利用MALDI-TOFMS對血流感染病原菌快速鑒定的準確性評價

余德基 周鳳英 陳思穎

【摘要】 目的 探討利用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜（MALDI-TOF MS）對血流感染病原菌快速鑒定的準確性。方法 選取356例（356份）患者的血液樣本作為研究對象， 分別使用MALDI-TOF MS與 Vitek 2 Compact全自動微生物分析系統（Vitek 2 Compact） 對血流感染病原菌進行檢測， 并以Vitek 2 Compact鑒定結果為金標準， 觀察MALDI-TOF MS的鑒定符合率。結果 在陽性血培養瓶中， 革蘭陰性菌主要包括大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌復合菌、陰溝腸桿菌復合群、沙門菌群， 種水平鑒定符合率為94.64%（212/224）;革蘭陽性菌主要包括表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、屎腸球菌、糞腸球菌、肺炎鏈球菌， 種水平鑒定符合率為94.62%（88/93）。真菌主要包括白色假絲酵母、熱帶假絲酵母、近平滑假絲酵母、清酒假絲酵母、光滑假絲酵母、新型隱球菌、克柔假絲酵母、葡萄牙假絲酵母， 種水平鑒定符合率為80.00%（24/30）， 另檢出馬爾尼菲青霉菌9株， 因不做生化鑒定未列入對比。結論 利用MALDI-TOF MS對血流感染病原菌快速鑒定具有較高準確率， 且檢測簡便、檢測時間短。

【關鍵詞】 基質輔助激光解析電離飛行時間質譜;血流感染病原菌;快速鑒定

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.07.086

相關臨床研究顯示， 近年來隨著廣譜抗生素不合理應用與侵入性操作的不斷增加， 血流感染的發病率及病死率逐年上升， 進而對其造成較為嚴重的損傷[1]， 甚至導致患者死亡等不良后果[2]， 因此為有效的消除病原菌， 提升患者的健康水平， 則需要對血流感染病原菌進行有效的鑒定， 以便能夠采取針對性的措施進行治療[3]。隨著臨床檢測技術的不斷發展， 目前臨床中多使用MALDI-TOF MS對血流感染病原菌快速

鑒定[4]。本研究探討MALDI-TOF MS對血流感染病原菌快速鑒定的準確性。現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 將本院2018年7月～2019年6月收集的356例（356份）患者的血液樣本作為研究對象， 其中男236例， 女132例;平均年齡（58.1±4.9）歲。對所有樣本均進行單菌株感染血培養， 結果顯示， 細菌培養陽性317份（革蘭陰性224份、革蘭陽性93份）， 真菌培養陽性39份。

1. 2 方法

1. 2. 1 試劑與儀器 甲酸、乙腈、Bact/ALERT? 3D 全自動血培養儀、VITEKMS質譜儀、基質液、靶板、VITEK 2 COMPACT及其配套的鑒定板條、血瓊脂平板、中國藍平板、巧克力平板、沙保氏平板、念珠菌顯色平板。

1. 2. 2 檢測

1. 2. 2. 1 涂片染色鏡檢 使用革蘭染色鏡對陽性報警的株菌進行檢測， 以便能夠初步對待測菌的種類進行確定， 并排除假陽性的干擾。

1. 2. 2. 2 菌種常規鑒定 若革蘭染色鏡檢結果為細菌， 則采取接種血瓊脂平板、中國藍平板與巧克力平板;若鏡檢結果為真菌， 則采取接種血瓊脂平板、中國藍平板與念珠菌顯色平板， 并對其進行18～24 h的孵育， 之后使用 VITEK 2 COMPACT予以鑒定， 并記錄鑒定結果。

1. 2. 2. 3 菌種快速鑒定 與上述接種操作一樣， 區別在于只對其進行4 h的孵育， 之后用培養的菌膜制備質譜靶板行質譜鑒定。

1. 2. 2. 4 MALDI-TOF MS的鑒定流程 點樣上清液

1 L至48孔的靶板， 在室溫下進行干燥， 之后添加配套基質液， 同時點樣大腸埃希菌ATCC8739于質控點， 并立即加入配套基質液， 待全部干燥后使用MALDI-TOF MS進行檢測， 若鑒定結果位于60.0%～99.9%說明鑒定結果可靠， 其評分標準如下：綠色表示唯一的鑒定結果， 可信率為60.0%～99.9%;黃色表示低分辨率有2～4個鑒定結果， 可信率>60%， 但仍然需要進行進一步的鑒定;紅色表示無法鑒定， 可信率≤60%。

1. 3 觀察指標及判定標準 分析單菌株血流細菌感染鑒定結果、單菌株血流真菌感染鑒定結果。種水平鑒定符合率=種水平鑒定正確率+種水平鑒定錯誤率。

2 結果

2. 1 單菌株血流細菌感染鑒定結果 在陽性血培養瓶中， 革蘭陰性菌主要包括大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌復合菌、陰溝腸桿菌復合群、沙門菌群， 種水平鑒定符合率為94.64%（212/224）;革蘭陽性菌主要包括表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、屎腸球菌、糞腸球菌、肺炎鏈球菌， 種水平鑒定符合率為94.62%（88/93）。見表1。

2. 2 單菌株血流真菌感染鑒定結果 真菌主要包括白色假絲酵母、熱帶假絲酵母、近平滑假絲酵母、清酒假絲酵母、光滑假絲酵母、新型隱球菌、克柔假絲酵母、葡萄牙假絲酵母， 種水平鑒定符合率為80.00%（24/30）， 另檢出馬爾尼菲青霉菌9株， 因不做生化鑒定未列入對比。見表2。

3 討論

血流感染將會對機體健康造成嚴重的不良影響， 只有明確感染病原菌的類型才可予以及時有效的針對性治療[5， 6]。

隨著檢測技術的不斷發展提升， 目前臨床中多使用MALDI-TOF MS進行檢測， 該檢測技術的主要原理在于通過對比已知菌種建立數據庫， 將檢測獲得微生物的蛋白質圖譜與數據庫中的微生物圖譜進行比較， 以便能夠獲得良好的鑒定結果[7]。通過臨床實踐可知， 該種檢測方式具有如下優勢：①具有簡便的操作方式， 并且無需花費過多的檢測費用;②具有較為快速的檢測能力， 因而無需等待較長時間。

本研究結果顯示， 通過使用短期培養法聯合質譜的檢測結果顯示， 在陽性血培養瓶中， 革蘭陰性菌主要包括大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌復合菌、陰溝腸桿菌復合群、沙門菌群， 種水平鑒定符合率為94.64%（212/224）;革蘭陽性菌主要包括表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、屎腸球菌、糞腸球菌、肺炎鏈球菌， 種水平鑒定符合率為94.62%（88/93）。真菌主要包括白色假絲酵母、熱帶假絲酵母、近平滑假絲酵母、清酒假絲酵母、光滑假絲酵母、新型隱球菌、克柔假絲酵母、葡萄牙假絲酵母， 種水平鑒定符合率為80.00%（24/30）。與Vitek 2 Compact常規培養標本檢測結果相比具有較高的準確率， 因而能夠在較大程度上滿足臨床檢測需求。

綜上所述， MALDI-TOF MS對血流感染病原菌快速鑒定具有較高準確率， 并且具有檢測簡便、時間短等優勢， 可作為臨床中首選的檢測方式。但臨床檢測人員仍然需要加強對該種檢測方式的研究， 以便能夠獲得更加準確的檢測結果， 從而為患者提供更好的服務。

參考文獻

[1] 張航烽， 黃文芳. 利用MALDI-TOFMS對血流感染病原菌快速鑒定的研究進展. 中國微生態學雜志， 2013， 25（2）：242-246.

[2] 方毅， 張景皓， 趙虎. MALDI-TOFMS直接鑒定血培養陽性標本中的病原菌. 老年醫學與保健， 2017， 23（6）：523-527.

[3] 周道紅， 黎敏， 魯衛平. 利用MALDI-TOFMS快速鑒定經固體培養基短時培養的陽性血培養物中的病原菌. 國際檢驗醫學雜志， 2018， 39（22）：2746-2749.

[4] 盛微翔， 吳亮， 史偉峰， 等. 分離膠促凝管聯合MALDI-TOFMS快速檢測血培養陽性瓶中細菌的探討. 現代診斷與治療， 2017， 28（22）：4117-4119.

[5] 陳峰， 李媛睿， 皇甫昱嬋， 等. 分離膠促凝管聯合MALDI-TOFMS直接檢測血培養陽性細菌. 檢驗醫學， 2015， 30（2）：113-121.

[6] 張蓓， 趙麗娜， 韓清珍， 等. 皂素處理聯合MALDI-TOFMS直接鑒定血培養陽性病原菌. 檢驗醫學與臨床， 2018， 15（17）：

2525-2528.

[7] 周志美， 張磊， 吳尚為. 對血流感染實驗室診斷的最新認識. 中華醫院感染學雜志， 2013， 23（7）：1735-1737.

[收稿日期：2019-07-25]