血清Gas6和TSP-1水平與糖尿病視網(wǎng)膜病變的相關(guān)性研究

羅文強(qiáng),茹 平

(1.陜西省咸陽(yáng)市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西咸陽(yáng) 712000.2.西安市第八醫(yī)院檢驗(yàn)科，西安 710061)

糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)的微血管并發(fā)癥是糖尿病常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，是導(dǎo)致成人失明的主要原因[1]。研究顯示，血小板反應(yīng)蛋白-1( thrombospondin-1,TSP-1)和生長(zhǎng)停滯特異基因 6(growth arrest specific gene 6,Gas6)可能參與糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展[2-3]。本研究通過(guò)分析DR患者血清TSP-1和Gas6水平的變化,探討兩指標(biāo)在DR的發(fā)生及病情進(jìn)展中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2017年3月～2019年3月在陜西省咸陽(yáng)市中心醫(yī)院和西安市第八醫(yī)院就診的152例T2DM患者作為研究對(duì)象。依據(jù)DR分型標(biāo)準(zhǔn)分為增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病(PDR)組,非增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變(NPDR)組和單純糖尿病(DM)組。PDR組45例，男性25例，女性20例，年齡39～65歲，平均年齡49.2±8.7歲,平均DM病程9.3±5.2年；NPDR組52例，男性29例，女性23例，年齡41～66歲，平均年齡50.1±8.5歲,平均DM病程8.9±5.7年；DM組55例，男性33例，女性22例，年齡40～67歲，平均年齡51.3±9.1歲,平均DM病程9.2±5.5年。排除急慢性炎癥、高血壓、冠心病和各種腎臟疾病等。T2DM診斷均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)會(huì)(2013)標(biāo)準(zhǔn)，各組DM患者的年齡、性別和DM病程比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,具有可比性(均P>0.05)。本研究通過(guò)陜西省咸陽(yáng)市中心醫(yī)院和西安市第八醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并得到所有參與者的許可。

1.2 試劑和儀器 采用 Phlilips-IUs2型彩色多普勒超聲儀檢測(cè)視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈收縮期最大流速(peak systolic velocity，PSV)和舒張末期血流速度(end diastolic velocity，EDV)，采用非散瞳眼底照相機(jī)(CR-PGI，Canon)對(duì)患者進(jìn)行眼底攝片。血清Gas6 和血漿TSP-1水平采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定(上海通蔚實(shí)業(yè)有限公司試劑盒)。空腹血糖(fasting serum glucose,FSG)水平采用己糖激酶法測(cè)定(Roche 羅氏C8000全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑盒)，糖化血紅蛋白A1c(glycocsylated A1c,HbA1c)水平采用液相色譜法檢測(cè)(美國(guó)BioRad 10及配套試劑盒)。

1.3 方法

1.3.1 DR診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：DR分級(jí)依據(jù)2002年糖尿病視網(wǎng)膜病變的國(guó)際臨床分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：①無(wú)明顯視網(wǎng)膜病變；②NPDR定義為僅見(jiàn)微動(dòng)脈瘤或4個(gè)象限內(nèi)可見(jiàn)2處以上的視網(wǎng)膜內(nèi)出血或2個(gè)或以上象限發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜靜脈呈串珠樣改變或1個(gè)或以上象限有明顯的視網(wǎng)膜內(nèi)微血管異常；③PDR定義為有明顯的新生血管形成、視網(wǎng)膜前出血或玻璃體出血。

1.3.2 標(biāo)本采集：所有研究對(duì)象禁食12h后被采集靜脈血5ml，取1ml血液置于EDTA-K2抗凝管內(nèi)用于檢測(cè)HbA1c水平。取4ml血液離心分離血清用于檢測(cè)FSG,TSP-1和Gas6水平。所有實(shí)驗(yàn)在2h內(nèi)完成。正常參考區(qū)間HbA1c為4.8%～6.5%，F(xiàn)SG為3.90～6.10mmol/L，血清TSP-1為220.33～336.92ng/L，血清Gas6為8.91～12.37ng/L。

1.3.3 視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈血流頻譜檢測(cè)：采用多普勒血流成像技術(shù)測(cè)量視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈血流頻譜，測(cè)量T2DM患者的PSV和EDV，受試者處于仰臥位，眼睛稍微閉上，將探頭置于上眼瞼，進(jìn)行縱向和橫向掃描。觀察視神經(jīng)內(nèi)視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈的血流狀況。將頻譜多普勒采樣線與血流軸線的夾角調(diào)整到60度以下，在視乳頭后1厘米處取脈沖多普勒。

2 結(jié)果

2.1 DR患者視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈超聲分析 見(jiàn)表1。與DM組比較，PDR組和NPDR組的PSV和EDV顯著降低,其中PDR組降低更顯著，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0. 01).

2.2 DR患者生化指標(biāo)分析 見(jiàn)表2。與DM組比較，PDR組和NPDR組Gas6和TSP-1水平顯著降低，而FSG和HbA1c水平則顯著增高；其中PDR組Gas6和TSP-1水平降低更顯著，而FSG和HbA1c水平增高更顯著，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0. 01)。

表1 DR患者視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈超聲分析

表2 DR患者生化指標(biāo)分析

注：(q檢驗(yàn))與DM組比較，*P<0. 01；與NPDR組比較，#P<0. 01。

2.3 相關(guān)性分析 在PDR組和NPDR組中，血清Gas6和TSP-1水平分別有正相關(guān)性(r=0.819，0.837，均P<0.01)。在NPDR組和PDR組中，Gas6和TSP-1水平分別與FSG，HbA1c 水平有負(fù)相關(guān)性，而與視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈PSV和EDV有正相關(guān)性(均P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3 DR患者血清Gas6和TSP-1水平與各指標(biāo)的相關(guān)系數(shù)(r)

3 討論

糖尿病視網(wǎng)膜血管并發(fā)癥是導(dǎo)致成人失明的主要原因，其表現(xiàn)為視網(wǎng)膜的炎癥、血管通透性增加和新生血管生成等。研究認(rèn)為，長(zhǎng)期高血糖暴露可引起視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞過(guò)度增殖和遷移，進(jìn)而誘導(dǎo)DR的發(fā)生[5]。TSP-1是一種細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白,其差異性的表達(dá)可以調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞的功能。研究顯示，體內(nèi)低濃度的TSP-1可誘導(dǎo)血管的生成，沉默TSP-1表達(dá)可促進(jìn)視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞的異常增殖、遷移及視網(wǎng)膜血管形成，研究證實(shí)DR患者血清TSP-1的表達(dá)顯著減少[5-6]。王云楓等[7]對(duì)48 例T2DM的研究結(jié)果顯示，DR患者血清TSP-1水平明顯低于單純DM組和正常對(duì)照組，且單純DM 組 TSP-1水平明顯低于正常對(duì)照組。本研究結(jié)果顯示PDR組和NPDR組TSP-1 水平顯著低于DM組，且PDR組降低更顯著。提示TSP-1的異常表達(dá)影響視網(wǎng)膜局部的血管生成，低水平的TSP-1促進(jìn)視網(wǎng)膜的內(nèi)皮細(xì)胞增生及血管生成。進(jìn)一步的研究顯示PDR組和NPDR組TSP-1 水平分別與FSG和HbA1c有負(fù)相關(guān)性，提示TSP-1可能與DR的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。多普勒超聲檢查的結(jié)果顯示DR患者視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈的PSV和EDV明顯降低[8]，與本研究的結(jié)果相符。進(jìn)一步地研究顯示PDR組和NPDR組TSP-1 水平與視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈的PSV和EDV有正相關(guān)性，推測(cè)TSP-1可能參與DR的病理過(guò)程。以上提示TSP-1的低表達(dá)可能與糖尿病視網(wǎng)膜微血管功能障礙有關(guān)。

Gas6屬于維生素 K 依賴性蛋白家族成員，研究證實(shí)Gas6參與炎性反應(yīng)、血管形成和免疫調(diào)節(jié)等生物效應(yīng)過(guò)程[9]。研究顯示Gas6 / Axl 信號(hào)通路可通過(guò)下調(diào)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2的活性而抑制血管生成[10]，Gas6在DR中的應(yīng)用也已經(jīng)被證實(shí)。研究發(fā)現(xiàn)PDR組和NPDR組T2DM患者的血清 Gas6 水平均顯著低于單純DM組，且PDR組患者顯著低于NPDR組[3]，這與本研究的分析結(jié)果相符，提示Gas6可能通過(guò)影響T2DM患者的視網(wǎng)膜血管生成而參與DR的病變過(guò)程。本研究進(jìn)一步對(duì)Gas6進(jìn)行相關(guān)性分析的結(jié)果顯示PDR組和NPDR組血清Gas6水平分別與FSG和HbA1c水平有負(fù)相關(guān)性，而與視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈的PSV和EDV則有正相關(guān)性，推測(cè)DR患者血清Gas6水平降低可能與視網(wǎng)膜新生血管形成有關(guān)。

綜上所述，分析T2DM患者血清Gas6和TSP-水平與 DR 的相關(guān)性可以預(yù)測(cè)DR的發(fā)生，評(píng)價(jià)DR的病情進(jìn)展，并為DR發(fā)病機(jī)制的研究提供新的線索。