血清IFIP-16、tTG水平與子癇前期孕婦血壓和尿蛋白的關系及其診斷價值

陳艷，楊柳，張云珠，焦榮紅

上海市浦東新區人民醫院檢驗科1、婦產科2，上海 201200

子癇前期是指妊娠20 周以后孕婦出現血壓升高和尿蛋白情況，是妊娠期特發疾病，其發病原因尚未完全明確[1-2]。子癇前期在世界范圍內的發生率約為5%，其可造成孕產婦及圍產期嬰兒死亡、醫源性早產的發生，并可導致胎兒生長受限，引發妊娠高血壓 (HELLP) 綜合征、子癇等[3-4]。既往研究表明[5]，子癇前期的發病原因主要為內皮細胞損傷，然而目前子癇前期中內皮細胞損傷的確切機制尚不十分明確，有學者認為“毒性因子”在引發子癇前期內皮細胞損傷中發揮著重要作用[6]。γ干擾素誘導蛋白16 (interferon-γ-inducible protein-16，IFIP-16) 是HIN-200家族成員之一，內皮細胞中IFIP-16過表達可抑制細胞增殖、遷移及導致血管損傷形成[7]。IFIP-16 主要存在于上皮細胞、成纖維細胞、內皮細胞內，而在一些因素的刺激下，IFIP-16 可轉移到細胞外。組織型轉谷氨酰胺酶 (tissue Transglutaminase，tTG) 是一種多功能蛋白，與阿爾茨海默病、惡性腫瘤及糖尿病等多種疾病具有一定的關系[8-9]。研究顯示，IFIP-16也表達于子癇前期孕婦的胎盤組織中，tTG在胎盤合胞體滋養層大量表達，但關于子癇前期孕婦血液中是否存在IFIP-16、tTG的報道較少[10]。本文通過檢測108例子癇前期孕婦血清IFIP-16、tTG的表達水平，分析其對子癇前期的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選擇2015 年4 月至2017年12 期間在上海市浦東新區人民醫院進行檢查的孕婦200 例為研究對象。納入標準： (1) 單胎妊娠孕婦； (2) 孕婦年齡20～40歲； (3) 在孕12～14周、孕20周時抽取血樣本檢查； (4) 孕前無糖尿病、血管性疾病、自身免疫性疾病、肝炎、腫瘤、炎癥，無吸煙、酗酒等不良嗜好； (5) 所有對象均簽署知情同意書，同意提供血樣本供本次研究。排除標準： (1) 伴原發性高血壓者； (2) 有心、肝、腎及內分泌病史者； (3) 胎膜早破、感染者。根據最終的診斷結果納入子癇前期 (診斷標準[11]：孕20 周后出現舒張壓 (DBP) ≥90 mmHg (1 mmHg=0.133 kPa) 和 (或) 收縮壓 (SBP) ≥140 mmHg，尿蛋白≥0.3 g/24 h或隨機尿蛋白陽性) ]孕婦108例。進一步根據病情嚴重程度分為輕度組49 例和重度組59 例，再從剩余孕婦中選取健康孕婦60例作為對照組，三組孕婦的年齡、分娩孕周、分娩前體質指數 (body mass index，BMI) 、孕產次等一般資料比較差異均無統計學意義 (P＞0.05) ，具有可比性，見表1。本研究通過我院倫理委員會審核批準。

表1 三組孕婦的一般資料比較

表1 三組孕婦的一般資料比較

組別對照組輕度組重度組F值P值例數60 49 59年齡 (歲) 29.42±4.15 28.69±3.56 30.27±4.03 2.150 0.120分娩孕周38.29±1.63 37.85±1.70 37.62±1.90 2.256 0.108分娩前BMI (kg/m2) 26.12±2.73 26.42±2.47 27.24±3.54 2.268 0.107孕次2.18±0.24 2.25±0.33 2.31±0.42 2.315 0.102產次1.53±0.22 1.47±0.31 1.45±0.32 1.259 0.287

1.2 方法

1.2.1 標本采集 于孕12～14 周、孕20 周時采集所有孕婦清晨空腹外周靜脈血5 mL，36℃水浴1 h 后以3 000 r/min離心10 min，有效離心半徑為6 cm，分離血清后保存于-80℃冰箱待測。采用含甲苯防腐劑的無菌帶蓋容器收集24 h尿液標本，尿液標本采集后立即送實驗室檢測24 h尿蛋白量。

1.2.2 各指標測定 采用酶聯免疫吸附法 (enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA) 測定各組血清IFIP-16、tTG水平，ELISA試劑盒購于上海晶抗生物工程有限公司，嚴格按照試劑盒說明進行操作，每例均設置3個復孔，以其均值為最終濃度，所有標本均為同人操作、同批檢測。采用免疫比濁法檢測24 h尿蛋白量。孕12～14周、孕20周時測量三組孕婦的SBP、DBP及平均動脈壓 (mean arterial pressure，MAP) 。

1.3 統計學方法 研究數據采用SPSS23.0 進行統計學分析。IFIP-16、tTG、SBP、DBP、MAP、24 h 尿蛋白量等均為計量資料，并通過正態性檢驗，采用均數±標準差描述。多組比較采用方差分析F檢驗，兩組比較采用LSD-t檢驗，組內比較為配對檢驗。相關性分析采用Pearson相關性檢驗。此外，繪制受試者工作特征 (receiver operating characteristic curve，ROC) 曲線分析孕20周時血清IFIP-16、tTG對子癇前期的診斷價值。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組孕婦的血清IFIP-16、tTG水平及24 h尿蛋白量比較 孕12～14周、孕20周時，重度組、輕度組孕婦的血清IFIP-16、tTG水平及24 h尿蛋白量均明顯高于對照組，重度組以上指標均明顯高于輕度組，差異均有統計學意義 (P＜0.05) ，見表2。

2.2 三組孕婦的SBP、DBP和MAP水平比較 孕12～14周、孕20周時，重度組、輕度組孕婦的SBP、DBP、MAP水平均明顯高于對照組，重度組以上指標均明顯高于輕度組，差異均有統計學意義 (P＜0.05) ，見表3。

表2 三組孕婦的血清IFIP-16、tTG水平及24 h尿蛋白量比較

表2 三組孕婦的血清IFIP-16、tTG水平及24 h尿蛋白量比較

注：與對照組比較，aP＜0.05；與輕度組比較，bP＜0.05。

組別例數IFIP-16 (ng/mL) tTG (ng/mL) 24 h尿蛋白量 (g/24 h) 孕20周0.08±0.02 1.74±0.86a 4.62±0.95ab 591.122＜0.05對照組輕度組重度組F值P值60 49 59孕12～14周11.19±1.14 14.28±2.03a 16.81±3.51ab 78.629＜0.05孕20周11.24±1.36 16.43±2.46a 20.36±4.61ab 125.737＜0.05孕12～14周7.02±0.51 8.42±0.58a 9.27±0.64ab 226.883＜0.05孕20周7.05±0.54 9.92±0.62a 11.85±1.05ab 571.740＜0.05孕12～14周0.07±0.02 1.04±0.73a 2.57±0.88ab 221.471＜0.05

表3 三組孕婦的SBP、DBP和MAP水平比較

表3 三組孕婦的SBP、DBP和MAP水平比較

注：與對照組比較，aP＜0.05；與輕度組比較，bP＜0.05。

組別例數IFIP-16 (ng/mL) DBP (mmHg) MAP (mmHg) 孕20周87.21±5.29 113.56±4.80a 127.25±6.52ab 775.727＜0.05對照組輕度組重度組F值P值60 49 59孕12～14周112.34±5.23 126.96±4.85a 141.12±6.18ab 410.823＜0.05孕20周114.08±8.72 148.35±7.43a 167.49±8.09ab 656.763＜0.05孕12～14周72.76±5.41 80.61±4.19a 90.20±6.93ab 139.515＜0.05孕20周73.84±5.70 95.20±4.37a 108.49±7.49ab 492.575＜0.05孕12～14周86.50±4.84 98.41±4.65a 110.20±6.42ab 286.921＜0.05

表4 子癇前期孕婦血清IFIP-16、tTG 水平與孕婦血壓及24 h 尿蛋白量的相關性

2.3 子癇前期孕婦血清IFIP-16、tTG水平與孕婦血壓及24 h 尿蛋白量的相關性 子癇前期孕婦血清IFIP-16 水平與血清tTG 水平呈正相關 (r=0.674，P=0.023) 。子癇前期孕婦血清IFIP-16 水平與SBP、DBP、MAP水平及24 h尿蛋白量均呈正相關 (P＜0.05) ；血清tTG 水平與SBP、DBP、MAP 水平及24 h 尿蛋白量均呈正相關 (P＜0.05) ，見表4。

2.4 血清IFIP-16、tTG 對子癇前期的診斷價值 ROC 曲線分析結果：孕20周時血清中IFIP-16水平為13.98 ng/mL時，其診斷子癇前期的靈敏度和特異度最高，分別為80.14%和78.67%，ROC曲線下面積為0.859；而血清中tTG 水平為8.14 ng/mL 時，其診斷子癇前期的靈敏度和特異度最高，分別為73.42%和71.68%，ROC 曲線下面積0.796，參見圖1A。孕20 周時血清中IFIP-16 水平以16.51 ng/mL 作為臨界值，鑒別輕度與重度子癇前期的靈敏度和特異度最高，分別為73.26%和72.73%，ROC 曲線下面積為0.752；而血清中tTG 水平以9.94 ng/mL 作為臨界值，鑒別輕度與重度子癇前期的靈敏度和特異度最高，分別為72.43%和70.52%，ROC曲線下面積為0.714，參見圖1B。

圖1 ROC曲線分析血清IFIP-16、tTG對子癇前期的診斷價值

3 討論

子癇前期作為妊娠期特發的全身性疾病，通常會出現頭痛、眼花、惡心、嘔吐、上腹不適等癥狀，嚴重威脅母嬰健康，更有甚者造成孕產婦及圍生兒死亡，其中全身小血管痙攣、內皮損傷等是其基本病理生理變化[12]。現今關于子癇前期的發病機制尚不十分明確，子宮螺旋小動脈重鑄不足學說認為，子癇前期發病的中心環節為滋養細胞侵襲子宮內膜不充分和子宮螺旋動脈重鑄障礙；血管內皮細胞損傷學說認為，缺血缺氧的胎盤可導致“毒性因子”合成和釋放過多并進入血循環，造成母體血管內皮細胞損傷，進而引發子癇前期，抗血管生成因子和可溶性內皮因子在子癇前期的發病過程中發揮了關鍵作用[13-14]。IFIP-16 可能是血管性疾病中的一個重要調控因子，已有研究表明在子癇前期孕婦胎盤組織中其免疫活性和蛋白水平顯著升高[15]，而組織中的IFIP-16 在病毒來源的DNA或紫外線等因素的刺激下，可由胞內轉移至胞外到達外周血中，但關于外周血中IFIP-16 表達情況的研究較少。tTG 是一種具有多功能的蛋白質，屬于轉谷氨酰胺酶 (Transglutaminase，TG) 家族成員，可促進蛋白質賴氨酸殘基與谷氨酰胺殘基交聯，并具有水解和結合三磷酸鳥苷的作用。CHENG等[16]的研究結果表明，呈高表達的tTG在子癇前期孕婦血清中與可溶性血管內皮生長因子受體-1 (sFlt-1) 、可溶性內皮因子 (sEng) 和血管內皮生長因子 (VEGF) 有關，提示tTG在子癇前期發病機制中發揮著重要作用。

本研究顯示，孕12～14周、孕20周時，子癇前期孕婦血清IFIP-16、血清tTG、SBP、DBP、MAP水平及24 h尿蛋白量等指標均明顯高于對照組，重度組以上指標均明顯高于輕度組，說明血清IFIP-16、tTG 可能參與了子癇前期的發生和發展過程，且升高程度與病情嚴重程度有關，病情越嚴重，血清IFIP-16 和tTG 濃度越高。其原因可能是：第一，受細胞壞死或凋亡、紫外線等因素的刺激，子癇前期患者胎盤組織中高表達的IFIP-16 可能作為“毒性因子”釋放進入母體血液循環，導致外周血中IFIP-16濃度增高[17-18]；第二，IFIP-16可能造成內皮細胞損傷，釋放內皮細胞中的IFIP-16進入血液循環，從而導致外周血中IFIP-16濃度增加[19-20]；第三，tTG 基因表達受特異性結合轉生化生長因子、腫瘤壞死因子等誘導，其轉錄受低氧引導因子1α和核因子кB介導，這些誘導因子和介導因子高表達于子癇前期胎盤組織中，使胎盤組織中tTG表達增高，脫落進入母體循環導致外周血中tTG 濃度升高[21-22]。本研究相關性分析結果顯示，子癇前期孕婦血清IFIP-16、tTG 水平與SBP、DBP、MAP水平及24 h尿蛋白量均呈正相關，血清IFIP-16水平與血清tTG水平呈正相關，進一步說明血清IFIP-16、tTG 可能與子癇前期的發生、發展聯系緊密，檢測血清IFIP-16、tTG 水平對子癇前期具有重要的預測價值。本文采用ROC 曲線進一步分析顯示，孕20周時血清中IFIP-16診斷子癇前期的ROC曲線下面積為0.859，鑒別輕度與重度子癇前期的ROC曲線下面積為0.752；血清中tTG診斷子癇前期的ROC曲線下面積為0.796，鑒別輕度與重度子癇前期的ROC 曲線下面積為0.714，說明孕20 周時檢測血清中IFIP-16、tTG水平在子癇前期診斷及病情嚴重程度評估方面具有較高的價值。然而本研究中樣本含量較小，可能影響研究結果，日后的工作中將注意收集病例資料，采用大樣本含量的研究予以補充證實。

綜上所述，在子癇前期發病的早期，IFIP-16、tTG在患病孕婦血清中表達明顯升高，升高程度與病情嚴重程度呈正相關，且血清中IFIP-16、tTG水平與患病孕婦SBP、DBP、MAP 水平及24 h 尿蛋白量呈正相關，檢測孕婦血清IFIP-16、tTG水平有助于預測子癇前期的發生與發展，為早期防治提供依據；孕20 周時檢測血清IFIP-16、tTG水平有助于子癇前期的診斷及病情評估。