酶聯免疫試驗兩步法檢測乙型肝炎病毒表面抗原的影響因素研究

孫四力

(駐馬店市中心血站，河南 駐馬店 463000)

血篩兩步法從2010年10月1日開始，所有的試劑全都采用兩步法，停止使用其它方式[1，2]。本文通過駐馬店市中心血站于2016年8月～2018年12月期間的獻血員乙肝標本300例，分析酶聯免疫試驗兩步法在乙型肝炎病毒表面抗原的檢測中的效果。

1 資料和方法

1.1 一般資料

將駐馬店市中心血站于2016年8月～2018年12月期間的獻血人員乙肝標本300例作為本次研究對象，利用酶聯免疫吸附實驗將乙肝表面抗原大于10的陽性標本進行分離，將血清進行混合，作為陽性參照血清；乙肝表面抗原小于1的陰性標本進行分離，將血清進行混合，作為陰性參照血清，將生物科技公司提供的乙肝表面抗原的標準物質作為弱陽性參照血清。

1.2 方法

a)儀器和試劑：全自動酶標儀器和乙型肝炎病毒表面抗原診斷的試劑盒[3]。b)分別在陽性、弱陽性、陰性血清中按照以下的方法進行，每種血清重復加入不少于10次，與標本的S/CO平均值進行對比[4]：按照說明書進行，加入20 μL的稀釋液進行稀釋，再將其加入陽性、弱陽性、陰性的參照血清100 μL，混合均勻，進行溫育，并且封板后放置，溫度為(37±1.1)℃，溫育時間為(60±1.3) min[5]；進行加酶，除空白孔之外每個孔中加入酶標準試劑50 μL，也需要混合均勻；溫育—封板后放置，溫度為(37±1.1)℃，溫育時間為(30±1.4) min[3]；洗板—利用洗板機進行洗滌，不少于5遍，并將其扣干；顏色顯露時間的變化—在每個孔中加入顯色劑A、B液為50 μL，混合均勻，溫度為(37±1.1)℃，顏色顯露的時間為(30±1.4) min；進行最終的測定—在孔中加入50 μL的終止液，均勻混合，10 min內進行結果的測定。

加入1滴稀釋液，除將第一步的稀釋變成為用滴瓶進行滴加1滴之外，其余的方式和標準法一致；沒稀釋液即第一步不加入任何稀釋液，其余和標準法的一致；加入血清之后溫育時間的變化，將標準方法里溫育的時間調整為45 min，其余方法一致；洗板，除先加入血清孵育之后再洗板，其余也與標準法一致；加入酶之后孵育時間的變化，將標準方法里溫育的時間變為15 min，其余方法一致；顏色顯露時間的變化，將標準方法里顏色顯露時間變為15 min，其余一致。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 加入1滴稀釋液

觀察標本加入1滴稀釋液的效果對比見表1。

表1 為加入1滴稀釋液的效果數據

2.2 沒有使用稀釋液

未使稀釋液的觀察標本見表2。

表2 為未使稀釋液的觀察標本

2.3 加入血清之后溫育時間的變化

當標本加入血清之后溫育時間的變化觀察研究見表3。

表3 為加入血清之后溫育時間的變化

2.4 加入血清進行孵育之后洗板

當標本加入血清進行孵育之后洗板數據見表4。

表4 為加入血清進行孵育之后洗板

2.5 加入酶之后孵育時間的變化

當指標加入酶之后孵育時間的變化數據見表5。

表5 為加入酶之后孵育時間的變化

2.6 顏色顯露時間的變化

觀察指標顏色顯露時間的變化數據見表6。

表6 為顏色顯露時間的變化

3 討論

酶聯免疫試驗的準確率高達99.99%，常在篩選血清標本的標志物，隨著技術的成熟，對于乙型肝炎病毒表面抗原診斷的試劑盒進行升級，使得靈敏度和特異性得到了提高[4]。酶聯免疫能夠進一步將血清和酶標志物一同加入，溫育的時間為30 min，在此之后兩步法中加入血清之后溫育的時間也能得到延長。酶聯免疫試驗將顏色顯露的時間從15 min也延長為30 min，該顯露的時間對陽性和陰性標本來說，影響并不大，但對弱性標本的影響就比較大[3,4]。

綜上所述，酶聯免疫的實驗對陽性標本沒有什么影響，因為其含有大量的抗原，抗原抗體會有特異性反應。但是弱陽性標本的結果會被影響，特別是處于灰區的標本影響更為嚴重，因此在日常生活中，必須要按照試劑盒的說明書進行，這樣才能對結果有促進作用，減少誤差誤判。