口腔清潔護理用品 牙膏中3-甲基-4-異丙基苯酚含量的測定高效液相色譜法

前言

本標準按照GB/T 1.1-2009 給出的規則起草。

本標準由中國輕工業聯合會提出。

本標準由全國口腔護理用品標準化技術委員會牙膏分技術委員會(SAC/TC492/SC1)歸口。

本標準起草單位：上海美加凈日化有限公司、納諾神蜂(福建)個人護理用品有限公司、蘇州市金茂日用化學品有限公司、云南白藥集團股份有限公司、廣州薇美姿實業有限公司、廣州質量監督檢測研究院、國家輕工業牙膏蠟制品質量監督檢測中心。

本標準主要起草人： 施裔磊、林澤鴻、陳健芬、高鷹、陳敏珊、郭長虹、李林、陶麗、劉文玉。

本標準為首次發布。

1 范圍

本標準規定了高效液相色譜法測定牙膏中3-甲基-4-異丙基苯酚含量的方法要點、試劑與標準物質、儀器、分析步驟、結果計算、回收率、標準偏差和允許差。

本標準適用于牙膏、漱口水等口腔護理用品中3-甲基-4-異丙基苯酚含量的測定。

本標準3-甲基-4-異丙基苯酚的檢出濃度為0.20μg/mL，定量濃度為0.60μg/mL。若取1.0g樣品，3-甲基-4-異丙基苯酚的檢出限為20mg/kg，定量限為60mg/kg。

2 規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法

3 方法要點

將牙膏用50%甲醇水溶液分散，超聲波提取其中的3-甲基-4-異丙基苯酚成分，然后離心分離并過濾處理，濾液用帶紫外檢測器的高效液相色譜儀分析測定，外標法通過峰面積進行定量計算。

4 試劑與標準物質

4.1 一般規定

除非另有說明，所用試劑均為分析純的試劑，水為符合GB/T 6682規定的一級水。

4.2 3-甲基-4-異丙基苯酚對照品

純度不小于99%。

4.3 甲醇

HPLC級。

4.4 乙腈

HPLC級。

4.5 磷酸二氫鉀

4.6 有機相濾膜

0.45μm。

4.7 水相濾膜

0.45μm。

4.8 50%甲醇水溶液

甲醇和水按1∶1(V/V)混合后，經0.45μm有機相濾膜過濾，并超聲脫氣10min。

4.9 10mmol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液

稱取磷酸二氫鉀1.36g(精確至0.000 1g)，用水溶解并定容至1 000mL，經0.45μm水相濾膜過濾，并超聲脫氣10min。

4.10 標準儲備液

稱取3-甲基-4-異丙基苯酚對照品100mg(精確至0.0001g)，用50%甲醇水溶解并定容至100mL，搖勻，配制成1.0mg/mL的溶液。準確吸取5mL上述溶液，用50%甲醇水溶解并定容至100mL，搖勻，作為含3-甲基-4-異丙基苯酚50.0μg /mL的標準儲備液。

4.11 標準工作液

將標準儲備液用水逐級稀釋，配制成濃度為1.0μg/mL，2.5μg/mL，5.0μg/mL，7.5μg/mL，10.0μg/mL，12.5μg/mL，15.0μg/mL的標準工作液。

5 儀器

5.1 高效液相色譜儀：配紫外檢測器。

5.2 C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)及配套保護柱(4.0mm×10mm，5μm)。

5.3 磁力攪拌器。

5.4 超聲波清洗器：工作頻率≥35kHz，功率≥200W。

5.5 離心機：轉速≥4 000r/min。

5.6 分析天平：精度0.0001g。

6 分析步驟

6.1 試樣處理

牙膏試樣：先擠去大約20mm，再稱取1g(精確至0.000 1g)試樣于100mL燒杯中，用50%甲醇水溶液約80mL溶解，磁力攪拌至分散均勻，超聲提取10min后，轉移至100mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液定容至刻度。搖勻后，將試樣溶液轉移至50mL離心管中，以4000r/min以上離心分離10min。冷卻至室溫后，上清液經0.45μm有機相濾膜過濾，備用。

漱口水試樣：稱取1g(精確至0.0001g)試樣于100mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液溶解并定容至刻度。搖勻后，上清液經0.45μm有機相濾膜過濾，備用。

6.2 測定

6.2.1 色譜條件參考

按照表1設定液相色譜條件。

表1 液相色譜條件

3-甲基-4-異丙基苯酚對照品用等度洗脫方式分析，洗脫程序見表2。

表2 對照品參考程序

牙膏試樣用梯度洗脫方式分析，洗脫程序見表3。

表3 牙膏試樣參考程序

6.2.2 標準工作曲線

準確吸取4.11制備的標準工作液20μL，分別注入高效液相色譜儀，按照6.2.1的色譜條件進行測定，以3-甲基-4-異丙基苯酚的濃度為x軸，其相應的峰面積為y軸，繪制標準工作曲線。

3-甲基-4-異丙基苯酚標準溶液的液相色譜圖，參照附錄中的圖A.1。

6.2.3 測定

準確吸取20μL經6.1處理的試樣溶液，注入高效液相色譜儀測定3-甲基-4-異丙基苯酚的峰面積，由標準工作曲線找出試樣溶液中3-甲基-4-異丙基苯酚的濃度。

試樣溶液的液相色譜圖，參照附錄A中的圖A.2。

7 結果計算

樣品中3-甲基-4-異丙基苯酚的含量X(mg/kg)按式(1)計算：

(1)

式中：X——試樣中3-甲基-4-異丙基苯酚的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；

c——試樣溶液中對應的3-甲基-4-異丙基苯酚的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；

V——試樣定容體積，單位為毫升(mL)；

m——試樣的質量，單位為克(g)；

N——稀釋倍數；

K——對照品中3-甲基-4-異丙基苯酚的純度。

8 回收率

3-甲基-4-異丙基苯酚在添加濃度100mg/kg～400mg/kg范圍內，本標準方法的回收率為96.3%～100.9%。

9 標準偏差

本標準方法的相對標準偏差小于5%(n=6)。

10 允許差

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不應超過算數平均值的10%，取其算數平均值作為測定結果。

附錄A

(資料性附錄)

液相色譜參考譜圖

圖A.1 對照品液相色譜圖

圖A.2 牙膏試樣液相色譜圖