針刺大鼠固定方法述評與創新

董星，陳龍芳，劉淵

（成都中醫藥大學，四川 成都）

0 引言

大鼠因基因與人類相近，并且具有繁殖能力強、易獲取易飼養、造模周期短、價格低廉等特點，成為了醫學實驗中常用的造模動物。運用大鼠進行針刺是實驗室針刺機制研究的主要形式，在大鼠的針刺研究中，如何對大鼠進行有效固定看似無關緊要，實則是很重要的環節。固定不到位，大鼠掙扎，則針刺無法進行，實驗無法開展；固定過度，則可能會導致大鼠損傷，甚至死亡。同時固定方法不能過于復雜，否則不僅浪費實驗人員的時間，也會造成大鼠的掙扎疲勞，影響實驗結果。筆者在針刺大鼠的實驗中，發現現有的多種大鼠固定方法均不盡如人意，最終通過反復實驗，摸索出一種簡捷有效的固定方法，以饗同道。

1 針刺固定方法回顧及評析

對大鼠的固定可以按照科研需求分為注射固定、給藥固定及針刺固定，注射和給藥固定方式多是采用塑料瓶固定，取效佳，但不能滿足針刺目的，故在此不議。傳統束縛固定方法多采用布條捆綁固定身體，并用醫用膠帶固定四肢，但筆者在實踐過程中發現，操作者為了最大程度地達到固定的目的，會加大束縛力度，仰臥位的傳統固定法會對大鼠造成極大的恐慌，而俯臥位的傳統固定法則往往會壓迫大鼠胸部，導致心肺功能不全而死亡，二者均在相當大的程度上影響了實驗進程。有操作者支持將大鼠麻醉后針刺，但多次麻醉及麻醉狀態針刺的效果應該受到質疑。此外，動物實驗更應該遵循動物福利倫理的“3R”原則，即reduction,replacement, refinement（減少、替代、優）。研究人員應盡可能地完善實驗程序和改進實驗技術，避免或減輕給動物造成的與實驗目的無關的疼痛和緊張不安。現對主要的幾種方法評述如下。

1.1 利用恐高特性固定

王宇[1]等利用大鼠具有恐高性，將其放置于高于地面并空間有限的木板上，大鼠會自動保持相對靜止，從而進行有限的“固定”。高臺的制作方法為將一反“L”形木板與桌面平行放置的木板裝訂，反“L”形木板底部為高臺踏板（6cm*12cm），距離地面50cm，用于大鼠的放置。認為相較于傳統的束縛固定法，大鼠置高臺固定法能有效地減少束縛應激對動物模型與針刺效應的影響，可用于大鼠針刺時的固定。

評析：依靠大鼠畏高的特性能夠將大鼠半自愿固定于一處，研究認為放置高臺“固定”能有效減少束縛應激對大鼠針刺結果的影響，設計甚為巧妙。該固定方法較適合于選取大鼠頭背部、四肢外側的穴位進行針刺。但在實踐中也存在著一些問題：筆者在對此方式進行實踐時發現，此方法并未對大鼠進行有效固定，大鼠生性兇猛，且針灸對其刺激性大，會極大程度地增加實驗操作者受傷的可能性。此外，筆者觀察到，雖然大鼠有畏高性，但多數大鼠仍然會選擇從高處躍下逃跑，最終勢必導致針刺無法正常進行。并且，若課題項目所制作的大鼠疾病模型與神經疾病相關，大鼠存在著無法自我控制行為等問題，如此則更加無法確保實驗的穩定性。

1.2 金屬固定筒固定

李洋洋[2]等用金屬絲網制作了大鼠固定筒，固定筒包括身體固定筒、固定叉、頸部固定叉。用孔徑約為0.2*0.2cm的金屬絲網做成身體固定筒，彎曲2-3cm的鐵絲制作為固定叉（包括兩個前肢固定叉和一個后肢固定叉），并使用兩根金屬棒或木筷固定頭部。后再用兩個“Y”形金屬架稱其固定筒，以達到使大鼠身體懸空，方便針刺的目的。

評析：該固定方式能夠使大鼠懸空，充分暴露出大鼠整個身體，利于操作者觸摸大鼠骨性標志，以定位穴位。但此裝置制作過程繁瑣，不具備制作快捷方便的特點，并且不能夠根據大鼠身體大小而隨時調整，具有一定的局限性。

1.3 襪子束縛固定

王建波[3]等選用柔軟度好，且質地較厚的襪子，將襪子從腳跟部剪成兩截，前半截作為套頭使用，后半截分別剪出4個小洞，將四肢從洞中穿出后，用橡皮筋束縛四肢并固定于兔臺上，由于橡皮筋的張力，大鼠的四肢得以充分展開，此時便可以對大鼠四肢部位進行針刺。

評析：此固定方法所需要的固定材料簡單易尋，易于操作。將大鼠四肢分開后，能夠很好地滿足四肢者針刺的目的。但仍然存在著以下幾點不足：①針刺部位單一，將大鼠全身覆蓋后，已經不能滿足其余部位的針刺；②存在著一個疑問，既然已經能夠通過皮筋將大鼠固定在兔臺上，為何還需要使用襪子套于大鼠身上，豈不是多此一舉？③使用橡皮筋固定大鼠，大鼠必定會掙扎，在掙扎的同時必然會使操作者加大橡皮筋對大鼠四肢的固定力度，這樣往往會出現由于四肢束縛過度，導致四肢缺血水腫，從而影響實驗進程和效果。

1.4 束口袋束縛固定

曹朝霞[4]等將廢棄的布料裁成大小適宜的長方形，制作成兩邊開口的束口袋，將一側縫上布條束口。利用大鼠喜鉆洞的特性，使大鼠穿過束口袋，當束口一頭露出大鼠頭部時，及時束口。將大鼠四肢相對固定地束縛在口袋中，此時便可對大鼠的頭部進行針刺。

評析：此方法簡單易學，是諸多固定方式中最簡易的一種。大鼠之所以能夠從固定器中掙脫，四肢為主要發力點，而此方法則很好地限制了四肢發力。但筆者在實踐過程中發現，其實該方法并不能完全固定大鼠于一處，且大鼠為了掙脫束口袋的束縛，會拼命縮頭或向前，此時就會出現銀針脫落或彎針的情況。

2 固定方法的創新

筆者的課題實驗要求對百會、風池、風府施電針30min/天。由于大鼠頭部相較于四肢及軀體本就是一處極難固定的部位，故在實驗過程中，筆者學習了諸多針刺固定方法，其中包括文獻中提及或未提及的方法。在失敗多次后，摸索出一個符合自己實驗需求的大鼠針刺固定方法，現在分享于下：

成都中醫藥大學針灸專業同學為筆者提供了一個較好的固定方式，即運用魔術貼的方式，十字交叉分別固定大鼠的前后肢體于一塊15-20cm長的木條上，此時的大鼠呈仰臥位，可以很好的針刺大鼠的腹部及四肢穴位。然而，由于筆者的針刺需求在大鼠頭部，用同樣的方式無法將大鼠俯臥位固定，模仿失敗。后筆者綜合了針灸專業同學提供的方式和曹朝霞的方式，并在此基礎上創新針刺后的頭部固定，制作出一款針對針刺大鼠頭部的固定裝置。

材料：針線、塑料布（15×15cm×1張）、麻繩（20cm×2根）、魔術貼（10cm×2對）、木條（15cm×1條）、遮光暗色布1片。如圖1。

固定器可分為A、B兩部分。

將兩片勾面魔術貼分別貼于木條兩邊部，兩片毛面魔術貼分前后橫貼于木條上，固定器A制作完成。

將廢棄的塑料布剪成長15-20cm，寬15cm的長方形，結合麻繩，用針線將塑料布縫制成一個兩邊開口的束口袋。固定器B制作完成。

固定過程：依據大鼠喜鉆洞的特性，讓大鼠自主從束口袋的一頭鉆到另外一頭，先將其頭露出，束口。然后在將尾部束口，這樣可以使大鼠的四肢套牢在束口袋中，實現四肢固定，防治大鼠掙脫。之后再將束口好的大鼠放置于木條上（固定器A），實現大鼠身體的固定，避免了傳統方式中因束縛力度過大而擠壓心肺。此時便可以對大鼠頭部進行針刺。最后用一塊遮光暗色布遮住大鼠眼睛，使大鼠情緒穩定，更加安靜。如圖2-3。若大鼠頭部掙扎劇烈，可在頭的兩邊用魔術貼粘合兩塊泡沫板，避免頭部活動過于頻繁。

此固定方法是筆者在學習了諸多文獻后筆者思考實踐所得，具有以下優點：①固定材料方便易得，操作方式簡單易懂，操作人員一名即可安全快速地完成針刺，經實踐證明，一人固定加針刺總時長約為10min，極大地提高了實驗效率；②組合而成的固定器能夠滿足不同體型的大鼠的固定，具有很大的普及性；③經實驗證明，針刺中脫針彎針率低，約為0.09%（筆者實驗針刺用52只大鼠，在針刺過程中因大鼠掙扎而出現脫針者5只，出現彎針者0只）。但筆者明白，此方法存在著很多的不足，如針刺部位有限，只能滿足頭部穴位的針刺；準備材料雖簡單易見，但種類相對較多，較為繁復等。

3 討論

由于研究人員各自實驗需求的個性化，針刺部位的不同，目前針刺固定大鼠方法還處于一個百花齊放的狀態下。以上所陳述的無論是他人的固定方式或筆者自己探索的方式，都存在著很大的局限性。然而，他山之石，可以攻玉。筆者將在科學研究中繼續探索更為方便可行的固定方式，從而更為完整全面地探求生命疾病的本質。

圖1

圖2

圖3