Sysmex XN-350血細胞分析儀體液模式對胸腹水細胞學計數及其分類的評價

張衛，吳茜★，權志博，李彥魁，李卓

（1.陜西中醫藥大學醫學技術學院，陜西 西安；2.西安醫學院第一附屬醫院檢驗科，陜西 西安）

0 引言

目前，國內大多數檢驗科對胸腹水標本的細胞學計數和分類仍處于手工操作階段，該法步驟繁瑣，時間長。由于受到操作人員、操作習慣、熟練程度等因素的影響，因而產生了結果重復性差的問題。這不僅困擾實驗室人員，也干擾臨床醫生為病人用藥。因此，尋求便捷的方法在保證檢驗報告準確的前提下來提高效率，縮短實驗室內周轉時間(TAT)為臨床提供檢驗結果已成為當務之急。

1 材料與方法

1.1 標本來源與主要試劑

標本來源于2018年8月至2019年8月，西安醫學院第一附屬醫院住院患者的胸腹水標本505份。其中，男性389例，女性107例，年齡位于15歲到80歲不等，中位年齡45歲。

儀器與試劑：Sysmex XN-350血液分析儀以及配套檢測試劑以及體液模式所用的質控品和定標品，Olympus 雙目顯微鏡，瑞氏-吉姆薩染色液，牛鮑計數板，微量吸管，冰醋酸。

1.2 方法

1.2.1 儀器精密度調試

儀器精密度參考文獻[1]，取3份通過手工法計數，白細胞總數分別為WBC＜50×106/L、WBC（50～300）×106/L、和WBC＞300×106/L的胸腹水標本，在室溫下每份標本用Sysmex XN-350血細胞分析儀體液模式連續測定10次，得出白細胞總數（計算出各自的標準差（SD）與變異系數（CV）。CV≤30%表示精密度在允許的范圍，并具有良好的重復性。

1.2.2 線性范圍驗證

取1份WBC計數約500×106/L的胸腹水標本，分別按200%、100%、80%、60%、40%、20%、10%用生理鹽水稀釋。稀釋后，每個稀釋度連續檢測5次，計算出均值。將實際值與理論值作比較，計算Y=ax+b，進行線性回歸分析。

1.2.3 臨床胸腹水樣本的測定

將每份樣本混勻后分成三份。第一份使用Sysmex XN-350血細胞分析儀體液模式檢測，記錄其白細胞計數和分類結果。第二份使用牛鮑計數板充池計數白細胞，對濃度過大的標本，用白細胞稀釋液稀釋后計數。第三份離心后，取適量沉淀涂片，瑞氏染色6min后顯微鏡分類200個細胞。WBC分類計數參照NCCLS H20-A規定的方法，為保證鏡檢結果的一致性和準確性，選取2名經過形態學考核合格的人員采用雙盲法進行。取2人WBC分類及計數結果的均值與血細胞分析儀體液模式測定的結果進行比較。當兩人結果差距超過30%時，由第三人進行復檢，選取兩名差別較小的結果取平均值。

1.2.4 統計學處理

采用統計學軟件SPSS 18.0 對數據進行處理，相關性分析采用Pearson檢驗，計算相關系數(r)值和斜率a值，利用配對t檢驗，計算出每組的t值和P值，當P＜0.05時，有統計學意義。

2 結果

2.1 精密度分析

血細胞分析儀體液模式對高、中、低3份WBC濃度的胸腹水標本各進行10次計數和分類測定，計算出均值(x)、標準差(SD)與變異系數(CV)。結果顯示CV均＜30%，在廠商規定的使用范圍內。說明本次使用的血細胞分析儀體液模式對胸腹水標本WBC的計數具有良好的重復性。白細胞計數結果(見表1)。

表1白細胞計數精密度結果

2.2 線性范圍驗證

通過計算，白細胞的線性方程為Y=0.983x+0.629，R2為0.999，符合廠商規定的a值范圍1.0±0.05和R2＞0.951的要求。WBC的線性范圍為（1.02-10.3）×106/L，結果見圖1。

圖1 白細胞計數線性范圍驗證

2.3 兩種檢測方法白細胞總數結果比較

低值組：≤50×106/L的胸腹水標本測定后進行配對t檢驗，結果顯示低值組P＜0.05，差別有統計學意義。對中值組：（50～300）×106/L、高值組：＞300×106/L兩組胸水標本分別進行配對t檢驗，結果顯示P值均大于0.05，無統計學意義。線性相關分析表明兩者呈正相關（r＞0.9）。結果見圖3。

圖2 低值組WBC線性分析

2.4 兩種檢測方法白細胞分類

通過上述結果，手工法和儀器法在中高值組白細胞計數上兩種方法無統計學意義。我們對高值組的白細胞進行分類，并做統計學分析。結果發現當單核細胞比例較少時，儀器法對白細胞的分類和手工法分類相比變異系數較小，但是當單核細胞比例較大時，手工法和儀器法在白細胞分類上結果相差較大。結果見圖4。

3 討論

圖3 中高值組WBC線性分析

圖4 儀器法與手工法白細胞分類CV值比較

胸水細胞計數和分類對臨床診斷疾病有重要的意義，可用于病情的預測、轉歸、以及療效觀察。然而，這項檢查操作的金標準主要是依靠手工計數和顯微鏡分類[2]，該法有以下缺點，第一，耗時，在較短時間內難以將結果反饋給臨床，耽誤治療。在實驗室內難以提高工作效率。第二，受技術誤差影響較大，由于操作人員、熟練程度的不同，結果也不盡相同。因而，尋求一種更為便捷快速的方法來檢查體液細胞，已變得尤為重要。

近年來，越來越多的實驗室工作者提出用血球儀或者全自動尿沉渣儀來對體液細胞進行計數和分類[3]。Sysmex XN-350血液分析儀采用半導體激光原理結合流式細胞和核酸熒光染色技術對血白細胞進行分類和計數。本實驗采用Sysmex XN-350血球儀的體液模式對胸腹水標本進行計數和分類，為驗證該檢測的準確性，我們對儀器法結果與手工法結果進行統計學比較分析。結果顯示，在精密度和重復性滿足要求的情況下，中、高值標本的白細胞計數無統計學意義，但是低值標本的儀器法和手工法結果差別較大。Aulesa等人對白細胞＜100×106/L的標本進行手工法計數時，發現兩名人員計數結果變異系數可達30%[4]，所以差異原因較大也有可能是手工法導致的。XN-350血細胞分析儀體液模式檢測體液細胞下限比拜耳的 ADVIA 120血細胞分析儀體液模式檢測體液細胞下限47×106/L略高，和SysmexXE-2100血細胞分析儀體液模式檢測體液細胞下限 50×106/L 相同[2]。有學者認為在胸腹水標本細胞數較低的情況下，結果應以儀器法為準，以100×106/L的標本為例， ADVIA120在檢測時，大概要計數700個細胞，而手工法一般只分100個細胞[6]。然而我們發現，隨著細胞濃度的減少，分類時高熒光細胞（HF）比例會假性增加。臨床上大多數胸腹水標本細胞數量都是高于該值的[7]，在本次實驗的505例標本中，僅有25例標本細胞數低于50×106/L。

中高值標本手工法和儀器法計數無統計學意義，說明XN-350在特定條件下可以替代手工法計數。在分類上，當單核細胞比例較低的情況下，白細胞分類相差不大，但是當單核細胞比例較高時，儀器法計數的單核細胞比例比手工法高，究其原因儀器可能將間皮細胞，某些腫瘤細胞分入單核細胞內[8]。所以當用儀器法測定胸腹水標本時，若提示單核細胞過高，應進行手工法分類復檢。此外，在對細胞數量過多的標本進行檢測時，儀器提示“細胞數量過多，無法檢測”時，應對標本進行稀釋到（100-300）×106/L時檢測，手工法和儀器法呈正線性相關。

本實驗表明XN-350可以用來做胸腹水標本的細胞學分析，然而卻有一定的限制。因此，在接受到標本后，應對病例進行查看，以下情況建議手工法來完成操作，1.懷疑為惡性腫瘤病人的胸水；2.用儀器法分類時，單核細胞比例過高時；3.細胞數過高或者高低的標本。