羥苯磺酸鈣聯合復方樟柳堿治療非增殖性糖尿病性視網膜病變臨床研究*

王 瑾，吳惠琴，陳曉冬，張學輝

西安市第一醫院眼科(西安市眼科醫院，陜西省眼科研究所)(西安710002)

糖尿病性視網膜病變(Diabetic retinopathy，DR)是糖尿病最常見的微血管并發癥之一，也是影響我國工作年齡人群首位的不可逆性致盲性眼病[1]，我國糖尿病患者中DR的患病率高達24.7%～37.5%[2]。非增殖性糖尿病性視網膜病變(Non-proliferative diabetic retinopathy，NPDR)屬于DR的一種類型，此時期尚未形成視網膜新生血管，臨床可見眼底微血管瘤、出血、滲出等體征，目前臨床上的治療手段主要采用藥物、激光光凝以及眼內注藥三種方案。羥苯磺酸鈣(Calcium dobesilate，CaD)能夠抗氧化應激、減輕炎癥，抑制血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)等因子的生成，減少血管滲漏，改善微循環，因此在臨床上已被用作DR保護血管內皮的一線用藥[3]。復方樟柳堿具有調理血管舒縮功能、有效改善眼部微循環，減少視網膜缺血的作用，為臨床治療DR療效確切的一種注射液[4]。由于這兩種治療藥物的作用機制不同，本研究采用口服CaD聯合注射復方樟柳堿治療NPDR，并對其治療效果進行分析，以期為此類患者的臨床治療提供參考。

資料與方法

1 一般資料 選擇2016年6月至2018年6月在我院眼科就診的患者中選取120例作為本次研究對象，按照平行隨機原則分為對照組(60例60眼)、觀察組(60例60眼)。對照組男性患者33例，女性患者27例；最小年齡為40歲，最大年齡為78歲，平均(58.03±10.73)歲；糖尿病病程9個月至10年，平均病程(4.99±2.71)年。觀察組男性患者30例，女性患者30例；最小年齡為42歲，最大年齡為80歲，平均(58.93±11.27)歲；糖尿病病程9個月至11年，平均病程(4.88±2.84)歲。將兩組患者的基本資料進行對比，其性別、年齡以及病程比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。納入標準：參照中華醫學會眼科學會眼底病學組2014年制定的《我國糖尿病視網膜病變臨床診療指南》[2]，將經過熒光素眼底血管造影(熒光素鈉：廣西悟州制藥有限公司，國藥準字H45021477；熒光造影儀：德國海德堡Spectralis HRA)檢查單眼確診為NPDR(病變Ⅰ～Ⅲ期)的患者納入本研究。排除標準：所有入選患者血壓、血糖水平控制穩定。排除精神意識障礙、患有嚴重心肝腎功能障礙、合并青光眼、白內障、葡萄膜炎和視網膜脫離等眼病，以及對本研究藥物過敏者或不能遵照醫囑堅持用藥治療者。

2 治療方法 在藥物及飲食、運動控制血糖的基礎上，對照組患者口服CaD膠囊(國藥準字H20140641)，服用劑量0.5 g/次，3 次/d，連續治療3個月。觀察組在口服CaD的基礎上，加以復方樟柳堿注射液(國藥準字H20000495)顳側皮下穴位注射，即在患眼的顳淺動脈旁皮下注射，每次2 ml，1次/d，2周為1個療程。每療程結束后停止注射3 d，再繼續下個療程的治療，共持續3個月。兩組患者治療3個月后評價藥物療效。

3 觀察指標 患者常規進行視力、眼壓、眼前后節檢查及熒光素眼底血管造影檢查，觀察兩組患者經治療后的效果，記錄視力變化、眼底微動脈瘤個數及出血、滲出面積大小等。分別于治療前、后用EDTA管收集患者空腹靜脈血5 ml，3000 r/min、4℃高速離心10 min，取上清液在-80℃凍結，凍干48 h，儲存備用。采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血管內皮生長因子(VEGF)及內皮素-1(ET-1)的血清水平，試劑盒由武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司提供，嚴格按照說明書進行操作。

4 療效評定標準 比較兩組患者治療后的臨床療效，分為顯效、有效和無效。顯效：視力提高≥3 行，眼底微動脈瘤和滲出、出血、水腫病變消失或明顯改善≥2項；有效：視力提高≥1 行但小于3行，眼底微動脈瘤和出血、滲出病變至少有1項消失或改善；無效：未達到顯效、有效標準，視力和上述眼底病變無改善，甚至比治療前加重[5]。治療總有效率(%)=(顯效例數+有效例數)/總例數×100%。

結 果

1 兩組患者臨床療效對比 治療后，比較觀察組患者的臨床療效明顯優于對照組，比較差異有統計學意義(χ2=6.00，P<0.05)。見表1。

表1兩組患者臨床療效比較[例(%)]

注：與對照組比較，*P<0.05

2 兩組患者治療后視力比較 治療后，對照組與觀察組所采用的治療方案均能在一定程度上改善患者的視力，但觀察組的視力改善更為顯著，比較差異存在統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2兩組患者治療后視力比較[例(%)]

注：與對照組比較，*P<0.05

3 兩組患者治療前、后熒光素眼底血管造影結果比較 治療前，兩組患者熒光素眼底血管造影結果差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，觀察組微血管瘤個數、出血面積、滲出面積較對照組與治療前明顯減少(P<0.05)。見表 3。

4 兩組患者治療前、后血清VEGF、ET-1水平比較 治療前，兩組患者 VEGF、ET-1的水平差異無統計學意義(P>0.05)；治療后，觀察組患者VEGF、ET-1水平較對照組與治療前明顯降低(P<0.05)。見表 4。

表3兩組患者治療前、后熒光素眼底血管造影結果比較

注：與同一組治療前比較，*P<0.05

表4兩組患者治療前、后血清VEGF、ET-1水平比較(pg/ml)

注：與同一組治療前比較，*P<0.05

討 論

DR是糖尿病并發的常見致盲性眼病，我國糖尿病人群居世界第一，隨著人民生活水平的提高，此病的發病率不斷攀升，因此DR的發生率也逐年升高。慢性高血糖引起氧化應激、炎癥，導致視網膜毛細血管血管周細胞凋亡、內皮細胞增殖，血管通透性增加，進而損傷血-視網膜屏障，導致微血管滲漏，VEGF、ET-1等促血管生成因子大量釋放促進新生血管生成，最終導致牽拉性視網膜脫離威脅患者視力[6-9]。在治療效果和視力改善方面，本研究發現對照組與觀察組所采用的治療方案均有一定的療效，且都能在一定程度上改善患者的視力，提示CaD治療3個月對NPDR患者有效，與以下國內外研究結果一致。有國內研究發現，對于NPDR患者，CaD治療8個月眼底恢復的總有效率高達96.3%，顯著優于對照組的70.3%。兩組患者基線視力差異無統計學意義，治療后兩組視力均有所恢復，但CaD治療組的效果更好[10]。歐洲8個中心開展的一項針對DR治療的隨機、雙盲、安慰劑對照試驗結果顯示，CaD治療24個月，該組患者的ETDRS分級均值顯著低于安慰劑組，且DR分級水平有所改善；而安慰劑治療24個月，DR分級水平則惡化，提示CaD可以明顯延緩DR的進展[11]。一項納入221項研究的Meta分析也得出結論，CaD治療可以顯著改善NPDR患者的視力[12]。

在減輕視網膜病變方面，本研究提示，CaD治療3個月，對照組與觀察組所采用的治療方案均能在一定程度上減少微動脈瘤個數、視網膜出血和滲出面積，提示CaD對改善NPDR的眼底病變具有顯著療效，與國內外研究報道相符[10-13]。例如，歐洲多中心研究發現，長期應用CaD可以顯著延緩眼底微動脈瘤生成并減少視網膜出血[11]。其他國內研究也證實，CaD可顯著改善視網膜微動脈瘤和眼底滲出等視網膜病變情況[10,12]。針對CaD改善視網膜病變的作用機制，據報道認為該藥具有穩定血視網膜屏障，改善微循環的作用。治療后CaD組患者的后玻璃體穿透率(PVPR，反映血視網膜屏障通透性的重要指標)明顯低于安慰劑組的平均改變，其中CaD組PVPR較基線降低13.2%，而安慰劑組較基線升高7.3%，提示早期DR患者長期應用該藥物可以顯著降低PVPR，降低血管通透性，穩定視網膜內屏障，延緩DR進展[11]。另外，此研究還同時顯示，對于早期DR患者，無論血糖控制如何，加用CaD均可改善PVPR，即該藥物對PVPR的改善作用獨立于血糖控制[11]。早期使用CaD治療能夠顯著減少眼部微血管瘤，抑制出血及滲出，使患者視力水平獲得改善。

細胞和動物實驗方面的基礎研究進一步揭示了CaD的分子機制。一項細胞研究發現，高糖處理人臍靜脈內皮細胞可引起內皮因子(VEGF，VEGFR-2，內皮細胞特異分子-1 endocan)和炎癥因子(ICAM-1，MCP-1，PTX3)的基因和蛋白水平增加，而CaD能夠抑制高糖引起的這些內皮因子和炎癥因子水平升高。VEGF是具有肝素結合活性的二聚體糖蛋白，能夠降低血管內皮細胞間的緊密連接，增加血管通透性。血液中游離的VEGF可結合到具有生物活性的乙酰肝素片段上，進而與血管內皮細胞上的VEGF受體結合，使VEGF的作用增加，破壞內皮細胞功能。CaD可以阻斷這一過程，從而減輕VEGF的作用，保護內皮功能。進而發現，CaD可抑制高糖引起的內皮細胞遷移、滲透性增加。總之認為CaD具有血管保護作用，并保護內皮細胞，減輕高糖誘發的炎癥反應[14]。動物實驗方面的研究也獲得了類似的結果，給予糖尿病小鼠CaD治療12周，可有效降低DR的毛細血管面積密度，并且使VEGF表達水平下降，有效抑制新生血管生成，延緩DR的發生發展[15]。除VEGF外，糖尿病患者體內的ET-1水平增加，可加重內皮細胞功能障礙和氧化應激[16]。ET具有強大的收縮血管功能，其受體主要存在于視網膜微血管的外膜細胞，糖尿病患者長期的高水平ET可持續收縮視網膜微血管或造成痙攣，使視網膜缺血缺氧，引起微血管病變并逐漸加重[17]。服用CaD 3個月可明顯降低非增殖性或增殖性DR患者的血清ET-1濃度，從而改善這些患者的內皮功能[18]。本研究結果顯示，CaD及CaD聯合復方樟柳堿治療NPDR 3個月后，血清中VEGF和ET-1均較治療前明顯降低，VEGF和ET-1的活性被抑制后可改善血管內皮細胞功能、降低血管通透性，從而減少視網膜新生血管生成，防止疾病向增殖期轉變，與文獻報道結果一致。許多臨床研究觀察了增殖性糖尿病性視網膜病變(PDR)患者玻璃體和血清中與血管生成相關的生長因子水平，包括VEGF，并發現PDR患者玻璃體內VEGF濃度明顯高于無DR的非糖尿病對照者，證實VEGF直接參與了PDR的病理過程[19-21]。不過，有研究發現PDR患者玻璃體中VEGF水平明顯高于其血漿水平，且玻璃體內濃度與血清濃度并無明顯的相關性，認為玻璃體內VEGF水平升高主要是眼內產生所致[20]。而本研究只檢測了患者血清中VEGF和ET-1的濃度，不能代表其眼內的真實水平，因此還需要進一步利用玻璃體液觀察CaD對這些因子的實際影響。

DR眼底病變與血流動力學異常密切相關，通常伴有微循環異常，因此增加眼底血供、改善微循環是治療該類疾病的重要手段。復方樟柳堿是從茄科植物中提取的一種生物堿，通過局部注射可改善組織供血，促進視網膜出血、水腫、滲出的吸收，達到改善視網膜功能的治療作用。復方樟柳堿注射液的主要成分氫溴酸樟柳堿，具有開放受損閉鎖的微動脈與前毛細血管括約肌、穩定血管內活性物質的正常水平、恢復微血管自律運動的功能，從而有效改善眼組織缺血狀態[22-24]。

通過對患者進行穴位注射復方樟柳堿注射液，刺激顳淺植物神經末梢，進而調理患者脈絡膜植物神經活動，調整血管舒縮功能，能有效改善眼部微循環，減少視網膜缺血及視網膜內循環異常，可縮短DR患者病程，促進疾病康復[25]。針對復方樟柳堿的作用機制，有研究表明復方樟柳堿能影響生物膜上的鈣離子活性，對調節高級神經活動有良好的作用；此外還具有保護血管內皮細胞的功能，可有效抑制患者ET的異常升高，從而維持血管正常緊張度及血流量[4,17]。目前，CaD被推薦為治療DR的一線藥物，鑒于復方樟柳堿不同于CaD的作用機制，本研究將二者聯合使用，與CaD單獨使用的臨床療效進行了對比。結果顯示，CaD聯合復方樟柳堿治療NPDR較單獨使用CaD治療能獲得更好地臨床效果、更佳的視力改善，能顯著減輕微血管瘤、出血及滲出等視網膜病變，抑制血管活性因子VEGF、ET-1的釋放和功能。