹面如硬塊，表面充血，陰蒂增大呈紅潤色，有少量的粘液從陰門流出.母狐表現異常興奮，表現活躍，開始主動接觸公狐貍，但拒絕接受交配.

第三時期：發情期到發情后期，此階段母狐陰門腫脹呈圓形，腫脹面變軟，出現輕微皺紋，顏色變深，外翻，陰門處可見有白色乳白色的分泌物.母狐表現安靜，主動接近公狐貍并翹起尾巴，接收公狐爬跨完成交配.此階段也是人工授精的最佳時間.

1.3.2 陰道上皮細胞圖像檢查 取少許北極狐陰道分泌物，制成涂片置于顯微鏡下觀察，并記錄發情.根據母狐陰道分泌物細胞圖像，其發情周期可大致分為四個時期.發情靜止期，涂片僅見大量球形的白細胞；發情前期，白細胞大量消失，視野下可見少量多角形有核角化上皮細胞；發情期，白細胞消失，多角形有核角化上皮細胞明顯增多，此時處于最佳授精時間；發情后期，多角形角化上皮細胞，出現碎裂，白細胞出現.

1.4 人工授精技術

為了保證精液中精子數量與精子活力高，提高北極狐受孕率，試驗采集新鮮種用北極狐精液，3倍精液稀釋，人工授精每次所輸的精子數量不低于4 000萬個[9-10].一人將發情的母狐固定并提起尾巴，另一人一手持輸精管，一只手握住子宮頸口位置，緩慢的插入輸精針置于子宮內，將精液注入子宮內.北極狐的排卵可持續3 d，要求24 h內必須復配，連續輸精3次，統計北極狐的受胎率.

1.5 數據統計與分析

實驗數據通過SPSS 17.0軟件進行LSD多重比較進行顯著性分析.

發情率=發情母狐總數/試驗母狐總數*100%；

受胎率=妊娠母狐總數/發情母狐總數*100%；

產仔數/窩=妊娠母狐產仔總數(包括死胎和死產)/妊娠母狐數；

產活數/窩=出生一個月后存活的幼仔總數/妊娠母狐總數.

2 試驗結果與分析

2.1 PMSG對北極狐生殖能力的影響

利用外源性生殖激素PMSG對北極狐發情率、受胎率、產仔數、產仔數/窩、產活數/窩的影響.結果顯示(表1)，肌注PMSG劑量為100 IU，其發情率達86.7%、受胎率為92.3%.與對照組相比，肌注PMSG200 IU北極母狐的發情率為100%，母狐的發情率、受胎率、產仔數顯著的提高.其產仔數/窩提高了1.45只，產活數/窩提高1.405只.B組與C組在發情率100%情況下，C組的受胎率、窩產數、產活數要高于B組.

表1 不同劑量PMSG 對母狐生殖能力的影響Tab.1 Effect of different doses of PMSG on the reproductive function of female arctic fox

2.2 PMSG與hCG協同對北極狐生殖能力的影響

為進一步探究PMSG與hCG協同對北極狐生殖能力的影響，處理如表2所示.結果顯示，PMSG配合hCG北極狐受胎率表現為86%～100%，其中使用150、200 IUPMSG配合等量單位的hCG，北極狐受胎率達100%，顯著高于對照組的85.7%的受胎率；與對照組相比，150 IUPMSG配合hCG作用下，可顯著提高北極狐的窩產數及產活數.其窩產數、產活數分別提高2.7只、3.4只.B組與C組在受胎率100%情況下，B組的窩產數、產活數分別要高于C組.

表2 PMSG與HCG對母狐生殖能力的影響Tab.2 Effects of PMSG and HCG on the reproductive function of female arctic fox

3 討論

生殖激素是調控動物發情周期的關鍵因素.通過外源性注射生殖激素可以促進卵泡發育，利于卵子排出.當前在許多國外大型規模化家畜養殖場內，外源性生殖激素已得到了廣泛的應用[11].我國在這方面的研究也取得了較好的經濟效果.北極狐屬犬科，季節性單次發情且發情期持續3～5 d[12].北極狐發情和配種集中在每年的2月份中旬，然而年輕適配的母狐往往出現發情不明顯，延期發情或不發情等生殖障礙[1]，造成生產管理上困難，飼養成本增加.

外源性PMSG又稱孕馬血清促性腺激素，其功能為刺激卵巢發育，促進動物卵泡發育.HCG 激素可促進卵泡成熟、排卵和黃體出現，兩者同時應用具有協同作用.在家畜生產使用PMSG激素誘導動物發情，促進閉鎖卵泡發育及成熟，利于動物超數排卵.如崔青山[8]研究顯示，利用PMSG對母狐的催情的效果達100%.我們試驗使用150 IU及200 IUPMSG所獲結果與其研究結果一致.合理利用PMSG劑量能夠提高年輕母狐的發情率，便于北極狐集中繁殖管理.

PMSG和hCG協同配合使用可提高動物的繁殖能力.外源生殖激素協同作用研究已應用于牛、豬、水貂等動物上.李非平等[13]等人研究顯示通過注射外源性生殖激素PMSG和hCG可提高母豬的產仔數.本文的研究顯示PMSG和hCG在150 IU顯著提高北極狐繁殖性能，窩產數比對照組高32.5%.但在高劑量200 IU作用下，產仔數低于150 IU組.表明高劑量生殖激素可能會產生負效應.很大可能是卵巢受到過度刺激作用，出現卵母細胞發育停滯或成熟卵子不排出現象[13].這也有待于我們后期進一步研究.