干化學法和濕化學法對24h尿蛋白定量檢測的比較及樣本保存條件研究

孫京花，陳 昊，邸 平，徐 菡，何 賞，馬駿龍，王成彬

(解放軍總醫院臨床檢驗科，北京 100853)

尿蛋白是腎臟疾病診斷的重要指標，增高常見于腎小管重吸收能力降低、腎小球濾過膜通透性亢進以及尿道蛋白代謝異常[1]。目前臨床尿蛋白有定性分析和定量分析，定性分析用于初步篩查，發現蛋白尿需要進一步做定量分析。本檢驗室羅氏Cobas 501和Hipee M1生化分析儀均可對24h尿蛋白進行定量分析，羅氏Cobas 501采用濕化學技術，自動化程度高，Hipee M1基于干化學技術，攜帶方便、操作簡單。為評估兩臺尿檢儀檢測參數的一致性，減小不同儀器使用對臨床結果判讀產生的影響，本研究對羅氏Cobas 501和天津果實科技Hipee M1各項參數進行了比較，從而了解不同儀器檢測結果的相關性和檢測結果的一致性[2]。同時24h尿蛋白檢測過程中，樣本的采集和保存對檢測結果影響較大。尿液樣本留取過程中，為防止細菌滋生對測試結果的影響，通常會使用冷藏或添加防腐劑的方式。本研究比較樣本不同的保存方式對24h尿蛋白定量檢測的影響，探討尿液樣本保存的最佳方法。

1 材料與方法

1.1 實驗樣本 收集中國人民解放軍總醫院(301醫院)住院和門診患者新鮮尿液標本119例，尿液樣本留取標準參考《臨床檢驗操作規程》第4版，樣本采集后2h內完成檢測[3]。

1.2 試劑與儀器 羅氏Cobas 6000模塊化生化免疫分析系統(Cobas 501模塊),九強生物腦脊液/尿液總蛋白測定試劑盒(焦酚紅法，18-0314)及配套校準品和質控品,天津果實科技有限公司Hipee M1及配套試紙(焦酚紅法，批號180509)。

1.3 方法 羅氏Cobas 501生化分析儀以及Hipee M1生化分析儀檢測24h尿蛋白，試劑參數按照相應的尿總蛋白測定試劑盒說明書進行檢測。

檢測前分別對羅氏Cobas 6000和Hipee M1兩臺生化分析儀進行清洗，并進行高、低兩個水平室內質量控制，確定在控后，按實驗室標準操作規程進行平行檢測。所收集的119例尿液充分混勻后，分別在兩臺生化分析儀上平行測定，2h內完成檢測。

1.4 統計學分析 采用SPSS 17.0統計軟件，檢測結果進行t檢驗、相關性、變異分析。

2 結果

2.1 兩種生化分析儀的穩定性評價 見表1。連續30天用配套的定值質控品在Cobas 501和Hipee M1兩臺生化分析儀上進行尿液總蛋白定量檢測，兩臺儀器檢測結果的變異系數經統計學分析，兩種型號的尿蛋白檢測日間精密度均符合儀器的要求。

2.2 兩種生化分析儀檢測結果一致性評價 使用119例尿液樣本同時在Cobas 501和Hipee M1上進行檢測，以Cobas 501測定結果作為參考方法的測定值X，Hipee M1測定結果作為比對方法的測定值Y進行回歸分析，計算線性回歸方程為：Y=0.997 6X- 0.040 2，r=0.991(r2= 0.982)。回歸方程及相關系數見圖1。同時對兩臺儀器的檢測結果進行統計學分析，兩臺儀器檢測結果經配對t檢驗，差異無統計學意義(F值為0.126，Fcrit值3.88，F值0.05)。

表1 Cobas 501和Hipee M1日間質控分析

圖1 九強生物腦脊液/尿液總蛋白測定試劑盒和Hipee M1檢測尿蛋白結果相關性分析

2.3 尿液樣本保存方法對尿蛋白定量檢測結果的影響 見表2。將收集到的尿液混合樣本共計12L，通過Cobas 501定量檢測，濃度為0.76g/L。將樣本分成6等份，一份置于2～8℃冷藏保存，一份置于常溫保存，其它四份分別加入防腐劑甲醛、二甲苯、苯甲酸鈉及硼酸，置于常溫保存。檢測時，從每份樣本中選取樣本重復檢測5次。

2～8℃冷藏保存無防腐劑與使用防腐劑二甲苯和硼酸在常溫保存24h尿蛋白含量在不同時間點的檢測結果，差異均無統計學意義(P>0.05)。常溫未加入防腐劑的樣本、加入防腐劑甲醛和苯甲酸鈉的樣本不同時間點檢測結果比較，差異均具有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

慢性腎臟病在全球具有較高的發病率，美國、挪威等國家患病率高達10.2%～13.0%[4]，我國慢性腎臟病患者已達1.2億[5]。慢性腎臟病進入終末端腎病階段，需要通過透析或腎移植治療維持生命，同時慢性腎臟病與心血管、高血壓等慢性疾病存在復雜的交互作用[6]。尿蛋白尤其是24h尿蛋白定量分析可反映患者每天尿蛋白的排泄量，有助于診斷腎臟病變、評估治療及預后效果。

表2樣本保存方法對尿蛋白定量檢測結果影響分析

本實驗對Cobas 501和Hipee M1生化分析儀的24h尿蛋白定量檢測進行比對分析，從而確定兩臺儀器的誤差在臨床可接受范圍內，保證了檢驗報告的一致性。兩臺生化分析儀檢測結果具有很好的重復性和一致性。兩臺檢測儀所用的尿蛋白檢測配套試劑均為焦酚紅法，因此精密度、靈敏度、特異度等具有較高的一致性。

尿蛋白的理化性質具有不穩定性，在24h尿蛋白定量分析中，需要選擇適合的保存方法。患者尿液在2～8℃保存操作困難，而室溫下使用硼酸作為防腐劑對檢測結果沒有影響，同時硼酸比較容易獲得，因此可以使用硼酸作為防腐劑。

綜上所述，24h尿蛋白定量分析是腎臟疾病的有效評估手段，Cobas 501和Hipee M1比對結果顯示多數檢測結果兩臺儀器之間無明顯差異，并且均具有較高的穩定性，能夠滿足腎臟疾病的臨床診斷、療效和預后觀察的需要。24h尿液樣本保存對檢測結果影響較大，需要選擇適合的防腐劑進行樣本保存。同時Hipee M1便攜式生化分析儀具有操作簡單、快速和不受場所限制等優點，可廣泛用于臨床和社區流行病學研究。