外周血B7-H2聯合白細胞介素22水平變化在直腸癌診斷及預后評估中的價值

侯艷林 王留興

1 河南省孟州市人民醫院腫瘤內科 454750； 2 鄭州大學第一附屬醫院腫瘤內科

直腸癌是普通外科常見的疾病之一，多發生于年齡>65歲的老年患者[1]。由于近年來生活習慣的改變及食品安全問題的不斷出現，直腸癌的發病率明顯升高，根據流行病學調查分析，60%～65%為老年患者[2-3]。B7-H2是新近發現的共刺激分子，主要由抗原呈遞細胞(B細胞、T細胞)分泌，主要參與體內抗原抗體的結合[4]。有研究表明，B7-H2通過減少IFN-γ生成，抑制腫瘤免疫反應，促進非小細胞肺癌的增殖，并與其TNM分期密切相關[5-6]。血清中白細胞介素22(IL-22)水平與機體內炎癥指標關系密切，與腫瘤的進展與預后也具有一定的聯系[7-8]。本研究檢測99例老年直腸癌患者血清中B7-H2聯合IL-22水平變化，分析血清中協同刺激分子B7-H2與IL-22水平與直腸癌預后的相關性及對直腸癌預后的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性收集2016年6月—2018年6月西南醫科大學附屬醫院收治的老年直腸癌患者99例(實驗組)，男59例，女40例；年齡65～80歲，平均年齡(72.3±7.0)歲；體重指數(BMI)為19.23±3.41；TNM分期Ⅰ期14例，Ⅱ期19例，Ⅲ期43例，Ⅳ期23例；伴高血壓37例，伴糖尿病29例，伴陳舊性心肌梗死17例。所有患者均由同一組高年資主任醫師施行直腸癌根治術，術后腫瘤組織均保存于-80℃超低溫冰箱以備用，術后隨訪(139.8±17.4)d。另選取同期該院健康體檢中心的老年健康者50例，男29例，女21例；年齡65～75歲，平均年齡(69.7±5.4)歲；BMI為19.41±2.99。

1.2 納入及排除標準 納入標準：(1)年齡>65歲；(2)術前控制患者的血壓、血糖，排除手術禁忌證；(3)患者以及直系親屬均知情同意，簽署知情同意書。排除標準：(1)年齡<65歲；(2)身體一般情況較差，無法耐受手術；(3)未簽署知情同意書；(4)隨訪較差，依從性差。

1.3 流式細胞儀分析外周血淋巴細胞表面B7-H2的表達 用EDTA抗凝管取所有人外周靜脈血2ml，加入外周血淋巴細胞分離液3～4ml，以1 900r/min，離心20min，得到淋巴細胞，加入其2倍PBS緩沖液，吹打混勻，以1 500r/min，離心5min，棄上清，加入150μl PBS緩沖液，吹打混勻。均分為3管，標記為空白管、CD19+管、CD19+B7-H2管，分別加入CD19+單抗、B7-H2單抗，上機檢測。

1.4 ELISA試劑盒檢測IL-22的水平 采集患者的外周靜脈血2ml，離心得到血清后，按照酶聯免疫吸附試劑盒的說明書，450nm酶標儀檢測吸光度，并計算IL-22相對含量。

2 結果

2.1 B7-H2與IL-22的表達 99例老年直腸癌患者均獲得隨訪，隨訪率為100%，不同TNM分期、淋巴轉移和遠處轉移患者B7-H2和IL-22的高水平與低水平表達差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 99例直腸癌患者B7-H2和IL-22的表達與患者一般資料的比較結果

2.2 外周血淋巴細胞表面B7-H2的表達 實驗組直腸癌患者外周血淋巴細胞表面B7-H2的表達要明顯低于對照健康組患者的B7-H2的表達量(P<0.05)。見圖1。

圖1實驗組和對照組外周血淋巴細胞表面B7-H2的表達

A：對照組 B：實驗組

2.3 血清中B7-H2和IL-22的表達與直腸癌術后患者的預后的生存曲線結果 生存曲線結果顯示，血清中B7-H2和IL-22低表達與高表達患者術后生存率差異有統計學意義(P<0.05)，見圖2、3。生存曲線顯示，血清中B7-H2的表達與直腸癌的預后呈正相關，IL-22的表達與直腸癌的預后呈負相關(r=0.174、-0.296，P<0.05)。

圖2 直腸癌預后和B7-H2表達的關系

圖3 直腸癌預后和IL-22表達的關系

3 討論

臨床上對于直腸癌的治療主要是手術切除，然而對于老年直腸癌患者，流行病學調查分析結果表明，直腸癌的根治術術后5年生存率不足60%，失敗的原因主要是腫瘤的復發和遠處轉移[9-10]。因此對于老年患者直腸癌的臨床篩選，爭取早期發現、早期診斷和早日治療。

CD19分子是血清中淋巴細胞的標志分子，主要調節B細胞的成熟和分化[11-12]。B7-H2分子是近年研究比較熱門的協同刺激分子，主要表達于B細胞表面，與炎癥因子的介導和瀑布式信號傳遞有關，有研究表明，B7-H2分子與直腸癌的病理分型密切相關[13]。然而具體的機制尚未明確。本研究立足于B7-H2分子的生物標志物研究，利用流式細胞儀檢測健康對照組和直腸癌患者血清中B淋巴細胞的B7-H2分子表達，結果表明，實驗組B7-H2分子表達要明顯高于對照組(P<0.05)。說明直腸癌患者中血清B7-H2分子表達升高，可以作為生物標志物，為老年體檢者進行直腸癌篩查，具有很高的臨床意義。

IL-22是白介素家族中的一員，主要由輔助T淋巴細胞、Th22細胞、自然殺傷細胞等分泌產生[14]。有研究表明IL-22除了與炎癥相關外，還與腫瘤微環境的變化密切相關，參與腫瘤細胞增殖、侵襲、轉移等重要過程，另外因為其表達的組織特異性，可以作為各種腫瘤治療的分子靶標，為直腸癌的治療提供依據。本研究將IL-22與協同刺激分子B7-H2相結合，分析其與腫瘤分期的表達，結果表明直腸癌不同TNM分期、淋巴轉移和遠處轉移病例中B7-H2和IL-22的高水平與低水平表達差異有統計學意義(P<0.05)，從而說明B7-H2和IL-22的表達水平高低與直腸癌的進展具有相關性。另外本研究利用Pearson相關性分析血清中協同刺激分子B7-H2與IL-22水平與直腸癌的相關性，為直腸癌的篩查提供依據。生存曲線顯示，血清中B7-H2的表達與直腸癌的預后呈正相關，IL-22的表達與直腸癌的預后呈負相關(r=0.174、-0.296，P<0.05)。

綜上所述，B7-H2和IL-22的表達水平與直腸癌的發生和進展具有相關性，可以作為直腸癌篩查檢測預后的分子標志物。