豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗免疫抗體的檢測評估

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染性疾病，由于其潛伏期短、發(fā)病急、傳播迅速、宿主譜系廣、危害嚴(yán)重，因此世界各國均倍受關(guān)注。世界動物衛(wèi)生組織（OIE） 將其列為A類動物傳染病之首，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部將其列為一類動物傳染病[1]。口蹄疫病毒屬于小RNA病毒科、口蹄疫病毒屬，已證實有O、 A、 C、 Asia1、SAT1、 SAT2和SAT3共7個血清型，而各血清型之間無交叉免疫保護(hù)。因此口蹄疫疫情的發(fā)生會造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失和重大的政治影響[2]。我國在2013年之前豬群中流行豬O型口蹄疫病毒，2013年2月在廣東茂名報道了第一起豬的A型口蹄疫疫情[3,4]，此后根據(jù)國內(nèi)豬口蹄疫的流行形勢，國內(nèi)口蹄疫研發(fā)機(jī)構(gòu)及口蹄疫疫苗企業(yè)開始研發(fā)各類豬口蹄疫O型、A型二價疫苗。豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗（多肽2700+2800+MM13）研發(fā)成功并獲得農(nóng)業(yè)農(nóng)村部生產(chǎn)批準(zhǔn)文號后，2019年在我省開始使用。

本研究旨在觀察豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗（多肽2700+2800+MM13）的注苗反應(yīng)，并進(jìn)一步了解疫苗首免及二免后使用不同的抗體檢測試劑盒來評價產(chǎn)生抗體的整體水平及合格率[5-7]，以期為今后豬O型和A型口蹄疫的防控及評價提供科學(xué)的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗疫苗豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗（多肽2700+2800+MM13）：國內(nèi)某口蹄疫疫苗生產(chǎn)企業(yè)，批號：20190102。

1.1.2 試驗動物選取吉林省2個規(guī)模化豬場60日齡左右的仔豬40頭（每個豬場選取20頭）。

1.1.3 檢測試劑盒豬口蹄疫O型VP1結(jié)構(gòu)蛋白ELISA抗體檢測試劑盒，鄭州某生物技術(shù)有限公司（簡稱ZZ），批號：20191001。口蹄疫病毒O型抗體檢測試劑盒，北京某科技有限公司（簡稱BJ），批號：107HS803。豬口蹄疫A型VP1結(jié)構(gòu)蛋白ELISA抗體檢測試劑盒，鄭州某生物技術(shù)有限公司（簡稱ZZ），批號：20190101。口蹄疫病毒A型抗體檢測試劑盒，北京某科技有限公司（簡稱BJ），批號：107HS820。

1.2 試驗方法

1.2.1 免疫接種方法采用耳根后深層肌肉注射，疫苗首次免疫后間隔30d加強(qiáng)免疫一次，免疫劑量均為1mL/頭。

1.2.3 血樣采集第1次：免疫前采血，檢測母源抗體，確定首免時間；第2次：首次免疫后30d采血，同時加強(qiáng)免疫一次；第3次：加強(qiáng)免疫后15d采血；第4次：加強(qiáng)免疫后45d采血；第5次：加強(qiáng)免疫后90d采血；第6次：加強(qiáng)免疫后120d采血。每次采集血樣40份。

1.2.4 抗體檢測分別采用購自鄭州和北京的試劑盒進(jìn)行O型、A型免疫抗體檢測，結(jié)果按說明書進(jìn)行判定。

2 試驗結(jié)果

2.1 臨床觀察結(jié)果每次接種疫苗后連續(xù)觀察5d，首次免疫后和加強(qiáng)免疫后，40頭豬精神狀態(tài)均良好，采食量正常，未出現(xiàn)免疫副反應(yīng)。

2.2 抗體檢測結(jié)果

2.2.1 口蹄疫O型抗體檢測結(jié)果豬口蹄疫O型VP1結(jié)構(gòu)蛋白ELISA抗體檢測試劑盒（ZZ）的檢測結(jié)果顯示，首免后30d口蹄疫O型抗體合格率達(dá)到97.5%，加強(qiáng)免疫后至120d時抗體合格率仍維持在100%，具體檢測結(jié)果見表1。

表1 不同時間O型抗體檢測結(jié)果（ZZ）

表2 不同時間O型抗體檢測結(jié)果（BJ）

2.2.2 口蹄疫A型抗體檢測結(jié)果豬口蹄疫A型VP1結(jié)構(gòu)蛋白ELISA抗體檢測試劑盒（ZZ）的檢測結(jié)果顯示，首免后30d口蹄疫A型抗體合格率達(dá)到95%，加強(qiáng)免疫后至120d時抗體合格率能夠達(dá)到95%以上，具體檢測結(jié)果見表3。

表3 不同時間A型抗體檢測結(jié)果（ZZ）

口蹄疫病毒A型抗體檢測試劑盒（BJ）的檢測結(jié)果顯示，首免及二免后抗體合格率僅有10%～30% ，具體檢測結(jié)果見表4。

表4 不同時間A型抗體檢測結(jié)果（BJ）

3 分析與討論

3.1 豬群接種口蹄疫疫苗后不良反應(yīng)的大小和疫苗的生產(chǎn)工藝有直接的關(guān)系，疫苗中雜蛋白含量越低，副反應(yīng)就越小。豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗接種后豬群精神狀態(tài)均良好，采食量正常，未出現(xiàn)免疫副反應(yīng)，這與口蹄疫合成肽疫苗的生產(chǎn)工藝有直接的關(guān)系[8-10]。

3.2 抗體檢測結(jié)果表明，豬口蹄疫O型、A型二價合成肽疫苗免疫后產(chǎn)生抗體水平合格率高、免疫持續(xù)期長，二免后90d、120d抗體合格率仍可達(dá)到95%以上，能夠為正常的生豬飼養(yǎng)周期（約180天）提供良好的保護(hù)。

3.3 從不同試劑盒檢測結(jié)果的符合率來看，兩種O型抗體檢測試劑盒的合格率結(jié)果保持一致，而A型抗體檢測試劑盒（BJ）的合格率相對較低，可能與試劑盒中包被的抗原極性和構(gòu)象有關(guān)。因此，不建議使用該類試劑盒評價合成肽疫苗免疫后產(chǎn)生的A型抗體。

3.4 仔豬的首免日齡和母源抗體有直接的關(guān)系，母源抗體水平越高，對疫苗的拮抗作用越強(qiáng)[11-14]。因此此次接種前首先檢測了母源抗體水平，確保疫苗免疫后不受母源抗體的干擾。