腐婢葉營養成分分析

許良 王慧慧 孫梅好 鞏菊芳 蒲首丞

摘要?對2個品種的腐婢葉片中的營養成分進行提取，對其中的蛋白、果膠、黃酮、多酚、可溶性糖和脂肪共6種營養成分進行了含量測定，還通過高效液相色譜法及紅外光譜法分析腐婢葉片的提取物成分。結果表明，果膠是腐婢葉的主要成分，含量占20%以上，A品系腐婢葉片中果膠含量高于B品系，而蛋白、脂肪、黃酮、可溶性多糖和多酚均低于B品系。

關鍵詞?腐婢葉;營養成分;含量測定

中圖分類號?R284文獻標識碼?A

文章編號?0517-6611（2020）02-0207-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.02.060

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Analysis of Nutrient Composition in Leaves of Premna microphylla

XU Liang，WANG Hui-hui，SUN Mei-hao et al?（College of Chemistry and Life Sciences，Zhejiang Normal University，Jinhua，Zhejiang 321004）

Abstract?The nutrient components in the leaves of two kinds of Premna microphylla were extracted，the contents of protein，pectin，flavonoids，polyphenols，soluble polysaccharides and fat were determined，and the components of the extracts from the leaves of Premna microphylla were analyzed by high performance liquid chromatography and infrared spectroscopy.The results showed that pectin was the main component of Premna microphylla leaves，accounting for more than 20%.Pectin content in the leaves of strain A was higher than that of strain B，while other proteins，fats，flavonoids，soluble polysaccharides and polyphenols were lower than those of strain B.

Key words?Premna microphylla leaves;Nutritional components;Content determination

腐婢（Premna microphylla），又稱豆腐柴，屬馬鞭草科（Verbenaceae）豆腐柴屬（Premna）植物。腐婢為多年生落葉灌木，一般分布于華東、四川、中南及貴州等地區，同時具有食用和藥用價值，在民間一直作為野菜和草藥被食用。它的莖、葉具有清熱解毒的功效，可用于治療瘧疾、痢疾、泄瀉等多種疾病，也可用于醉酒頭痛、創傷出血和蛇蟲咬傷等[1-3]。

在我國腐婢的資源十分豐富，并且分布地域較為廣泛，但是并沒有得到很好的利用。筆者對浙江衢州地區的腐婢葉片成分進行了測定分析，以期為浙西腐婢葉資源的開發提供一定的數據支持和依據。

1?材料與方法

1.1?試驗材料

1.1.1?試材。腐婢葉片采自浙江衢州，2個品系A、B鮮葉-20 ℃保存備用。葉粉（品系A鮮葉清洗后100～105 ℃殺青2 h，60～70 ℃烘干，粉碎，過20目篩）-4 ℃保存備用。

1.1.2?試劑。蘆丁、葡萄糖、沒食子酸、半乳糖醛酸對照品;咔唑（化學純）、福林試劑、甲醇（色譜純）、75%乙醇、濃硫酸（優級純）;蒽酮、三氯化鋁、碳酸鈉、無水乙醇、甲醇（分析純）。

1.1.3?試驗儀器與設備。UV-2550紫外可見分光光度計（日本島津UV-2550）;BT-224S電子天平（德國賽多利斯）;KQ2200DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;KDN-2C定氮儀（上海昕瑞儀器儀表有限公司）;SXT-02索式提取器（上海洪紀儀器設備有限公司）;高效液相色譜儀（美國Agilent 1260）;傅立葉紅外光譜儀（美國尼高力NEXUS 670 FT-IR）。

1.2?試驗方法

1.2.1?蛋白的提取與測定方法。采用凱氏定氮法[4-5]。稱取鮮葉碎片2 g，移入干燥消化管消化后進行凱氏定氮，進行3次平行測定，取平均值。

1.2.2?脂肪的提取與測定方法。采用索式提取法[6]。取樣后干燥并研磨，得研細的干燥樣品1.36 g，將樣品移入濾紙筒，放入索式提取器內進行提取。

1.2.3?黃酮的提取與測定。

1.2.3.1?黃酮對照品溶液的制備[7]。用電子天平準確稱取經過120 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品5 mg，加入75%乙醇溶解，定容至5 mL，混合均勻，得濃度1 mg/mL的蘆丁對照品溶液，備用。

1.2.3.2?黃酮對照品標準曲線的繪制。用移液槍分別移取0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mL“1.2.3.1”對照品溶液至容量瓶中，定容至10 mL，得濃度分別為0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09 mg/mL 溶液。分別用不同濃度溶液各1 mL加入1 mL的1%三氯化鋁（甲醇）溶液搖勻后靜置15 min，在410 nm處測定其吸光度。以吸光度A為縱坐標、蘆丁對照品溶液濃度C（mg/mL）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程：A=7.482 3C+0.038 3（R2=0.993 9），結果表明蘆丁對照品在0.04～0.09 mg/mL線性關系良好。

1.2.3.3?黃酮提取液的制備。取大小近似的腐婢鮮葉洗凈擦干后剪成大小適宜的碎片，稱取鮮葉碎片2 g，用少量75%乙醇研磨成勻漿，轉移至離心管中并用75%乙醇定容到10 mL，超聲波振蕩提取10 min，8 000 r/min離心10 min，所得上清液即為樣品提取液[8]。

1.2.3.4?黃酮含量的測定。取樣品提取液0.1 mL，加乙醇定容到10 mL。取1 mL稀釋后的樣品提取液，加入1%三氯化鋁（甲醇）溶液1 mL 搖勻后靜置15 min，在410 nm處測定其吸光度值，進行3次平行測定，取平均值。

1.2.4?可溶性多糖的提取與測定[9]。

1.2.4.1?葡萄糖對照品溶液的制備。用電子天平準確稱取10 mg葡萄糖對照品，用蒸餾水溶解，定容至10 mL，得濃度1 mg/mL葡萄糖對照品溶液，備用。

1.2.4.2?可溶性多糖對照品標準曲線的繪制。用移液槍分別吸取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL“1.2.4.1”對照品溶液至容量瓶中，定容至10 mL，得濃度分別為0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06 mg/mL溶液。分別取不同濃度溶液各1 mL，加入0.1%硫酸蒽酮溶液4 mL 靜置15 min，沸水浴15 min，冰水浴10 min，待恢復室溫后在588 nm處測定其吸光度。以吸光度A為縱坐標、葡萄糖對照品溶液濃度C（mg/mL）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程：A=1.075 6C-0.007（R2=0.996 9），結果表明葡萄糖對照品在0.01～0.06 mg/mL線性關系良好。

1.2.4.3?可溶性多糖提取液的制備。取大小近似的腐婢鮮葉洗凈擦干后剪成大小適宜的碎片，稱取鮮葉碎片2 g，用蒸餾水研磨至勻漿狀，定容到50 mL，超聲振蕩10 min，8 000 r/min 離心10 min，所得上清即為樣品提取液，備用。

1.2.4.4?可溶性多糖含量的測定。取樣品提取液0.1 mL，加蒸餾水定容到10 mL。取1 mL稀釋后的樣品提取液，加入0.1%硫酸蒽酮溶液4 mL靜置15 min，沸水浴15 min，冰水浴10 min，待恢復室溫后在588 nm處測定其吸光度，進行3次平行測定，取平均值。

1.2.5?果膠的提取與測定[10-11]。

1.2.5.1?果膠對照品溶液的制備。用電子天平準確稱取10 mg半乳糖醛酸對照品，用蒸餾水溶解，定容到10 mL，得濃度為1 mg/mL半乳糖醛酸對照品溶液，備用。

1.2.5.2?果膠對照品標準曲線的繪制。用移液槍分別吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.2 mL“1.2.5.1”對照品溶液至容量瓶中，定容至10 mL，得濃度分別為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12 mg/mL 溶液。分別取不同濃度溶液各1 mL，加入5 mL濃硫酸，75 ℃水浴15 min后取出，冷卻至室溫，加入0.2 mL的0.15%咔唑無水乙醇溶液搖勻。在530 nm處測定其吸光度。以吸光度A為縱坐標、半乳糖醛酸對照品溶液濃度C（mg/mL）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程：A=0.003 3C+0.007 2（R2=0.991 2），結果表明半乳糖醛酸對照品在0.02～0.12 mg/mL線性關系良好。

1.2.5.3?果膠提取液的制備。取大小近似的腐婢鮮葉洗凈擦干后剪成大小適宜的碎片，稱取鮮葉碎片1 g，用蒸餾水研磨至勻漿狀，定容到100 mL，超聲振蕩10 min，8 000 r/min離心10 min，所得上清即為樣品提取液，備用。

1.2.5.4?果膠含量的測定。取樣品提取液0.15 mL，加蒸餾水定容到10 mL。取1 mL稀釋后的樣品提取液，加入5 mL濃硫酸，75 ℃水浴15 min，冷卻至室溫，加入0.15%咔唑無水乙醇溶液0.2 mL搖勻。在530 nm處測定其吸光度，進行3次平行測定，取平均值。

1.2.6?多酚的提取與測定[9]。

1.2.6.1?多酚對照品溶液的制備。用電子天平準確稱取10 mg 沒食子酸對照品，用蒸餾水溶解，定容到100 mL，得濃度0.1 mg/mL沒食子酸對照品溶液，備用。

1.2.6.2?多酚對照品標準曲線的繪制。用移液槍分別移取1、2、3、4、5 mL“1.2.6.1”對照品溶液至容量瓶中，定容至50 mL，得濃度分別為2、4、6、8、10 μg/mL溶液。分別取不同濃度溶液各1 mL，加入1 mL福林試劑，搖勻后靜置2 min，再加入15%碳酸鈉溶液2 mL搖勻，75 ℃水浴10 min后在760 nm 處測定其吸光度。以吸光度A為縱坐標、多酚對照品溶液濃度C（mg/mL）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程：A=0.035 7C-0.010 7（R2=0.991 4），結果表明多酚對照品在0～10 μg/mL線性關系良好。

1.2.6.3?多酚提取液的制備。取大小近似的腐婢鮮葉洗凈擦干后剪成大小適宜的碎片，稱取鮮葉碎片2 g，用蒸餾水研磨至勻漿狀，定容到50 mL，超聲振蕩10 min，8 000 r/min離心10 min，所得上清即為樣品提取液，備用。

1.2.6.4?多酚含量的測定。取樣品提取液0.1 mL，加蒸餾水定容到10 mL。取1 mL稀釋后的樣品提取液，加入1 mL福林試劑，搖勻后靜置2 min，再加入15%碳酸鈉溶液2 mL搖勻，75 ℃水浴10 min在760 nm處測定其吸光度，進行3次平行測定，取平均值。

1.2.7?高效液相色譜法分析腐婢葉片的提取物成分[12-13]。

1.2.7.1?提取液制備。取大小近似的腐婢鮮葉洗凈擦干后剪成大小適宜的碎片，稱取3份1 g鮮葉碎片，分別加入50%、80%、100%乙醇研磨成勻漿，轉移至離心管中定容到100 mL，超聲振蕩10 min，8 000 r/min離心10 min，取上清用0.22 μm水系微孔濾膜過濾后所得溶液即為樣品提取液，備用。

1.2.7.2?液相色譜條件。流動相A：甲醇，流動相B：水;流量1 mL/min;柱溫30 ℃;檢測波長210 nm;進樣體積5 μL;色譜柱：Welch Ultimate XB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm。

1.2.8?紅外光譜法分析腐婢葉片的提取物成分[14]。取大小近似的腐婢鮮葉洗凈擦干后剪成大小適宜的碎片，稱取2份2 g的鮮葉碎片，分別加入溶劑研磨成勻漿，移入離心管并定容至20 mL，超聲振蕩10 min，8 000 r/min離心10 min，保留上清與沉淀，把水提、醇提的上清與沉淀置于真空干燥箱50 ℃干燥至恒重。冷卻至室溫后KBr壓片制樣，進行紅外檢測。

2?結果與分析

2.1?各成分含量的測定?根據上述方法測得吸光度，代入相應標準曲線得出腐婢葉成分主要含量（表1）。從表1可以看出，2個品種3種腐婢樣品中果膠含量均為最高，且遠遠高于其他成分含量;其次為脂肪含量，在所測各成分中均為第二，之后依次為黃酮、可溶性多糖、多酚和蛋白含量。葉粉樣品中由于前期處理去掉了水分，所以各成分含量均高于其余2個樣品。

2.2?高效液相色譜法分析腐婢葉片的提取物成分?梯度洗脫：0～40 min，15% A→90% A;40～43 min，90% A+10% B;43～45 min，90% A→15% B。不同濃度乙醇提取液的液相色譜結果見圖1。從圖1可以看出，在2～3 min樣品A存在顯著的色譜峰，而樣品B的色譜峰則相對較小，樣品C的色譜峰幾乎不可見，說明在該時間段測出的小分子物質極性較強，導致其在乙醇濃度較低的提取液中提取效果更好，當提取液中的乙醇濃度提高時，提取效果明顯下降。同理可說明在4、7～9 min處A、B、C的峰逐漸平緩。自25 min之后，3個樣品的色譜曲線十分相近則是由于隨著時間遞進流動相中乙醇濃度升高檢測出的小分子物質極性較弱。

2.3?紅外光譜法分析腐婢葉片的提取物成分?圖2為分別用蒸餾水和乙醇進行腐婢葉片成分提取后，以上清與沉淀作為樣品的紅外光譜圖。從圖中可以看出，A、B、C、D 4個樣品分別在3 270、3 300、3 330和3 280 cm-1附近有強而寬的吸收峰，3 600～2 500 cm-1處的吸收峰是O—H的伸縮振動引起的，A、B、C、D 4個樣品物質分子中有很多-OH;3 000～2 800 cm-1處的吸收峰是C—H的對稱和反對稱伸縮振動引起的，樣品C物質在2 920和2 850 cm-1處的吸收峰是飽和C—H的伸縮振動; 1 760～1 720 cm-1處的吸收峰是半乳糖醛酸羧基形成的酯鍵（-COOR）中羰基的伸縮振動引起的，樣品C在1 740 cm-1處有較強的特征吸收峰，樣品A、B、D在1 740 cm-1處有較弱的特征吸收峰;在1 680～1 600 cm-1 處的特征吸收峰由游離的羧酸（-COOH）中羰基的不對稱伸縮振動引起的，樣品A、B、D在1 620 cm-1處有較強吸收峰，樣品C在1 620 cm-1處有較弱吸收峰;1 400 cm-1是羧基中C—O的伸縮振動、1 200 cm-1是羧基中O—H的彎曲振動;1 010～1 040 cm-1是吡喃型糖環的醚鍵和羥基的吸收。A、B、D樣品是存在果膠分子物質，而C樣品是乙醇提取上清的物質分子，紅外光譜結果與文獻[15]基本一致。

3?結論

該研究初步測得2種腐婢葉片品系營養成分蛋白、脂肪、黃酮、可溶性多糖、果膠及多酚的含量。其中A品系腐婢葉片中蛋白含量為0.061 9%，脂肪含量為8.84%，黃酮含量1.82%，可溶性多糖含量0.81%，果膠含量為24.46%，多酚含量為0.64%;B品系腐婢葉片中蛋白含量為0.067 7%，脂肪含量為9.56%，黃酮含量2.16%，可溶性多糖含量1.00%，果膠含量為23.40%，多酚含量為0.71%。

該研究對腐婢葉片中6種營養成分進行了含量測定分析，果膠是其主要成分，含量高達20%以上，為腐婢葉資源的進一步開發和利用奠定了基礎，可根據其富含果膠進一步開發成果凍類食品或作為食品果膠添加劑。

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