風濕寧膠囊質量標準的研究

施宏彬，何小利，陸秋靖，岑偉煊，李宏捍

（康美藥業股份有限公司，廣東 廣州）

0 引言

風濕寧膠囊是中華人民共和國衛生部藥品標準收載的風濕定膠囊處方基礎上，增加乳藥、沒藥、紅花、牛膝、蒼術等改良而來。在已有標準基礎上，我們新增白芷和甘草的TLC項目，并增加了HPLC測定處方中白芷的有效成份歐前胡素的含量測定項目，從而提高質量標準，進一步有效控制風濕寧膠囊質量。現制定的質量標準與原標準相比在控制藥品質量和有效成分含量方面更為全面有效，且重現性好。

1 主要試劑與儀器

實驗儀器：為日本島津LC-ACP2010高效液相色譜儀，由日本島津公司制造。

藥品與試劑：對照品和對照藥材購于中國藥品生物制品檢定所，所用試劑為分析純和色譜純，自制的風濕寧膠囊。

2 實驗方法和結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 白芷的薄層色譜鑒別

樣品溶液的制備方法：取內容物1.5g，置于錐形瓶中，倒入乙醚30mL，浸漬60分鐘，時時振搖，濾過，濾液自然揮干，其殘渣滴入乙酸乙酯0.5mL溶解，作為樣品溶液。

另取白芷對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。另精密稱定歐前胡素對照品，滴入乙酸乙酯制備成1mg/mL溶液，作為對照品溶液。照薄層層析法，吸取樣品溶液12μl、對照藥材溶液和對照品溶液10μl，先后點于同一薄層層析硅膠GF254板上，以石油醚（30-60℃）-乙醚（6：4）為展開劑，在25℃以下展開，拿出，揮干，置紫外光燈（254nm）下檢視。樣品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。如圖1。

圖1 風濕寧膠囊中白芷的TLC（熒光）

2.1.2 甘草的薄層色譜鑒別

取內容物5g，加鹽酸12mL與三氯甲烷140mL，加熱沸騰，于回流管中回流1.5小時，放置室溫，過濾，取三氯甲烷溶液，置蒸發皿，水浴蒸干，殘渣滴入甲醇1mL溶解，作為樣品溶液。另取甘草次酸對照品，滴入甲醇制成1mg/mL的溶液，作為對照品溶液。照薄層層析法，吸取上述二種溶液各6μl，先后點于同一薄層層析硅膠G板上，以正丁烷-醋酸乙酯-丙酮 （10：1：5）為展開劑，展開，拿出，揮干，噴以 8%磷鉬酸乙醇溶液，在100℃烘箱加熱至斑點顯色清晰。樣品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。如圖2。

圖2 風濕寧膠囊中甘草的TLC（日光）

2.2 白芷中歐前胡素的含量測定

2.2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Luna 5u C18（2） 100A 4.6mm×250mm；流動相：甲醇-0.2%磷酸溶液（65∶35）流速：1.00mL/min；色譜柱溫度：室溫；測試波長：300nm。在該條件設定下，歐前胡素色譜峰和樣品中其它成分色譜峰能明顯基線分離，分離度大于1.5；按歐前胡素計算，其理論塔板數（N）為3000以上。

2.2.2 對照品溶液制備

精密稱取歐前胡素對照品適量，滴入甲醇制成33μg/mL的溶液，即得。

2.2.3 樣品溶液制備

取內容物約5.0g，精密稱定，置圓底燒瓶中，倒入甲醇45mL，加熱回流60分鐘，取出，過濾，濾液至50mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度，搖晃均勻，即得。

分別取供試品、陰性樣品及對照品溶液各10μl注入液相色譜儀，依法測定，樣品溶液色譜圖中與對照品保留時間一致的色譜峰的紫外吸水光譜與對照品峰的紫外吸水光譜相同，陰性供試品在歐前胡素色譜峰位置處無相應峰出現。見圖3、圖4。

2.2.4 線性關系的考察

按順序精密吸取歐前胡素對照品溶液（C=0.028mg·mL-1）2、4、6、8、10、12μl先后進樣，收集色譜圖，收集各濃度峰面積，結果見表1。以峰面積積分值為縱坐標（Y），進樣量為橫坐標（X），計算得到線性回歸方程式Y=1041.84X-251.49，r=0.9997。

以上結果顯示，在0.056～0.336μg范圍內，不同進樣量濃度與歐前胡素峰面積積分值呈現良好的線性關系。

2.2.5 穩定性試驗

分別精密吸取同一樣品溶液，各10μl，按含量測定項下依法操作，按0，2，4，6，8h時間間隔先后注入色譜儀，測試色譜峰面積，測得峰面積積分值，歐前胡素峰面積值的RSD＜2%，試驗結果表明，樣品溶液在規定的8小時內，呈現穩定性良好。

表1 峰面積積分值及進樣量數據

圖3 風濕寧膠囊樣品供試品HPLC

2.2.6 精密度試驗

取同一樣品溶液，精密吸取各10μl，連續5次注入色譜儀，測試色譜峰面積，歐前胡素峰面積值的RSD＜1%，試驗結果顯示，精密度呈現良好結果。

2.2.7 重復性試驗

取同一樣品五份，按樣品溶液制備方法制備，分別按含量測定項下方法操作，進樣量分別為10μl，測試峰面積積分值，并計算含量，RSD＜2%，試驗結果顯示，重復性呈現良好結果。

2.2.8 回收率試驗

取樣品約2.5g，精密稱定，加甲醇分別為35mL、33mL、31mL使之溶解，分別精密先后滴入歐前胡素對照品溶液（C=0.033mg/mL）10mL、12mL、14mL，平行做兩份，其它步驟按照樣品溶液制備方法制備，按含量測定方法操作，進樣量為10μl，以下列數據計算回收率，測試結果見表2。

表2 加樣回收率數據

試驗結果表明：回收率在97.5%～102.8%之間，加樣回收率呈現良好結果。

圖4 歐前胡素對照品HPLC

2.2.9 三批樣品測定

分別取內容物約5.0g，精密稱定，按樣品溶液制備方法制得樣品溶液，按含量測定方法操作，每次進樣量為10μl，測定結果見表3。

表3 三批中試樣品數據歐前胡素含量（mg/g）

3 討論

分析三批中試樣品測試數據，風濕寧膠囊含白芷以歐前胡素計為0.1562mg/g左右。按此平均含量，調整下浮20%計算，風濕寧膠囊成品每g含白芷以歐前胡素計應為0.1250mg/g左右，同時，考慮到藥材的來源，以及生產劑型過程、貯藏等因素影響，故暫定本品每g含白芷以歐前胡素（C10H10O4）計，不得少于0.12mg，且每粒裝0.3g，即本品每粒含白芷以歐前胡素（C10H10O4）計，不得少于0.030mg。