豬病診斷和防治中PCR技術(shù)的應(yīng)用研究

王慶偉 王得明

在我國(guó)牲畜飼養(yǎng)中，豬的飼養(yǎng)占據(jù)非常大的比重，豬肉也是人們生活中常見(jiàn)的食用肉類。但是，由于飼養(yǎng)方式不科學(xué)等原因，在豬的飼養(yǎng)中豬病的發(fā)生率越來(lái)越大，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)和人們的食品安全造成了非常不利的影響。而且流行性豬病大多都是典型的、多種病毒混合感染的，從癥狀上看，沒(méi)有明顯的特征，這就給豬病的防治工作帶來(lái)了很大的困難，而PCR技術(shù)的應(yīng)用則為豬病的診斷和防治工作提供更多的防治措施。

1 PCR技術(shù)概述

PCR技術(shù)在豬病的診斷和防治工作中具有非常廣泛的應(yīng)用。PCR技術(shù)在豬病診斷和防治工作的過(guò)程中，逐漸表現(xiàn)出特異性較高、操作簡(jiǎn)單和擴(kuò)增速度快的優(yōu)勢(shì)。PCR技術(shù)在豬病的診斷和防治工作中可以使目的基因在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行快速的增擴(kuò)，這樣能夠快速的對(duì)微量基因進(jìn)行檢測(cè)。PCR技術(shù)在豬病診斷和防治工作的應(yīng)用中，也在不斷的創(chuàng)新和完善，根據(jù)豬病發(fā)展的現(xiàn)狀和PCR技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)狀，PCR技術(shù)逐漸發(fā)展出很多新的技術(shù)，這些由PCR技術(shù)發(fā)展而來(lái)的新技術(shù)在豬病診斷和防治工作中發(fā)揮著非常重要的作用。

2 PCR技術(shù)在豬病診斷和防治中的應(yīng)用

2.1 PCR技術(shù)在豬圓環(huán)病毒2型的診斷和防治中的應(yīng)用

PCR技術(shù)在豬圓環(huán)病毒2型的診斷和防治工作中，通過(guò)在基因庫(kù)中豬圓環(huán)病毒的基因序列ORF2進(jìn)行擴(kuò)增引物的設(shè)計(jì)，將豬圓環(huán)病毒2型的臨床分離基因作為模板基因，再對(duì)反應(yīng)的條件進(jìn)行篩選，形成了一種能夠有效監(jiān)測(cè)豬圓環(huán)病毒2型的PCR方法。這種PCR方法具有很強(qiáng)的特異性，通過(guò)這種PCR方法對(duì)豬圓環(huán)病毒2型進(jìn)行檢測(cè)和基因擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)目的基因的片段長(zhǎng)度為559bp （堿基），而通過(guò)這種PCR方法在相同的條件下對(duì)其它豬病感染病毒進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)結(jié)果為陰性。PCR技術(shù)在豬圓環(huán)病毒2型的診斷和防治中具有非常大的應(yīng)用價(jià)值，能夠?qū)ωi病的診斷和防治工作提供有效的措施和方法。

2.2 PCR技術(shù)在豬瘟病毒診斷和防治中的應(yīng)用

豬瘟病毒是引起豬病的常見(jiàn)的病毒類型，豬瘟病毒引起的豬病非常嚴(yán)重，影響范圍非常廣，對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。我國(guó)在豬瘟病毒的防治中采取了很多方法和措施，但是，效果不夠明顯，豬瘟病毒依然經(jīng)常出現(xiàn)并迅速的傳播和蔓延。當(dāng)前，很多相關(guān)的專業(yè)研究人員思考從引物的設(shè)計(jì)上尋找方法，通過(guò)引物設(shè)計(jì)建立用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)來(lái)對(duì)豬瘟病毒進(jìn)行檢測(cè)。這種方法能夠?qū)ωi瘟病毒進(jìn)行核酸序列的擴(kuò)增，這種核酸序列的擴(kuò)增表現(xiàn)出明顯的特異性，能夠?qū)崿F(xiàn)病毒區(qū)分，從而解決了人們一直以來(lái)比較困擾的問(wèn)題。經(jīng)過(guò)多次的實(shí)驗(yàn)表明這種方法特異性強(qiáng)、可靠性高，在豬瘟病毒的診斷上能夠提供很好的方法。

2.3 PCR技術(shù)在母豬繁殖障礙與呼吸綜合征診斷和防治中的應(yīng)用

母豬繁殖障礙與呼吸綜合征主要在母豬和幼豬中發(fā)病。通常表現(xiàn)為，母豬出現(xiàn)流產(chǎn)，產(chǎn)出木乃伊胎和弱仔，幼豬出現(xiàn)呼吸道癥狀，幼豬的死亡率很高。這種豬病的發(fā)生非常普遍，在我國(guó)這種豬病已成為二類傳染病，對(duì)母豬的正常繁殖和幼豬的正常生長(zhǎng)都有非常嚴(yán)重的惡劣影響，對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在對(duì)這種豬病進(jìn)行診斷時(shí)要迅速診斷，如果使用常規(guī)的診斷方法就會(huì)因?yàn)榉爆嵉脑\斷操作增加診斷的時(shí)間，從而將這種豬病與豬瘟、細(xì)小病毒等混淆，診斷結(jié)果就會(huì)出錯(cuò)。我國(guó)科研人員建立了利用反式聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的方法來(lái)對(duì)這種豬病進(jìn)行檢測(cè)。在不斷的探索中逐漸建立了檢測(cè)這種豬病的PCR方法。同時(shí)，也探索出了一些在使用這種PCR方法進(jìn)行豬病檢測(cè)的注意事項(xiàng)。一方面，在陳舊的樣品中提取的RNA很容易出現(xiàn)降解反應(yīng)，在電泳實(shí)驗(yàn)中，新鮮的樣品會(huì)出現(xiàn)3條明顯的RNA，而且這3條RNA的外形也是比較完整的。另一方面，提取RNA之后，進(jìn)行cDHA的反轉(zhuǎn)錄，在一定環(huán)境下經(jīng)過(guò)一定的時(shí)間，RNA就會(huì)出現(xiàn)降解反應(yīng)。

2.4 PCR技術(shù)在混合感染病毒診斷和防治中的應(yīng)用

PCR技術(shù)在混合感染病毒診斷和防治中的應(yīng)用主要是應(yīng)用多重PCR技術(shù)，這種多重PCR技術(shù)能夠?qū)?種以上的病毒引物加入到統(tǒng)一反應(yīng)體系中，將這種多重PCR技術(shù)與常規(guī)PCR技術(shù)一起應(yīng)用到病毒的檢測(cè)中，能夠快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)2種或者3種以上的病原菌，同時(shí)，多重PCR技術(shù)具有高敏感度的特點(diǎn)，這些優(yōu)點(diǎn)在常規(guī)的PCR技術(shù)中所沒(méi)有?；旌细腥静《驹谪i病中非常普遍，如果獸醫(yī)僅憑借自身的診斷經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行診斷會(huì)出現(xiàn)很多的錯(cuò)誤，從而錯(cuò)過(guò)最佳診斷的時(shí)間。所以，有必要在混合感染病毒的診斷中推廣多重PCR技術(shù)。

豬病是對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失的主要原因，當(dāng)前，我國(guó)豬病的發(fā)生率越來(lái)越高，在養(yǎng)豬業(yè)中對(duì)豬病進(jìn)行診斷和防治是十分必要的。而常規(guī)的豬病診斷和防治技術(shù)在豬病診斷和防治中效果不夠明顯，而PCR技術(shù)能夠在豬病的診斷和防治工作中發(fā)揮重要的作用，所以，對(duì)PCR技術(shù)進(jìn)行研究是十分必要的。