癲癇患者血清BAFF表達及與IFN-γ、IL-10水平的相關性

景燕 艾山江·玉蘇甫江 陸明佳

癲癇(epilepsy)屬于神經系統疾病，是由多種病因引起的慢性腦功能失調綜合疾病，表現特征為腦神經元異常放電導致反復、發作性和短暫性的中樞神經系統功能失常，在各年齡段、不同地域及種族人群中均有發病[1]。癲癇發病率與年齡有關，據報道，發病率最高的時期是嬰兒時期，隨著人口老齡化進程的加快，成人尤其老年人癲癇疾病的發病率開始逐漸增高，嚴重影響患者的生存質量[2]。研究表明免疫功能紊亂以及炎性反應與癲癇疾病發病、發展有關[3]。B細胞活化因子(B-cell activating factor of TNF family，BAFF)、干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、白介素-10(interleukin-10，IL-10)都是與免疫功能有關的炎性因子。本研究通過檢測癲癇患者血清中BAFF、IFN-γ及IL-10的表達情況，探討癲癇患者血清中BAFF與IFN-γ、IL-10表達的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年7月至2018年10月在我院就診的74例癲癇患者為觀察組，其中男42例，女32例；年齡18～72歲，平均年齡(41.02±15.30)歲；病程0.5～5年，平均病程(2.20±1.61)年。選取同期在我院體檢中心參與體檢的健康者45例為對照組，其中男25例，女20例；年齡18～70歲，平均年齡(40.86±15.52)歲。根據癲癇患者發作頻率及發作平均持續時間將癲癇患者分為癲癇頻發19例，持續狀態24例；非癲癇頻發或持續狀態31例。根據2007年中華醫學會制定的《臨床診療指南·癲癇病分冊》[1]對癲癇患者進行分類，全面性癲癇21例，局灶性癲癇28例，癥狀性癲癇25例。2組患者性別、年齡等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：①符合國際抗癲癇聯盟對于癲癇疾病的診斷標準[4]；②經臨床特征、病史、腦電圖等檢查確診；③患者家人均知情，并經患者簽訂知情同意書。

1.2.2 排除標準：①顱腦損傷、腦梗死、腦出血、中樞神經系統異常等引起的繼發性癲癇；②感染性疾病患者；③惡性腫瘤患者；④資料不全者。

1.3 主要試劑與儀器 一次性自動采血器購自武漢致遠醫療科技公司，BAFF酶聯免疫試劑購自上海鈺博生物科技公司，IFN-γ酶聯免疫試劑盒購自賽默飛世爾科技公司，IL-10酶聯免疫試劑購自賽默飛世爾科技公司，多功能酶標儀購自美國Bio-Rad公司。

1.4 方法

1.4.1 樣本采集與保存:觀察組患者于癲癇發作后12 h內采集空腹時靜脈血5 ml于生化管中，對照組于體檢當天清晨空腹時采集靜脈血5 ml，均靜置30 min，在4℃離心機(3 000 r/min)上離心10 min后取上清，置于-20℃冰箱保存待測。

1.4.2 受試者血清BAFF、IFN-γ、IL-10水平測定:采用酶聯免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)檢測血清BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平，其中血清BAFF水平測定使用BAFF酶聯免疫試劑盒，血清IFN-γ水平檢測采用IFN-γ ELISA試劑盒，血清IL-10水平測定采用IL-10 ELISA試劑盒，操作嚴格按照試劑盒說明書進行。為減小誤差，待測樣品均重復測定3次。

2 結果

2.1 2組患者一般資料情況 2組患者年齡、性別比、體重指數、糖尿病、高血壓、高血脂等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 2組患者一般資料情況

2.2 2組患者血清IFN-γ、IL-10及BAFF水平比較 觀察組血清IFN-γ、IL-10及BAFF表達水平顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

組別BAFF(ng/ml)IFN-γ(pg/ml)IL-10(pg/ml)觀察組(n=74)9.05±2.2638.45±8.0445.36±11.65對照組(n=45)3.96±0.9815.58±4.3722.74±5.30t值14.29517.55112.261P值<0.001<0.001<0.001

2.3 不同病情癲癇患者血清BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平比較 癲癇頻發、處于持續狀態患者血清BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平顯著高于非癲癇頻發或持續狀態患者(P<0.05)；癲癇頻發、處于持續狀態患者血清BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

類別BAFF(ng/ml)IFN-γ(pg/ml)IL-10(pg/ml)癲癇頻發(n=19)11.24±3.10?39.75±7.15?48.34±9.84?持續狀態(n=24)10.36±3.26?40.28±8.00?46.85±9.35?非癲癇頻發或持續狀態(n=31)7.48±2.0335.42±6.7242.06±7.47 F值13.1683.6803.651 P值<0.0010.0300.031

注：與非癲癇頻發或持續狀態比較，*P<0.05

2.4 不同類型癲癇患者血清IFN-γ、IL-10及BAFF水平比較 不同類型癲癇患者血清IFN-γ、IL-10及BAFF表達水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

組別BAFF(ng/ml)IFN-γ(pg/ml)IL-10(pg/ml)全面性癲癇(n=21)8.64±2.7239.88±9.4342.81±9.58局灶性癲癇(n=28)9.35±2.0638.71±6.2844.93±8.76癥狀性癲癇(n=25)9.06±2.4537.01±7.7147.96±10.63F值0.5280.8041.666P值0.5920.4520.196

2.5 癲癇患者血清BAFF水平與血清IFN-γ、IL-10水平的相關性 癲癇患者血清BAFF水平均與血清IFN-γ、IL-10水平呈正相關(r=0.631，P<0.05；r=0.535，P<0.05)。見圖1、2。

2.6 癲癇患者血清IFN-γ與IL-10水平的相關性 癲癇患者血清IFN-γ和IL-10表達水平呈正相關(r=0.529，P<0.05)。見圖3。

圖1 癲癇患者血清BAFF與IFN-γ的相關性分析圖2 癲癇患者血清BAFF與IL-10的相關性分析圖3 癲癇患者血清IFN-γ和IL-10的相關性分析

3 討論

癲癇是一種常見的腦部疾患，屬于神經系統疾病，患者主要臨床表現為意識喪失，肌張力強直，強直陣攣發作，復雜視幻覺及不同程度的運動、感覺、神經、精神等方面障礙，具有突發性、一時性和反復性[5]。資料顯示，全球癲癇患者約有5 000萬，我國癲癇患者約占有600萬，發病率約為4.6%。癲癇病因復雜多樣，一般認為遺傳代謝性疾病、腦部結構性病變、顱腦外傷、腦腫瘤、中樞神經系統感染等因素是癲癇發病的主要原因，但具體機制不明確[6]，因此尋找新的生物標志物來反映癲癇的疾病進程，對治療癲癇患者具有重要意義。癲癇發作對腦功能的傷害嚴重影響患者的身體健康。研究表明免疫功能紊亂是癲癇發病的病因，且其發病過程與炎性反應有關，BAFF、IFN-γ、IL-10是與免疫功能有關的炎性因子，其代謝異常能夠使神經系統發生紊亂，可能參與癲癇的疾病進程[7]。

BAFF是腫瘤壞死因子超家族(TNF家族)成員之一，可由T細胞、樹突狀細胞及單核細胞產生，是對B細胞成熟、分化至關重要的關鍵細胞因子，與自身免疫系統功能密切相關。BAFF可參與調節T細胞的多種免疫反應，在小鼠在自身免疫疾病模型中BAFF可通過誘導B細胞分泌OPN調節T細胞存活[8]。張亞敏等[9]研究表明BAFF是自身免疫疾病—系統性紅斑狼瘡的致病因素，能夠通過促進抑制性細胞因子IL-35表達，發揮負向免疫調節效應。本研究顯示癲癇患者血清中BAFF表達水平顯著高于對照組，提示BAFF水平上調可能參與癲癇發生。

IFN-γ由活化T細胞和自然殺傷細胞產生，具有免疫調節、抗腫瘤、及促進I型輔助T細胞分化作用。Gao等[10]研究表明癲癇患者血漿中IFN-γ的水平在癲癇發作后和發作間期顯著高于正常人，且血漿中IFN-γ水平與國家醫院癲癇發作嚴重程度評分(NHS3)評分和癲癇發作頻率呈正相關，說明IFN-γ可預測癲癇發作的嚴重程度。Mazdeh等[11]研究表明癲癇患者IFN-γmRNA表達水平比正常人IFN-γ表達水平高，且與IL-2，IL-4等其他促炎細胞因子和抗炎細胞因子水平有關，說明IFN-γ的異常表達可能與癲癇的發病機制有關。本研究結果顯示癲癇患者血清中IFN-γ表達水平高于對照組，表明癲癇患者體內存在較強的炎性反應，提示炎性反應可能與癲癇發病有關。

IL-10由活化B細胞和巨噬細胞等產生，是一種抗炎性因子，參與免疫細胞、炎癥細胞、腫瘤細胞的生物調節，在自身免疫性疾病、感染性疾病及腫瘤等多種疾病中有重要作用。何小群等[12]研究表明PTZ模型癲癇大鼠海馬組織中IL-10mRNA的表達水平高于對照組，用鐵皮石斛多糖處理癲癇大鼠后可通過下調IL-10表達，降低大鼠海馬組織炎性反應，減輕癲癇發作。本研究結果顯示癲癇患者血清中IL-10表達水平顯著高于對照組，提示IL-10水平上調可能與癲癇免疫機制相關的炎性反應有關，參與癲癇疾病的發生。

楊潔等[13]研究表明兒童癲癇患者IL-10高表達的T淋巴細胞數目高于健康對照兒童，且T淋巴細胞中IFN-γ表達水平上調，說明癲癇患者T淋巴細胞活化能夠產生IFN-γ等炎細胞因子。Gui等[14]研究表明IFN-γ等炎性因子能夠增強BAFF刺激的細胞存活。調節IFN-γ等炎性因子水平，可能是預防BAFF誘導的惡性腫瘤的新方法。den Hartog等[15]研究表明外周和粘膜組織中BAFF能夠增強TLR7/8和TLR9B刺激成熟B細胞產生IL-10的能力。研究表示，癲癇發作頻率及發作持續時間對病情的評估有重要意義，癲癇發作越頻繁、發作平均持續時間越久，說明患者病情越嚴重[16]。本研究結果顯示癲癇頻發、癲癇處于持續狀態患者血清BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平均顯著高于非癲癇頻發或持續狀態患者，提示癲癇患者血清中BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平可能與癲癇疾病病情嚴重程度有關，患者血清中BAFF、IFN-γ、IL-10表達水平越高，癲癇病情越嚴重。進一步分析顯示癲癇患者血清BAFF表達水平與IFN-γ、IL-10水平呈正相關，提示BAFF可能通過調節IFN-γ、IL-10等炎性相關因子表達，影響機體炎性反應，參與癲癇的發病過程。

綜上所述，BAFF、IFN-γ、IL-10在癲癇患者血清中明顯上調，BAFF水平與IFN-γ、IL-10水平正相關，提示BAFF可能通過調節IFN-γ、IL-10等炎性反應因子表達，參與癲癇疾病發生發展。然而，本研究僅初步探究癲癇患者血清中BAFF表達與IFN-γ、IL-10水平的相關性，具體生物學調節機制仍未明確，需進一步深入研究。另外，本研究樣本數量較少，下一步準備擴大樣本容量繼續進行深入研究，以期為癲癇患者的臨床治療提供一定參考依據。