改良的抗酸染色法聯(lián)合細胞沉淀儀法在結(jié)核桿菌檢測中的價值

王雨婷

(西平縣人民醫(yī)院 檢驗科，河南 駐馬店 463900)

近年來結(jié)核性疾病的發(fā)病率及死亡率逐年上升，選取一種簡單且有效的檢查方法以提升結(jié)核性疾病早期診斷準確率顯得尤為重要[1]。目前臨床上結(jié)核性疾病診斷方法較多，但仍以培養(yǎng)、涂片方法為主，其中培養(yǎng)結(jié)果為結(jié)核性疾病的診斷金標(biāo)準，但無菌體液培養(yǎng)所需標(biāo)本量大、耗時較長，臨床應(yīng)用存在一定的局限性[2]。涂片染色檢查已成為無菌體液檢查常用手段，但傳統(tǒng)制片、染色方法檢出率較低，極易造成誤診、漏診[3]。本研究旨在觀察改良的抗酸染色法、細胞沉淀儀法聯(lián)合檢查在結(jié)核桿菌檢測中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2018年1—12月西平縣人民醫(yī)院接診的疑為結(jié)核性疾病患者75例，其中男45例，女30例；年齡38～76歲，平均(53.74±6.37)歲；抽取無菌體液，收集關(guān)節(jié)滑液8例、腹水12例、胸水25例、腦脊液30例。本研究經(jīng)西平縣人民醫(yī)院倫理委員會審核通過，患者均自愿參與本研究并簽署知情同意書。

1.2 入選標(biāo)準納入標(biāo)準：(1)所有患者均出現(xiàn)咳嗽、咳痰、痰內(nèi)帶血絲或小血塊等臨床癥狀；(2)經(jīng)實驗室檢查、體格檢查等確診者。排除標(biāo)準：(1)嚴重急性感染者；(2)嚴重肝腎功能或呼吸功能不全者；(3)表達障礙或精神疾病者。

1.3 操作方法將收集的無菌體液采用傳統(tǒng)制片、染色法及改良抗酸染色法、細胞沉淀儀法聯(lián)合檢查，其中傳統(tǒng)制片、染色法檢查步驟如下：離心標(biāo)本，向潔凈玻片上涂抹沉渣，涂完1層后實施自然干燥，隨后再次涂抹處理，以形成較厚涂片，染色采用萋尼抗酸染色法，初染采用石碳酸復(fù)紅加溫，將結(jié)核桿菌染色，隨后通過鹽酸酒精將其他成分脫色，并通過美蘭復(fù)染，分枝桿菌為紅色，背景中物質(zhì)、其他細菌為藍色，涂片干燥后實施鏡檢。改良抗酸染色法、細胞沉淀儀法聯(lián)合檢查具體操作步驟如下：通過細胞沉淀儀，將無菌體液(3 mL左右)中結(jié)核桿菌收集至無菌玻片上，制片完成，染色利用改良染色法，固定標(biāo)本，將3 g·L-1Triton X-100加入染液中，利于溶解脂質(zhì)，提升染料、結(jié)合桿菌結(jié)合率，向3 g·L-1Triton X-100液中置入待檢玻片，浸泡0.5 h，通過0.01 M磷酸鹽緩沖液洗滌，每次3～5 min，共洗滌3次，自然干燥玻片并置于染色架，將石碳酸復(fù)紅溶液滴加完畢以將玻片蓋滿，染色15 min，隨后用蒸餾水沖洗(自玻片一端)，將染色液沖去，將3 g·L-1鹽酸酒精溶液滴加完成以將玻片蓋滿，脫色每次2～3 min，共2次，通過蒸餾水沖洗(自玻片一端)，將鹽酸酒精溶液沖去，將標(biāo)本上剩余水瀝去，亞甲基藍溶液滴加染色5 min，蒸餾水沖洗，干燥涂片后實施鏡檢。

1.4 評價指標(biāo)以培養(yǎng)結(jié)果作為金標(biāo)準，評估傳統(tǒng)制片、染色法及改良抗酸染色法、細胞沉淀儀法聯(lián)合檢查方法診斷的敏感度、特異度、準確率。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理分析。診斷的敏感度、特異度、準確率比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 培養(yǎng)結(jié)果本次研究中納入的75例標(biāo)本中，培養(yǎng)結(jié)果陽性48例、陰性27例。見表1。

表1 傳統(tǒng)制片、染色法及改良抗酸染色法、細胞沉淀儀法 聯(lián)合檢查結(jié)果對比(n)

2.2 傳統(tǒng)制片、染色法及改良抗酸染色法、細胞沉淀儀法聯(lián)合檢查結(jié)果以培養(yǎng)結(jié)果作為金標(biāo)準，與傳統(tǒng)制片、染色法相比，改良抗酸染色法、細胞沉淀儀法聯(lián)合檢查診斷敏感度、準確率較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。見表2。

表2 兩種檢查方式診斷情況比較(%)

3 討論

結(jié)核病作為一種慢性傳染病，多由結(jié)核桿菌感染所致，其中多數(shù)患者呈現(xiàn)慢性發(fā)展，結(jié)核桿菌侵入機體各個器官，極易造成結(jié)核性滑膜炎、結(jié)核性腹膜炎、結(jié)核性胸膜炎及結(jié)核性腦膜炎等，影響患者的身心健康[4]。

結(jié)核性疾病的診斷以涂片為主，其中針對胸水、腦脊液、滑膜及腹水等無菌體液，采取傳統(tǒng)制片方法多為離心沉淀，并留取沉渣，以實施涂片處理[5]。但經(jīng)臨床實踐發(fā)現(xiàn)，多數(shù)無菌體液具有較低的含菌量，故采取離心沉淀往往無法獲得沉渣，極大限制了收集的菌量，而為了提高染色效果，多將制作較厚涂片，以增加玻片上菌量，但由于涂片較厚，在染色期間，極易導(dǎo)致標(biāo)本脫落，故而沉渣獲得有限及染色中標(biāo)本脫落均可降低陽性率，并影響最終診斷結(jié)果[6]。近年來，細胞沉淀儀被用于收集結(jié)核桿菌中，利于將無菌體液中的全部結(jié)核桿菌留取至玻片上，并可將多余液體去除，可實現(xiàn)在玻片上收集較多結(jié)核桿菌外，利于避免涂片過厚的弊端，進而可促使結(jié)核桿菌留取量增加，解決了傳統(tǒng)制片法中的不足現(xiàn)象。結(jié)核桿菌細胞壁含有較多的脂質(zhì)，采用傳統(tǒng)抗酸染色法染色往往沖破難度較大，極易降低染色陽性率，采用改良抗酸染色法中固定了標(biāo)本，利于降低標(biāo)本脫落率，同時將3 g·L-1Triton X-100加入染液中，將脂質(zhì)溶解，進而將促使染料、結(jié)核桿菌結(jié)合，提升染色陽性率[7]。本次研究結(jié)果顯示，納入的75例標(biāo)本中，培養(yǎng)結(jié)果陽性48例、陰性27例；以培養(yǎng)結(jié)果作為金標(biāo)準，與傳統(tǒng)制片、染色法相比，改良抗酸染色法、細胞沉淀儀法聯(lián)合檢查診斷敏感度、準確率較高，可為結(jié)核性疾病的診治提供信息。

綜上所述，改良抗酸染色法聯(lián)合細胞沉淀儀法診斷結(jié)核桿菌準確率、敏感度較高，利于提升結(jié)核桿菌檢出率，為結(jié)核性疾病診斷提供依據(jù)。