鴨關(guān)節(jié)炎的分析與病理學(xué)診斷

王璐璐，李雪鋒，周瑩，劉杰，孫哲

（1.國(guó)家獸用藥品工程研究中心河南洛陽(yáng) 471000；2.洛陽(yáng)中科基因檢測(cè)診斷中心有限公司河南洛陽(yáng) 471000）

鴨關(guān)節(jié)炎又稱鴨關(guān)節(jié)炎綜合征，一般有多種病原菌，多數(shù)為飼養(yǎng)方式不當(dāng)而引起多種病原菌感染，致病主要病原為鴨疫里默氏桿菌等[1]，其次還有大腸桿菌和鏈球菌等[2]。病鴨以關(guān)節(jié)腫大為主，其中以跗關(guān)節(jié)發(fā)病率最高，其次是膝關(guān)節(jié)。剖檢后在腫脹的關(guān)節(jié)囊內(nèi)，積有大量炎性滲出物，滲出液混濁，混有纖維素性物質(zhì),有時(shí)混有血液，呈紅褐色，病程較長(zhǎng)，呈滲出性壞死性病變，積蓄物呈灰黃色干酪樣。

鴨是自然好發(fā)淀粉樣變的動(dòng)物[3]。目前，淀粉樣病變依然是鴨的一種常見(jiàn)疾病，該病受環(huán)境、飼養(yǎng)管理等影響較大，如大腸桿菌的內(nèi)毒素引發(fā)慢性中毒、年齡、遺傳、鴨的適應(yīng)性和行為、飼養(yǎng)管理、營(yíng)養(yǎng)失調(diào)等[4]。臨床中常見(jiàn)的淀粉樣變性屬于繼發(fā)性淀粉樣病變，即淀粉樣變性是繼發(fā)于一些長(zhǎng)期伴有組織破壞的慢性炎癥性疾病，如關(guān)節(jié)炎、骨髓炎等其他炎癥疾病。目前未見(jiàn)關(guān)于鴨疫里默氏桿菌繼發(fā)引起鴨淀粉樣病變的報(bào)道，但可共同引起鴨關(guān)節(jié)炎的大腸桿菌被普遍認(rèn)為可引發(fā)鴨系統(tǒng)性淀粉樣病變[5-6]。

本試驗(yàn)旨在通過(guò)對(duì)2019 年8 月河南省某鴨場(chǎng)病鴨經(jīng)過(guò)剖檢、細(xì)菌學(xué)和病理學(xué)的方法，對(duì)病鴨進(jìn)行病理學(xué)診斷，并確定引起鴨發(fā)病的原因，為臨床治療提供幫助。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

河南省某鴨場(chǎng)送檢的4 只27～43 周齡病鴨，臨床表現(xiàn)為單側(cè)關(guān)節(jié)腫大、瘸腿癥狀，鴨場(chǎng)死亡鴨群中，瘸腿癥狀占60%。

1.2 主要試劑

LEAGENE（改良Highman 剛果紅法）試劑盒（貨號(hào)：DG0023）；胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA），由青島海博試劑有限公司提供；革蘭氏染色試劑，購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。

1.3 病理學(xué)檢測(cè)

對(duì)病鴨進(jìn)行頸靜脈放血處死解剖，病變部位組織（肝、脾、腎、關(guān)節(jié)、心、肺和輸卵管）用10%中性福爾馬林固定3～5d 后，按1cm×1cm×3mm 的大小對(duì)肝、脾、腎、關(guān)節(jié)、心、肺和輸卵管取材，在全自動(dòng)脫水機(jī)中脫水浸蠟；然后使用包埋機(jī)進(jìn)行包埋，待蠟塊凝固脫模后對(duì)其冷凍至合適硬度開(kāi)始切片，切片厚度為3mm。對(duì)組織切片分別進(jìn)行H.E.染色和剛果紅染色（改良Highman 剛果紅法）。

1.4 剛果紅染色

組織切片染色前恢復(fù)至室溫，置于染色架中，常規(guī)脫蠟至蒸餾水；將組織切片置于濕盒，滴加適量改良Highman 染色液，室溫染色20min；在組織切片上滴加或浸入分化液染色缸中，分化2s；自來(lái)水沖洗5min，洗去染色液及分化液；Mayer 蘇木素染色液襯染2min；自來(lái)水洗去未結(jié)合的蘇木素，置自來(lái)水中返藍(lán)2min；逐級(jí)常規(guī)無(wú)水乙醇脫水，二甲苯透明；中性樹(shù)膠封片劑封片。

1.5 細(xì)菌分離

無(wú)菌抽取關(guān)節(jié)腫大處滲出物，對(duì)其進(jìn)行細(xì)菌接種培養(yǎng)（TSA+血清），37℃溫箱中培養(yǎng)24h；肝臟研磨后液體接種于SC 培養(yǎng)基，37℃，恒溫?fù)u床200rpm 中培養(yǎng)24h，接著將SC 液體接種到HE培養(yǎng)基上于37℃溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h；觀察菌落形態(tài)，挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，純化培養(yǎng)后菌株進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢和常規(guī)細(xì)菌生化試驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 解剖學(xué)觀察

解剖學(xué)檢測(cè)：肝臟腫大，表面光滑，質(zhì)地堅(jiān)硬，存在明顯可見(jiàn)黃綠色病變區(qū)（圖1a）；脾臟表面有明顯不規(guī)則灰白區(qū)（圖1b）；腿部關(guān)節(jié)腫大，有干酪樣滲出物（圖1c）；腹腔積液；皮下膠凍樣附著物；胸氣囊和腹氣囊有干酪樣滲出物。

2.2 細(xì)菌分離結(jié)果

關(guān)節(jié)液接種的TSA+血清培養(yǎng)基中(圖2a)，生長(zhǎng)出白色奶油狀大菌落，對(duì)該平板上細(xì)菌進(jìn)行革蘭氏染色，可見(jiàn)細(xì)菌為革蘭氏陰性、短桿狀、兩極著染（圖2c），對(duì)分離到的細(xì)菌進(jìn)行基因測(cè)序后，鑒定為單一的鴨疫里默氏桿菌。在肝臟研磨液接種的HE 培養(yǎng)基中，生長(zhǎng)出黃色菌落（圖2b），觸酶試驗(yàn)呈陽(yáng)性，氧化酶試驗(yàn)呈陰性，對(duì)該平板上菌落進(jìn)行革蘭氏染色試驗(yàn)（圖2d），可見(jiàn)細(xì)菌為粗短、兩端鈍圓的小桿菌，多單個(gè)散在，個(gè)別成雙排列，無(wú)芽孢，革蘭氏陰性。

2.3 組織學(xué)觀察

觀察發(fā)現(xiàn)，淀粉樣物質(zhì)在病鴨肝臟內(nèi)沉積最多，其次為脾臟和腎臟，其他組織未見(jiàn)淀粉樣變。肝臟：肝竇變窄，甚至消失；不可見(jiàn)明顯的肝細(xì)胞索，且均質(zhì)紅染物質(zhì)沉著于肝細(xì)胞索。剛果紅染色后發(fā)現(xiàn)，磚紅色物質(zhì)呈條索狀取代了大部分肝細(xì)胞索（圖1d）。脾臟：脾紅髓內(nèi)有大量呈團(tuán)塊狀或條索狀磚紅色物質(zhì)沉著于脾髓細(xì)胞和淋巴細(xì)胞之間，部分淋巴細(xì)胞發(fā)生萎縮（圖1e）。脾紅髓髓竇內(nèi)出血、大量異嗜性粒細(xì)胞浸潤(rùn)（圖1h）。關(guān)節(jié)：關(guān)節(jié)內(nèi)部血管周?chē)胁糠诸w粒狀磚紅色物質(zhì)沉著（圖1f），關(guān)節(jié)皮膚內(nèi)大量壞死崩解的物質(zhì)并大量異嗜性粒細(xì)胞浸潤(rùn)（圖1i），另外，部分病鴨腎小管中發(fā)現(xiàn)磚紅色物質(zhì)，說(shuō)明淀粉樣變性病變?cè)谀I臟中未呈現(xiàn)較嚴(yán)重的病理變化，對(duì)腎臟的損傷較小。

3 討論

引起鴨關(guān)節(jié)炎的病原菌有許多，其中包括鴨疫里默氏桿菌、葡萄球菌和大腸桿菌等。該病原引起的鴨里氏桿菌病根據(jù)病程長(zhǎng)短可分為最急性型、急性型、亞急性型或慢性型，亞急性型或慢性型一般感染4～7 周齡雛鴨，能長(zhǎng)期存活，但發(fā)育不良，消瘦；病鴨除表現(xiàn)上述癥狀外出現(xiàn)頭頸歪斜，轉(zhuǎn)圈或倒退，病鴨跛行。因此，送檢鴨雖為27 周齡，可能是鴨疫里默氏桿菌在病鴨中呈慢性經(jīng)過(guò)。

淀粉樣變性一般認(rèn)為其是蛋白質(zhì)代謝障礙的一種產(chǎn)物，與全身免疫反應(yīng)有關(guān)，是有網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞所產(chǎn)生，大致分為3 種：AA 淀粉樣變性、AL 淀粉樣變性和Aβ 2M 淀粉樣變性。國(guó)內(nèi)有大量關(guān)于鴨全身性淀粉樣變性的報(bào)道主要為AA 淀粉樣變性，在慢性炎癥反應(yīng)過(guò)程中，血清中會(huì)出現(xiàn)一種大分子量的α 球蛋白，稱為血清淀粉樣蛋白（serumamyloid A，SAA），它是AA 的前體。循環(huán)血液中大分子的SAA 可能經(jīng)巨噬細(xì)胞的溶酶體酶的水解而生成AA沉著于組織中，形成淀粉樣物質(zhì)沉著于組織中。其中，以凌育燊[8]團(tuán)隊(duì)關(guān)于鴨系統(tǒng)性淀粉樣變研究的時(shí)間最早，病鴨全身病理變化較全面，他們認(rèn)為鴨系統(tǒng)性淀粉樣變病屬于繼發(fā)性疾病，細(xì)菌及其內(nèi)毒素能成功誘發(fā)該病。另外，曹洪志等[9]認(rèn)為鴨系統(tǒng)性淀粉樣變的發(fā)生與大腸桿菌的毒素引發(fā)慢性中毒、年齡、遺傳、鴨的適應(yīng)性和行為、飼養(yǎng)管理、營(yíng)養(yǎng)失調(diào)有關(guān)。

圖2 細(xì)菌培養(yǎng)

從病鴨的外觀，最明顯的觀察到病鴨呈跛行狀態(tài)，關(guān)節(jié)腫大；肛門(mén)周?chē)S便污染；進(jìn)行病理剖檢后，觀察到肝臟腫大，表面光滑，質(zhì)地堅(jiān)硬，可見(jiàn)較明顯的黃綠色病變區(qū)。關(guān)節(jié)滲出物接種培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)為較單一的鴨疫里默氏桿菌病原感染，另外在病理切片中觀察到多器官的淀粉樣變性，對(duì)肝臟病變區(qū)進(jìn)行細(xì)菌分離，得到引起鴨全身性淀粉樣病變大腸桿菌的菌落[7]。經(jīng)過(guò)對(duì)鴨淀粉樣病變的對(duì)比，本批病鴨多以鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌混合感染引起的關(guān)節(jié)炎為主要發(fā)病原因，繼發(fā)的大腸桿菌感染引起的鴨系統(tǒng)性淀粉樣變性為并發(fā)癥狀。

4 防治措施

鴨疫里默氏桿菌和大腸桿菌引起鴨場(chǎng)的感染，首先需要加強(qiáng)鴨場(chǎng)飼養(yǎng)管理，經(jīng)常消毒通風(fēng)，勤換墊料，防潮防濕，潮濕的環(huán)境極易滋生細(xì)菌；另外，采用“全進(jìn)全出”的方法，預(yù)防傳染病的發(fā)生。其次進(jìn)行藥物預(yù)防，可在輕微感染和癥狀較輕的鴨群中使用廣譜抗菌藥物如卡那霉素、土霉素等與飼料或飲用水混勻一起飼喂。總之，要樹(shù)立正確的飼養(yǎng)理念，不斷加強(qiáng)鴨舍的日常管理工作。