總蛋白單試劑盒和雙試劑檢測EQA樣品的互通性研究

李祥坤，肖光軍，楊娜，劉艷婷，趙思涵

(遂寧市中心醫院，四川 遂寧 629000)

總蛋白(TP)是血清或血漿中所含各種蛋白質的總稱。目前，臨床實驗室TP的常規檢測方法為雙縮脲終點法，其試劑盒可分為單試劑盒和雙試劑盒[1]。研究顯示，兩試劑盒間檢測結果具有一致性，但單試劑盒的檢測結果更易受到溶血、黃疸和脂血的影響[1]。因單試劑盒的價格比雙試劑盒便宜，仍有部分臨床實驗室使用，從而導致室間質量評價(EQA)活動時，同一廠家生產的TP單試劑盒和雙試劑盒將歸為同一組內，并以靶值±總允許誤差(TEa)為評價標準計算EQA成績。相關研究表明不具有互通性的EQA樣品可能導致EQA結果的錯誤解釋[2-6]。因此本文參照衛生行業標準WS/T 356-2011[7]，對EQA樣品在同一廠家生產的TP雙縮脲終點法單試劑盒和雙試劑盒間的互通性進行了評價。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

日立7600全自動生化分析儀；TP雙縮脲終點法雙試劑盒(批號：1117041)、單試劑盒(批號：0718061)及其配套校準品(批號：0518061)均由四川邁克提供；檢測參數均嚴格按照試劑說明書設置。質控品則采用美國伯樂液體生化多項質控品，使用低、中、高三個濃度水平，其批號分別為45771，45772，45773。檢測前對儀器進行常規保養，且室內質控在控。

1.2 標本

1.2.1 單人份新鮮血清

留取2018年7月6日遂寧市中心醫院檢驗科住院患者常規生化檢測剩余單人血清40 人份，TP濃度在28.41～99.77 g/L范圍內均勻分布并覆蓋所有待評價樣品的濃度[4-7]，每份血清收集后分裝3 份，編號依次為1～40，置2～8 ℃冰箱保存，放置時間不超過4 h[5]。標本均無溶血、黃疸和脂濁。

1.2.2 待評價樣品

采用NCCL2018年第二次常規生化EQA活動中5 份EQA樣品的保留樣品。5 份樣品均于EQA活動所推薦的檢測時間按說明書的要求復溶和分裝，并嚴格保存于-70 ℃以下低溫冰箱中。

1.3 方法

1.3.1 校準品準備

將生化復合校準品(凍干粉)從2～8 ℃冰箱取出，放置于室溫中30 min后，按說明書要求加入適量純化水復溶。

1.3.2 標本準備

將所有新鮮血清樣品和待評價樣品從冰箱中取出，放置于搖床中恢復至室溫。

1.3.3 標本檢測

按照衛生行業標準WS/T356-2011[7]的要求，將5 份待評價樣品與40 份新鮮血清樣品隨機穿插排列，然后以雙試劑盒為比對方法、單試劑盒為待評價方法分別測定所有樣品，重復測定3 批次，每批每份樣品各測定1 次。標本檢測前，分別使用配套校準品對檢測項目校準[4-7]。

1.4 統計學方法

采用Excel2007對檢測結果進行數據分析和處理。將40 份新鮮血清樣品比對方法3 次測定結果的均值(X軸)與待評方法3 次測定結果的均值(Y軸)進行線性回歸分析，計算相應X值下的Y預測值及其雙側95%置信區間，并將5 份EQA樣品的Y值與預測區間比較以評價其基質效應。對于不具有互通性的EQA樣品，通過線性回歸方程計算其預測值與測量值的相對差值，得到互通性相關偏倚[5]。互通性相關偏倚(%)=(測量值-預測值)×100/預測值。

2 結 果

2.1 線性回歸分析

對兩方法檢測40 份新鮮血清樣品的均值做散點圖和線性回歸分析，回歸方程為Y=1.010 2X-0.086 7，相關系數r為0.998 4，結果見圖1。說明兩樣品間檢測結果的相關性良好，X取值范圍合適，滿足衛生行業標準WS/T 356-2011和EP14-A2文件[7-8]對回歸方程和相關系數r的要求，可通過回歸方程計算相應X值下的Y預測值及其雙側95%置信區間。

2.2 互通性評價

繪制比對方法和待評方法測定40 份新鮮血清樣品的散點圖及其預測值Y的95%置信區間，再繪制兩方法測定5 份EQA樣品的散點圖(見圖1)。結果顯示，5 份EQA樣品在待評方法中均存在正基質效應，其互通性相關偏倚見表1。

圖1 基質效應分析圖

表1 5 份EQA樣品的互通性相關偏倚

3 討 論

EQA指多家實驗室以處理患者樣品一樣的方式同時檢測外部EQA提供者發放的一組樣品，并將檢測結果回報給外部EQA提供者，再由其按照預先制訂的準則評價參加實驗室的能力[3]；實驗室則通過對EQA結果的解釋發現實驗室的分析誤差，采取相應的糾正措施不斷提高實驗室的分析能力，并通過EQA為實驗室客戶、認可機構等提供其檢測能力的客觀證據。在這一過程中EQA樣品是不可缺少的，但目前我國常規生化檢測項目所使用的EQA樣品均為第三方公司生產的凍干粉，其在不同檢測試劑間是否具有互通性或在哪些試劑間具有互通性是個值得探討的課題，這一問題也越來越受到人們的重視[9]。本研究參照EP14-A2文件中所描述的基質效應與互通性評價實驗方案，對5 份EQA樣品在同一廠家生產的TP雙縮脲終點法單試劑盒和雙試劑盒間的互通性進行了評價。研究結果顯示，線性回歸分析其回歸方程為Y=1.010 2X-0.086 7，相關系數r為0.998 4，說明兩試劑盒間檢測結果的相關性良好[1]，且X取值范圍合適，可通過回歸方程計算相應X值下的Y預測值；但5 份EQA樣品的檢測結果均超過Y預測值95%置信區間上限，存在明顯的正基質效應，其互通性相關偏倚為7.12%～11.28%，均高于行業標準WS/T403-2012中所規定的TEa[10]。說明EQA樣品在兩試劑盒間缺乏互通性，EQA時兩試劑盒不能歸為同一組內，需獨立分組計算靶值，否則，將引起EQA結果解釋錯誤。

綜上所述，理想的EQA計劃是使用具有互通性的EQA樣品，并通過參考方法建立靶值，可評估各檢測系統的再現性、校準溯源性以及不同檢測系統間的一致性[11]。相關文獻研究表明[4-6，11-12]，最理想的EQA樣品是新鮮人血清樣品，但因新鮮血清樣品來源困難、不易儲存和運輸，且被測物濃度不易滿足EQA分析要求，常對其進行一些特殊的處理，如添加外源性分析物或凍干處理等，從而影響了EQA樣品的互通性。故外部EQA提供者需對EQA樣品的互通性進行評估，并科學、合理地對參評實驗室進行分組討論，實驗室得到EQA成績時，應結合EQA樣品的互通性和穩定性、分組及靶值設定方法、可接受范圍、檢測系統中試劑的批間變異等信息去綜合分析EQA結果[3]，以便質量改進。