卵巢漿液性癌組織中起始因子EIF5A2和基質金屬蛋白酶-21的表達及臨床意義*

王 莉

錦州醫科大學附屬第一醫院婦科(錦州 121000)

卵巢漿液性癌好發于中老年人，近年觀點認為其起源于輸卵管的腺上皮細胞，病變形成后進展快，易于播散，尤其是高級別的病變[1]。真核翻譯起始因子家族是近年關注的與腫瘤增殖和轉移相關的因子，在腫瘤進展中有重要作用。真核翻譯起始因子5A2(Eukaryotic translation initiation factor 5A2,EIF5A2)是家族中的重要成員，能有效激活聚尿苷mRNA，與腺上皮細胞的惡性轉化有關[2]。近年研究顯示EIF5A2對調節基質金屬蛋白酶(Matrix met alloproteinases,MMPs)的表達有一定作用。基質金屬蛋白酶-21(Matrix metalloprotein-21,MMP-21)是家族中新發現的成員，對細胞外基質的降解作用較強，可引起腫瘤細胞周圍的間質重塑，使可溶性細胞因子分泌增多，加速腫瘤細胞的遷移。也有研究認為MMP-21在細胞外基質的活化和癌性間質的形成中有重要作用[3]。本研究檢測EIF5A2和MMP-21在卵巢漿液性癌中的表達，分析其臨床意義，關注其與增殖細胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的相關性。

資料和方法

1 一般資料 選擇2013年 1月至2014年11月在我院確診并行手術治療的卵巢漿液性癌患者作為觀察組，病例納入標準：①符合WHO中的病理診斷標準，由病理醫師再次復核；②原發腫瘤。排除標準：①診斷有異議者；②術前行放、化療者。共觀察79例，年齡36～87歲，平均(61.2±11.7)歲。選擇同期在我院確診為卵巢漿液性囊腺瘤并行手術治療的患者作為對照組，共79例，年齡32～80歲，平均(59.2±10.3)歲。均留取術后新鮮標本(-80℃冰箱凍存)和石蠟包埋標本。兩組在常規資料的比較中差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

2 研究方法

2．1 EIF5A2和MMP-21的檢測：應用免疫組化SP法檢測兩組中EIF5A2和MMP-21的表達。檢測基于石蠟包埋組織。EIF5A2和MMP-21均為濃縮液，購自武漢博士德生物技術公司。先行預實驗，選取效果最理想的濃度(EIF5A2為1∶300、MMP-21為1∶100)進行正式實驗，嚴格按實驗步驟進行操作，行DAB顯色，做好質控工作。EIF5A2和MMP-21的陽性部位均為細胞質，以棕黃色為陽性。以無、弱、中、強著色分別計為0、1、2、3分。選擇5個高倍視野(400倍)計算陽性率，以<5%、5%～10%、11%～30%、31%～50%、≥50%為別計為0、1、2、3、4分。二者評分相乘為總分，總分范圍為0～12分，以≤4分陰性，>4分陽性，計算陽性率。

2．2 PCNA的檢測：應用Western Blot法檢測觀察組術后組織中PCNA的表達。檢測基于新鮮凍存組織，內參應用GAPDH。首先提取總蛋白，應用濕轉膜的方法轉到PVDF膜，應用牛奶進行封閉，加入一抗，4℃過夜后加入二抗，并孵育2 h，應用化學發光劑進行顯影，拍照。采用Image J軟件進行分析，以蛋白與GAPDH的比值進行半定量分析。

3 統計學方法 應用SPSS18.0統計學軟件，率的比較應用卡方檢驗，并應用Spearman相關分析、K-M生存分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 兩組中EIF5A2和MMP-21表達的比較 兩組中EIF5A2和MMP-21的陽性率比較，差異有統計學意義，見表1、圖1。

表1兩組中EIF5A2和MMP-21陽性率比較[例(%)]

A：EIF5A2在卵巢漿液性囊腺瘤陰性表達；B：MMP-21在卵巢漿液性囊腺瘤中陰性表達；C：EIF5A2在卵巢漿液性癌中陽性表達；D：MMP-21在卵巢漿液性癌中陽性表達

圖1 EIF5A2和MMP-21的表達(IHC ×200)

2 觀察組不同臨床病理特征中EIF5A2和MMP-21陽性率的比較 觀察組中EIF5A2和MMP-21的陽性率在不同脈管累犯、淋巴結轉移及腫瘤最大徑的分組中差異有統計學意義(P<0.05)，而在不同年齡、病理分級和神經累犯的分組中差異無統計學意義。見表2。

3 觀察組中EIF5A2和MMP-21的相關性 觀察組中EIF5A2和MMP-21的表達行Spearman相關分析，顯示兩者具有正相關性(r=0.49，P=0.041)。

4 觀察組中EIF5A2、MMP-21與PCNA的相關性 應用Western Blot檢測觀察組中PCNA的表達，結果顯示其表達量為0.8～3.6，平均為(2.1±0.5)。Spearman相關分析顯示EIF5A2與PCNA(r=0.54，P=0.022)、MMP-21與PCNA(r=0.56，P=0.013)均呈正相關性。

5 觀察組中EIF5A2和MMP-21表達的生存分析 觀察組患者均行術后5年(60個月)生存時間的隨訪，其中死亡61例，存活15例，失訪3例，死亡患者術后生存時間為6～60個月，中位時間21個月。經K-M生存分析顯示，EIF5A2(χ2=5.31，P=0.021)和MMP-21(χ2=6.32，P=0.009)的表達均與生存時間相關。見圖2。

表2觀察組不同臨床病理特征中EIF5A2和MMP-21陽性率的比較[例(%)]

圖2 EIF5A2和MMP-21表達的生存分析

討 論

卵巢漿液性癌發展快，由于部位的特殊性，發現較為困難，發現時腫瘤體積常較大，生長迅速，腫瘤中可見明顯的出血、壞死[4]。病變表現為明顯的侵襲性，尤其是高級別腫瘤，在首發時可觀察到腹膜、子宮、闌尾及對側卵巢的累犯。遺傳學改變對病變形成和進展有重要作用[5]。EIF5A2是近年發現的與增殖和轉移相關的基因，被TIF51B基因所編碼，在代謝和翻譯調控方面有一定作用。EIF5A2具有高度的保守序列，對腫瘤細胞的生長、增殖、翻譯及mRNA的轉錄有重要的調控作用。陳杰偉等[6]通過觀察EIF5A2在食管癌中的表達，發現EIF5A2在腫瘤組織中的表達增高，認為其參與了腫瘤的形成，并促進腫瘤的侵襲。EIF5A2是促進上皮-間質轉化的重要因子，這種作用使腺上皮細胞失去了上皮的特征，如粘附性和極性，并使腫瘤外圍細胞具有間質的特性，其結構和功能發生改變，表現出較高的侵襲能力和抗凋亡作用[7]。而MMP-21也是與侵襲和轉移相關的蛋白，是機體中重要的基質水解酶，對降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型膠原蛋白、層粘連蛋白的作用最強[8]。

本實驗研究結果顯示卵巢漿液性癌中EIF5A2和MMP-21的表達明顯高于漿液性囊腺瘤，提示EIF5A2和MMP-21對促進腫瘤形成有一定價值，EIF5A2和MMP-21高表達是腫瘤形成的重要分子事件。結果顯示觀察組中EIF5A2和MMP-21的表達在不同脈管累犯、淋巴結轉移及腫瘤最大徑的分組中差別有統計學意義，提示EIF5A2和MMP-21高表達參與腫瘤的生長、侵襲和轉移。EIF5A2和MMP-21高表達時預示腫瘤具有高增殖狀態及較強的生長能力，通過EIF5A2、MMP-21與PCNA的相關性得到證實。EIF5A2對mRNA轉錄、翻譯有重要的促進功能，并能調控核質運輸，對細胞質的翻譯作用突出。EIF5A2是腫瘤細胞合成中蛋白合成的調控因子，能引起細胞增殖和轉移。EIF5A2在發揮功能時也常受很多因素的影響，如缺氧、應激反應等[2]。EIF5A2對卵巢癌細胞上皮和間質轉化的調節作用也是促進病變進展的重要因子。本實驗未發現EIF5A2和MMP-21的表達與神經累犯的關聯性，提示二者對噬神經生長無明顯作用。本研究發現EIF5A2和MMP-21具有正相關性，提示二者具有協同作用，EIF5A2可能是上游基因，對MMP-21的產生起一定調控作用。EIF5A2在腫瘤中分泌增多，引起MMP-21高表達，調節腫瘤細胞發生遷移[9]。此時包括MMP-21在內的MMPs家族中的多個成員表達均升高，降解基底膜等腫瘤轉移的屏障，為腫瘤遷移提供了更直捷的通路[10-12]。EIF5A2在病變進展時使微管蛋白的結構和組裝形式發生變化，使腫瘤細胞穩定性發生改變[13-15]。此種作用機制與EIF5A2激活聚尿苷mRNA的翻譯功能可能有關。二者協同作用的方式及原理尚需要更多研究證實。結果顯示EIF5A2和MMP-21的表達與生存時間有關，提示EIF5A2和MMP-21高表達預示著較差的預后，這為臨床判斷預后提供了可能的客觀指標，但是需要后續研究進行大樣本、多中心、多因素的分析后明確。

綜上所述，EIF5A2和MMP-21高表達且具有正相關性是卵巢漿液性癌重要的分子事件，二者可能對腫瘤的增殖有一定的調節，聯合檢測二者的表達與預后相關。