甘油-3-磷酸脫氫酶-1-樣基因在重度子癇前期胎盤組織中的表達及意義

付晗，崔世紅，劉靈，陳娟，孟潔，閆書君，綦月，劉貝貝，汪田田

（鄭州大學第三附屬醫院婦產科，河南 鄭州）

0 引言

重度子癇前期（sPE）常伴有嚴重的并發癥，嚴重威脅母嬰生命健康，但其病因及發病機制尚不明確。目前普遍認為胎盤缺血缺氧是子癇前期發病的關鍵環節[1,2]。甘油-3-磷酸脫氫酶-1-樣（GPD1L是新發現的具有調控細胞的增殖分化、新生血管的形成、能量的產生及免疫應答的生物學功能，參與調節細胞對低氧環境的適應[3,4]。因此本文主要通過檢測GPD1L在重度子癇前期胎盤組織中的表達情況，分析其在重度子癇前期中的發病機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年3月至2019年3月在鄭州大學第三附屬醫院產科住院并分娩的孕婦100例，其中50例為患有重度子癇前期的孕婦，即實驗組；50例產前檢查正常的健康孕婦，即為對照組。同時為排除年齡的影響，兩組孕婦的年齡控制在2歲以內。排除標準：自身免疫性疾病、嚴重炎癥、慢性肝腎心功能不全、慢性高血壓、妊娠期高血壓病史及其它產科合并癥或并發癥者等。重度子癇前期的診斷標準均符合《婦產科學》第9版[5]。同時對兩組孕婦的年齡、孕周、收縮壓、舒張壓等基本數據進行分析。本研究經鄭州大學第三附屬醫院倫理委員會批準，研究對象均簽署知情同意書。

1.2 方法

胎盤娩出后5分鐘內在母體面4個象限的中央部位避免出血、梗死及鈣化灶等異常組織各取1塊約1 cm3大小的胎盤組織，其中取任意兩塊組織經石蠟包埋后編號；另兩塊組織經過清洗編號后保存于-80℃冰箱。

（1）免疫組化法檢測胎盤組織中GPD1L蛋白的表達情況 將標本制成切片后經過一系列的脫蠟、水化，抗原高溫修復等一系列操作步驟。采用盲法由2名副主任醫師以上的病理科醫生在光學顯微鏡（400倍）下觀察免疫組化染色后的組織并評分。陽性細胞判斷標準：根據細胞質染色情況和陽性細胞數來判定蛋白的表達情況；即染色強度分數+陽性細胞百分比≥2分為陽性，染色強度分數+陽性細胞百分比＜2分為陰性。

（2）實時熒光定量PCR法檢測胎盤組織中GPD1L mRNA的表達 提取胎盤組織中的總RNA，進過一系列的沉淀洗滌干燥等操作步驟后測RNA濃度和純度。GPD1L mRNA的上 游 引 物：5’-TCGTTAGTTGTCAGAATA-3’，下 游 引 物：5’-TGTTAATCAGAAGAATGTG-3’；擴張反應條件：95℃預變性10 min；95℃變性30 s；58℃退火；72℃延伸30 s；40個循環。采用2-ΔΔCt法計算兩組胎盤組織中GPD1L mRNA的相對表達量。

1.3 統計學處理

采用SPSS 21.0軟件進行統計學分析。正態分布的計量數據采用均數±標準差（±s）表示，行t檢驗；計數資料用百分比表示；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況

2組孕婦的年齡控制在2歲以內差異無統計學意義（P＞0.05）；孕周、收縮壓及舒張壓、孕次及產次比較差異有統計學意義（P＜0.05）（見表1）。

表1 兩組孕婦一般情況比較

表1 兩組孕婦一般情況比較

組別 n 年齡（歲） 孕周（天） 收縮壓（mmHg） 舒張壓（mmHg） 孕次 產次實驗組 50 30.480±5.384 230.500±14.967 184.720±19.336 116.920±9.113 2.440±1.013 1.540±6.676對照組 50 29.440±4.891 276.940±7.665 113.140±7.166 71.280±6.698 1.620±0.923 1.140±0.351 t值 - 1.011 -19.528 24.545 28.535 4.224 3.713 P值 - P＞0.05 P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05

2.2 兩組胎盤組織中GPD1LmRNA的表達水平及GPD1L蛋白的陽性表達情況

與對照組相比，重度子癇前期胎盤組織中GPD1L mRNA的表達量明顯低于對照組（P值＜0.001）；GPD1L蛋白的陽性率（66%，P＜0.05），明顯低于對照組（見表2）。

表2 兩組胎盤組織中GPD1LmRNA，n=50）

表2 兩組胎盤組織中GPD1LmRNA，n=50）

images/BZ_13_201_556_1207_615.png實驗組 50 19（38%） 0.439±0.082對照組 50 33（66%） 1.0061±0.137 t值 - - -25.201 P值 - - ＜0.001

3 討論

重度子癇前期是妊娠期一種特發性疾病，可導致母體全身多臟器功能受累、胎兒生長受限、胎兒窘迫、早產及死產等不良結局，是母嬰患病率及死亡率死率升高的主要原因之一[6,7]。目前普遍認為子癇前期是一種多因素、多機制及多通路致病的疾病，其中胎盤功能受損導致的胎盤缺血缺氧是子癇前期發病的關鍵環節[5]。因此，參與胎盤在低氧環境下調解的缺氧因子是目前國內外學者研究熱點之一。

人類的GPD1L基因位于3p22.3染色體上，其編碼的由351個氨基酸組成的蛋白質與GPD有同源性，故二者具有相似的生物學功能[8,9]。研究表明，GPD蛋白參與磷酸甘油穿梭，具有調節細胞的增殖凋亡、新生血管的形成、滲透調節及影響能量的產生等功能[10,11]。

Kelly等研究表明[12]，GPD1L蛋白參與調節HIF-1a蛋白的降解過程，而在低氧條件下，這一調節作用被抑制導致HIF-1a蛋白大量累積參與細胞對缺氧環境的適應。馮芝恩等[13]研究證實，GPD1L在腫瘤細胞中同樣具有調節HIF-1a的作用進而影響腫瘤細胞增殖分化及凋亡。目前大量研究證實[14-19]，HIF-1a參與子癇前期相關的低氧反應基因表達調節，如血管內皮生長因子（VEGF）及其受體（sFlt-1）、胎盤生長因子（PIGF）、腫瘤壞死因子、及內皮素-1（ET-1）等，進而影響子癇前期胎盤新生血管的形成及滋養細胞的增殖與分化能力。因此可以推測，GPD1L參與細胞及機體的低氧應答調控。本研究結果顯示，與對照組相比，在重度子癇前期患者胎盤組織中GPD1L mRNA低表達且GPD1L蛋白的陽性表達率明顯降低，說明胎盤處于缺氧狀態及GPD1L參與重度子癇前期胎盤的低氧應答調控。

因此，本研究說明GPD1L可能參與重度子癇前期的發生發展過程，但其具體機制尚需進一步探索及大樣本數據的支持。但本研究為重度子癇前的未來提供一個新的思路。