橋本甲狀腺炎患者外周血液MCP-1和CD195水平檢測的臨床意義及相關性研究

茹 平,黃 剛

(1.西安市第八醫院檢驗科，西安 710061；2.陜西中醫藥大學附屬醫院檢驗科, 陜西 咸陽 712000)

橋本甲狀腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)是一種由免疫介導的自身免疫性疾病[1]。研究指出,白細胞分化抗原(cluster of differentiation,CD)195和單核細胞趨化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)與甲狀腺的免疫紊亂有關[2-3]。筆者通過分析HT患者外周血液MCP-1和 CD195水平的變化與HT 的相關性,進而為HT的臨床干預提供依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2017年7月～ 2019年 7月期間在西安市第八醫院和陜西中醫藥大學附屬醫院就診的82例HT患者作為研究對象,依據患者甲狀腺功能狀況分為正常組和甲狀腺功能減退(甲減)組。其中正常組40例，女性33例，男性7例，平均年齡46.2±11.7歲,病程2.63 ±3.28年；甲減組42例，女性35例，男性 7例，平均年齡49.3±12.3歲,病程2.79 ±3.17年。HT 診斷標準參照《中國甲狀腺疾病診治指南》[4]：甲狀腺彌漫性腫大；血清甲狀腺球蛋白抗體或甲狀腺過氧化物酶抗體(thyroid peroxidase antibody,TPO-Ab)滴度明顯升高(>50%)即可診斷；若患者臨床表現不典型，則需抗體滴度連續二次 ≥60%，同時患者甲狀腺超聲結果需呈現彌漫性甲狀腺腫大伴低回聲。選擇35例同期體檢健康者作為對照組。排除標準:伴有其他內臟器官惡性腫瘤者;近 3 個月伴有感染者;其他自身免疫性疾病患者。各組研究對象的年齡、性別構成無明顯差異，正常組和甲減組的病程比較差異無統計學意義(P>0.05)。本研究已獲得西安市第八醫院和陜西中醫藥大學附屬醫院醫學倫理委員會批準，并得到所有研究對象的知情同意。

1.2 試劑和儀器 MCP-1水平檢測試劑盒由上海江萊生物科技有限公司提供，CD195水平檢測采用 FACS Scan 流式細胞儀(美國 BD 公司)，異硫氰酸熒光素標記的鼠抗人CD195抗體購自深圳晶美生物工程有限公司。所有研究對象均接受甲狀腺超聲檢查,采用 Phlip IU22 彩色超聲診斷儀(探頭頻率為10MHz)，正常值參考范圍為 FT3: 2.7～6.5 pmo1/L， FT4: 11.5～22.7 pmol/L，TSH: 0.35～5.5 uIU/ml， TPO-Ab:0～34IU/ml。

1.3 方法

1.3.1 研究方法：觀察所有研究對象的外周血液CD195,MCP-1,TSH,FT3,FT4和TPO-Ab水平的變化,并對研究對象進行甲狀腺超聲檢查.MCP-1水平檢測采用酶聯免疫吸附法，CD195水平采用流式細胞儀分析，TSH,FT3,FT4及TPO-Ab水平檢測采用電化學發光法。

1.3.2 血樣采集：所有研究對象禁食12h后被抽取靜脈血10ml，分成兩管各5ml。將一管血液樣本以3 000 r/min 離心分離血清，-20℃保存備用,用于檢測MCP-1,TSH,FT3,FT4和TPO-Ab水平，另一管血樣用于檢測CD195陽性細胞百分比。

1.3.3 外周血液CD195水平檢測：將研究對象的靜脈血按照1∶1的比例用磷酸鹽緩沖液進行稀釋，取圓底離心管加入等體積的淋巴細胞分離液，離心分離淋巴細胞.將細胞懸浮液以3 000 r/min離心5min，潤洗，并加入異硫氰酸熒光素標記的鼠抗人CD195抗體，避光孵育，采用相同方法制作不加入抗體的陰性對照待測液。采用流式細胞儀分析CD195陽性細胞百分比。

1.3.4 甲狀腺超聲檢查：所有研究對象檢查時保持仰臥位，頭部抬高將頸前部充分暴露，采用二維超聲模式觀察甲狀腺大小、形態及回聲等，測量甲狀腺雙葉前后徑及峽部厚徑；然后采用彩色多普勒超聲模式觀察甲狀腺血流情況。顯露右側頸外動脈后，沿頸外動脈追蹤其第一分支(甲狀腺上動脈)，待頻譜圖像穩定后，叮囑患者屏住呼吸，取甲狀腺上動脈連續三個以上心動周期的譜圖圖像， 測量其收縮期峰值流速(peak systolic velocity,PSV)、 舒張末期流速及血流阻力指數等指標。本研究選擇峽部厚徑和PSV指標進行分析.

2 結果

2.1 HT患者甲狀腺超聲分析 見表1。82例HT 患者甲狀腺表現為不同程度的彌散性腫大, 53 例患者出現峽部增厚,雙側甲狀腺實質回聲不均勻增粗、偏高，其中70例患者甲狀腺內部可見網格狀回聲或條索狀強回聲。甲減組和正常組的峽部厚徑及PSV均高于對照組,其中甲減組的峽部厚徑和PSV增高更顯著，差異有統計學意義(P<0.01)。

2.2 HT患者甲狀腺功能分析 見表1。甲減組的血清FT3和FT4水平均顯著低于對照組和正常組,而甲減組的TPO-Ab和TSH水平則顯著高于對照組和正常組，差異均有統計學意義(P<0.01)。正常組的TPO-Ab水平高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.01)。正常組TSH,FT3和FT4水平與對照組比較差異均無統計學意義(P>0.05)。

2.3 HT患者外周血液MCP-1和CD195水平分析 見表1。甲減組和正常組的MCP-1水平和CD195陽性細胞百分比均高于對照組,其中甲減組的MCP-1水平和CD195陽性細胞百分比增高更顯著，差異均有統計學意義(P<0.01)。

2.4 相關性分析 在甲減組和正常組中，MCP-1水平和CD195陽性細胞百分比分別呈正相關性(r=0.835,0.819,均P<0.01)。在甲減組中,MCP-1水平和CD195陽性細胞百分比分別與TSH,TPO-Ab,PSV及峽部厚徑呈正相關性，而與FT3和FT4水平呈負相關性(rMCP-1=0.827,0.798,0.809,0.772,-0.789,-0.821,均P<0.01;rCD195=0.813,0.803,0.791,0.783,-0.807,-0.843,均P<0.01)。在正常組中,MCP-1水平和CD195陽性細胞百分比分別與TPO-Ab水平,PSV及峽部厚徑呈正相關性(rMCP-1=0.772,0.813,0.805,均P<0.01;rCD195=0.763,0.799,0.817,均P<0.01)。

表1 HT患者甲狀腺功能和超聲及外周血液MCP-1和CD195水平分析

3 討論

HT是最常見的甲狀腺自身免疫性疾病，也是引起甲狀腺功能減退的主要原因[5]。研究表明,碘是合成甲狀腺激素的重要化學物質，低碘或高碘營養都會增加甲狀腺疾病的風險，過量的碘會增加自身免疫性甲狀腺炎的發生率[4]。 研究證實MCP-1是趨化因子家族的成員之一,其主要由單核細胞和巨噬細胞分泌[6]。CHEN等[7]研究認為內質網氧化應激可誘導MCP-1等因子的過度表達,該過程可能與甲狀腺疾病的發生有關。他們發現MCP-1在非正常濃度碘處理的甲狀腺細胞中呈現較高的表達,而在異常碘處理的甲狀腺細胞中加入內質網應激阻滯劑后,MCP-1的表達則明顯降低。現已證實碘的營養狀況通過影響機體的氧化應激及甲狀腺激素水平等參與HT的致病過程[3]。劉銳等[8]的研究顯示HT患者血清MCP-1 的表達顯著升高。然而，碘，MCP-1和內質網氧化應激在甲狀腺疾病發病過程中的相關性尚不完全清楚[3]，本研究分析82例HT患者的結果顯示甲減組MCP-1 水平顯著增高,相關性分析顯示甲減組MCP-1水平與 TSH,FT3,FT4和TPOAb水平及PSV,甲狀腺峽部厚徑呈顯著相關性，提示MCP-1升高可能造成甲狀腺的自身免疫性損傷進而促進HT的進展,進一步地研究顯示HT正常組TSH,FT3,FT4水平與對照組比較無差異,而正常組的MCP-1水平則高于對照組,且與TPOAb,PSV及甲狀腺峽部厚徑有顯著相關性,提示MCP-1水平的變化可以較早地評價HT的發生和發展。

CD195是CD4+T淋巴細胞特異性表面因子。研究證實 CD195與甲狀腺的免疫紊亂有關[2]。李存杰等[9]的研究顯示CD195可調節 HT 患者細胞免疫的活性,其過度表達可導致細胞免疫過度活躍進而破壞甲狀腺細胞,造成甲狀腺功能減退，他們發現HT患者接受治療后CD195陽性細胞百分比及TPO-Ab水平均顯著降低。袁曉嵐等[2]的研究也印證了上述觀點,并且還發現甲減組HT患者治療后CD195水平仍高于健康對照組,且HT甲狀腺功能正常組CD195水平也顯著高于健康對照組，相關性分析顯示 HT 甲減組患者CD195陽性細胞百分比與TSH及TPO-Ab有明顯相關性。本研究的結果也與上述文獻的結論相符。提示CD195的異常表達可能誘導細胞免疫活性的增加,進而導致HT患者的甲狀腺功能減退。但有關CD195在 HT 甲狀腺功能減退中的價值仍需進一步研究。

綜上所述，外周血液MCP-1和CD195水平與HT的發生發展密切相關,其具體機制可通過動物實驗進一步明確。本研究通過檢測外周血液MCP-1和CD195水平,為HT的早期診斷提供了新思路,并為HT的治療提供了更多的依據。