結直腸癌錯配修復蛋白表達及微衛星不穩定與TNM分期的相關性

陳榮真，張志勇，劉麗云，張夢思，趙猛，鄭曉娟

（唐山市工人醫院 病理科，河北 唐山）

0 引言

結直腸癌是人類常見的惡性腫瘤，近年來其發病率和病死率逐年升高[1]。我國結直腸癌的發病率年均上升 3%～4%[2]，嚴重危害我國居民的健康。染色體不穩定（CIN）、微衛星不穩定（MSI）和CpG島表型甲基化（CIMP）是結直腸癌發生、發展的重要機制[3]。微衛星不穩定性（microsatellite instability，MSI）是指腫瘤組織 DNA 復制過程中某一微衛星由于重復插入或缺失而造成的微衛星長度改變，出現新的微衛星等位基因現象，而錯配修復蛋白（mismatch repair protein， MMRP）是導致 MSI 發生的主要原因。此外，由MMR蛋白功能缺陷引起的 MSI 受到廣大臨床工作者的重視[4-6]。研究發現，MMR蛋白功能缺陷引起的高度MSI在指導治療及評估預后中意義重大[7-8]。臨床工作中，以腫瘤腸壁浸潤深度、淋巴結轉移情況和遠處轉移為判斷標準的 TNM 分期系統與結直腸癌臨床治療方案的制訂密切相關。本研究旨在分析結直腸癌患者 MMR 蛋白表達和MSI與腫瘤TNM分期的相關性。

1 資料與方法

1.1 資料來源

回顧性分析2004年1月至2018年12月在唐山市工人醫院收治的具有完整臨床病理資 料的結直腸癌患者758例。其中，男性456例，女性302例；年齡為31-94歲，中位年齡65歲。

1.2 方法

收集結直腸癌患者的術后標本，采用免疫組織化學法檢測MMR蛋白表達。 術中獲取的結直腸癌組織均經3.7%甲醛液固定、脫水、石蠟包埋，連續切片，厚3-4μm，行常規HE及免疫組織化學Envision法染色，抗MLH1、MSH2、PMS2、MSH6 鼠單克隆抗體購自羅氏生物科技公司。按產品說明步驟進行染色。每張切片內的非腫瘤腸上皮黏膜細胞明確的核著色陽性為內對照。MMR蛋白在腫瘤細胞核明確著色表達判定為陽性，任何比率腫瘤細胞的陽性均視為陽性[9]，與核染色強弱以及陽性細胞彌漫或局灶分布無關。細胞核不著色判斷為陰性。按第7版美國癌癥聯合會（AJCC）標準對所有患者行TNM分期并分組，分析不同性別、年齡及分期組MMR蛋白表達和MSI情況。

1.3 統計學方法

采用 SPSS 17.0軟件進行統計分析。計數資料的比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MMR 蛋白表達情況

758例標本中，63例（8.3%）MMR 蛋白表達缺失。其中，MLH1、MSH2、MSH6、PMS2 單獨缺失分別有3、3、6、8 例，MLH1聯合PMS2缺失27例，MSH2聯合PMS2缺失6例，MLH1聯合MSH6缺失3例，MLH1、MSH6、PMS2共同缺失3例。

2.2 MMR蛋白表達與 TNM 分期相關性的單因素分析結果

年齡≥60歲與＜60歲患者間PMS2缺失率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；T3期亞組MSH2缺失率與其他T分期亞組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；N1期亞組 MSH2缺失率與其他N分期亞組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；TNM分期Ⅱ期、Ⅲ期亞組MSH2缺失率與其他TNM分期亞組比較，差異均有統計學意義（均 P＜0.05）；TNM分期Ⅲ期亞組MSH6缺失率與其他TNM分期亞組比較，差異均有統計學意義（均 P＜0.05）。 T2期亞組、T3期亞組及TNM分期Ⅰ期亞組MSI陽性率比較，差異均有統計學意義（均 P＜0.05）（表 1）。

表1 結直腸癌患者錯配修復蛋白表達及微衛星不穩定（MSI）與臨床病理特征相關性的單因素分析結果[例（%）]

續表1

2.3 MSI 與 TNM 分期相關性的單因素分析結果

T2期亞組、T3期亞組及TNM分期Ⅰ期亞組MSI陽性率比較，差異均有統計學意義（均 P＜0.05）（表 1）。

3 討論

隨著腔鏡技術和新輔助治療在臨床的廣泛開展，結直腸癌的治療有很大改善[10]。同時，循證醫學的發展為結直腸癌患者提供了更加精準的診療。Koopman M建議臨床Ⅲ期及以上患者需進行輔助治療[11]，因此準確的臨床分期尤為重要。AJCC和國際抗癌聯盟（UICC）提出了TNM分期系統， 雖然在某些方面仍有爭議[12]，但在結直腸癌的診療及預后方面仍有較大作用。

微衛星又稱短串聯重復序列，在復制過程中長度通常保持不變。其序列隨機分布于人類基因組的編碼區和非編碼區，這種重復的特性使其在復制過程中容易出現錯配。正常生理條件下，DNA錯配修復系統可以及時發現并糾正微衛星序列復制產生的錯誤，進而維持整個基因組的穩定；當DNA復制過程發生錯誤，MMR蛋白因為功能缺陷不能準確識別、修復錯配的DNA時，導致一個或多個重復堿基的插入或缺失，進而引起MSI[13]。目前主要利用兩種方法檢測MSI：一是通過聚合酶鏈反應檢測樣本中微衛星位點序列，并與正常DNA 序列進行比對分析，進而判別MSI狀態；二是通過免疫組織化學法檢測樣本中錯配修復蛋白表達情況。因免疫組織化學法相比聚合酶鏈反應有著易操作、成本低等優勢[14]，臨床上常用免疫組織化學法檢測MMR蛋白以對腫瘤MSI狀態進行篩選[15]。研究表明，檢測腫瘤MSI對結直腸癌的診療和判斷預后有重要意義。高水平MSI （MSI-H）結直腸癌與MSS和 低水平MSH（MSI-L）結直腸癌相比，有獨特的生物學特征，MSI-H 結腸癌好發于右半結腸、多原發癌、傾向于低分化及黏液腺癌、有較低的淋巴結轉移率及遠處轉移率[16]。Sargent DJ等認為，MSI-H是腫瘤預后良好的標志[17]。Zaanan 等[18]研究發現Ⅲ期MSI-H結直腸癌患者采用FOLFOX方案輔助化療，無進展生存時間顯著延長。Liang 等[19]研究發現，MSI-H 結直腸癌Ⅳ期患者與MSI-L、MSS的Ⅳ期患者相比，以5-氟尿嘧啶為基礎的化療更能帶來生存獲益。因此，鑒于MSI檢測對結直腸癌的診療有重要的指向性，2016版美國國立綜合癌癥網絡（NCCN）指南推薦所有轉移性結直腸癌患者均進行MMR蛋白及MSI檢測[20]。

本研究發現，結直腸癌患者中MMR蛋白表達缺失率為8.3%，與以往報道相似；結直腸癌MMR蛋白表達缺失和MSI與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移和遠處轉移相關；結直腸癌患者MMR蛋白表達缺失和MSI與患者發病年齡有關。因此，MMR蛋白及MSI的檢測可以作為判定結直腸癌患者TNM分期的客觀參考指標，進而判定患者術后是否需要輔助放化療。同時，檢測腫瘤MMR蛋白表達及MSI也可作為指導臨床治療的重要依據。