CYP1A1 基因多態性與肺癌易感性的關系研究

姜雪燕，田曉燕，陳鵬，陳圓，付榮，史麗君，鄔秀娟

（內蒙古自治區腫瘤醫院，內蒙古 呼和浩特）

0 引言

肺癌是因吸煙、輻射、肺部慢性疾病、遺傳等因素引發的惡性腫瘤，其發病率及死亡率極高，是全世界公認的對人群健康和生命威脅最大的疾病之一。近年來，有研究發現肺癌與DNA 修復酶相關，修復酶基因突變，會導致DNA 損傷無法及時修復，從而引起肺癌易感性增加[1]。細胞色素P450（CYP450）作為I 相代謝酶的主要組成，越來越多學者開始研究CYP450家族中的相關酶基因多態性與肺癌的關系[2]。本文從主要研究CYP450 家族中廣泛存在的CYP1A1，研究其主要位點MspI 的基因多態性，分析其與肺癌易感性的關系。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選擇2017 年6 月至2019 年6 月我院接受的124 例肺癌患者為研究對象，將其劃分為觀察組，同期抽取124 例體檢健康人群設為對照組。其中對照組男性73 例，女性51 例，平均年齡（59.18±9.02）歲，鱗癌33 例，腺癌59 例，腺鱗癌6 例，小細胞肺癌26 例；觀察組男性69 例，女性55 例，平均年齡（60.02±9.57）歲，研究對象資料經檢驗無顯著性差異（P＞0.05）。

觀察組納入標準：①患者經病理學檢測或灌洗液、痰液細胞學檢測可確診為肺癌，病理分期均為Ⅲ～Ⅳ期；②不存在其他部位惡性腫瘤；③不存在嚴重心、腦、肝、腎等器質性疾病；④無惡性貧血；⑤免疫正常的患者；⑥所有患者均對本研究方案完全知情且自愿參與。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集與處理

所有患者于清晨空腹狀態下抽血，采取外周靜脈血3～5 mL，使用EDTA 抗凝采血管收集并置于-80 ℃環境保存。送至實驗室后，取出冷凍保存的血液樣本于室溫下溶解，采用離心柱法提取200 μL 血液的DNA，研究使用的試劑為上海麥克林科技有限公司提供，均按照試劑盒說明書進行操作。

1.2.2 CYP1A1 基因PCR 擴增與鑒定

CYP1A1 基 因PCR 擴 增 采 用QuantStudio 5 IVD 實時熒光定量PCR 儀（美國賽默飛世爾科技公司），利用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性（PCR-RFLP）技術分析CYP1A1 MspI 位點多態性，PCR 反應體系總體積 為50 μL，其 中PCR 反 應 緩 沖 液50 mmol/L，DNF 模板75 ng，dNTP200 μmol/L，上 游 引 物0.4 μL，下 游 引 物0.4 μL，TaqDNA 聚 合 酶1 U。CYP1A1 下 游 引 物 序 列 為5’-CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT-3’，上 游 引 物 序 列 為5’-TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT-3’。PCR 擴 增 條 件 為95 ℃預變形5 min，在94 ℃ 60 s、60 ℃ 60 s、72 ℃ 60 s 溫度和時間條件下循環35 次，末次循環后以72 ℃孵育8 min。擴增產物加樣于2%的瓊脂糖凝膠中，混勻后在電流20 mA、電壓80 V 的條件下進行30 min 電泳。采用DL2000（大連寶生物工程有限公司）觀察凝膠成像并拍照，回收PCR 產物并用分光光度儀判定回收是否成功。

1.2.3 測序

PCR 產物采用oligo6.0 軟件進行測序，測序后所得序列與Genebank 中的CYP1A1 基因序列進行核對，堿基判讀結果需多次核對，盡可能減少誤差。

1.3 統計學方法

研究涉及的計數資料以頻數表示，基因型頻率以SPSS 17.0 for windows 軟件行統計學分析，采用t 和χ2檢驗，P＜0.05 表示數據差異具有統計學意義。

2 結果

兩組CYP1A1 MspI 位點基因多態性頻率分析：兩組CYP1A1 基因野生型（m1/m1）、突變雜合型（m1/m2）發生頻率分布不具有統計學意義（P＜0.05），突變純合型（m2/m2）頻率顯著高于對照組，數據差異具有統計學意義（P＜0.05），證明CYP1A1 MspI 位點為m2/m2 基因型與肺癌易感性有相關性，詳見表1。

表1 觀察組和對照組CYP1A1 基因多態性頻率對比[n(%)]

3 討論

肺癌是臨床上發作率極高的惡性腫瘤疾病，目前已成為全世界共同關注的重點健康問題。肺癌可因吸煙、輻射、肺部慢性疾病、遺傳、大氣污染等因素誘發，此外，近年來有研究發現，肺癌與DNA 修復酶密切相關，DNA 修復酶基因突變，會促使肺癌發生和發展[3]。而CYP450 作為I 相代謝酶的重要組成，是研究肺癌遺傳分子學機制重要的出發點。

CYP1A1 是CYP450 家族的主要成員，其中CYP1A1 基因編碼芳烴羥化酶，其可激活進入人體的多環芳烴類致癌物，使其轉化為酚類和環氧化合物[4]。目前，已有研究發現CYP1A1、基因缺陷會導致子宮內膜癌、食管癌等疾病的發生，而其對于肺癌是否具有影響性，還需進一步探明[5-6]。

CYP1A1 常見的突變位點為MspI 位點，其中MspI 位點基因多態性具有3 種基因型：野生型（m1/m1）、突變雜合型（m1/m2）、突變純合型（m2/m2），其會對化學物質產生代謝活化作用，從而改變癌基因或抑癌基因表達，影響腫瘤生成；本研究結果顯示肺癌人群與正常人群CYP1A1 MspI 位點m1/m1、m1/m2 基因型發生頻率不具有統計學意義（P＞0.05），而m2/m2 型頻率明顯增高，差異具有顯著性（P＜0.05），證明CYP1A1 MspI 突變純合型基因型是肺癌的危險因素。

綜上所述，運用分子生物學檢測肺癌患者基因及分子的改變，證明CYP1A1 MspI （m2/m2）基因型的人群更易感肺癌，為肺癌的遺傳分子學機制提供了有效依據，但由于遺傳因素對基因變異的影響具有多樣性，CYP450 家族中的相關酶基因多態性與肺癌易感性還需要進一步考證。