實驗室鏡檢，協力診斷隱球菌性腦膜炎

劉朝志

最近兩個月，常州市民陳女士反復頭痛、頭暈，自以為是“貧血”，服用大量“補血藥”后病情不但不見好轉，甚至出現嘔吐和視物模糊的癥狀。于是，陳女士來到醫院就診，接受一系列檢查后，醫生在其腦脊液中找到了新型隱球菌，診斷其患有“隱球菌性腦膜炎”。

新型隱球菌分布廣泛，是土壤、鴿類、牛乳、水果等的腐生菌，其中鴿糞中大量存在。有數據顯示，在我國52%～76%的鴿糞中能分離到新生隱球菌。而隱球菌腦膜炎是由新型隱球菌引起的中樞神經系統感染，其早期癥狀及體征不典型，容易發生誤診，常表現為頭痛、低熱等癥狀并逐漸加重，數周內出現顱高壓癥狀，包括惡心和/或嘔吐、抽搐、視物模糊，甚至昏迷或出現頸強直、Kernig征陽性等腦膜刺激征。因此，及早發現隱球菌性腦膜炎尤為重要，其主要手段就是實驗室鏡檢。

隱球菌性腦膜炎的實驗室檢查，首先就是對病原菌的直接鏡檢，如果能在標本中找到新生隱球菌的存在，對于診斷的結果就有著決定性的作用。操作方法為：取少許的腦脊液標本放在玻璃片上，加上一滴墨汁之后進行混勻，加蓋上玻璃片后就可以直接進行鏡檢。新生隱球菌在鏡下表現為圓形或者是橢圓形的雙層厚壁孢子，并且外邊有一層寬闊的莢膜，并具有清晰完整的邊緣，菌體內有單個出芽。如果新生隱球菌有變種現象，菌體就會呈現出針形、棒形、瓢形、棒形以及圓球形的出芽現象。在上述操作中，腦脊液與墨汁的比例非常有講究，而這個比例又和墨汁的濃度有著一定關聯，通常控制在1：0.5～0.8之間。墨汁過多會遮擋菌體而影響觀察，而墨汁過少的話染色又不會成功，最終會導致漏檢。

在標本中發現菌體之后，還應該對菌體進行計數，計數的目的是為日后的治療提供依據，也是判斷病情預后的重要指標。具體操作為：將腦脊液標本搖勻，然后用吸管吸取一定量放在小試管中，加入染液后搖勻，放在低倍顯微鏡下觀察，以血細胞計數板計數。

如果在首次腦脊液制片標本中沒有發現菌體，也不能貿然下結論判斷不存在新型隱球菌感染，而應該在經過離心沉淀之后重復檢查。離心沉淀過程一定要注意時間，通常是3000轉/分，離心15分鐘。因為如果菌量少，離心時間過短，就有可能造成漏檢。在離心之后，有些技術人員會直接用無菌吸管吸取沉淀物，這樣操作會因為吸取上來的沉淀物被上清液稀釋而造成漏檢。所以，最好先倒掉上清液，再吸取沉淀物。

此外，隱球菌性腦膜炎檢查項目中還包括著腦脊液常規檢查、抗原檢查以及抗體檢查等。腦脊液常規中，中樞神經系統隱球菌腦脊液壓力會增高，從外觀上來看，會有著乳白、淡黃以及紅色等多種顏色出現，并且白細胞數會明顯增高，蛋白的含量在病情中后期有著明顯增高。在抗體檢測中，常用凝集反應、補體結合試驗、間接熒光試驗以及間接血凝試驗等方法，其檢查結果有利于對病情變化進行判斷，如果抗體滴度升高則表明病情有著明顯的好轉。

患有糖尿病、系統性紅斑狼瘡、惡性腫瘤、血液系統疾病等基礎疾病及其他有免疫缺陷者如艾滋病患者，在感染新型隱球菌后更容易發生隱球菌性腦膜炎。所以，當這部分患者出現上呼吸道感染，如畏寒、發熱、乏力、輕度咳嗽、咳痰，以及頭昏、頭痛等癥狀后，如果應用一般抗生素治療無效，且病情逐漸加重，要警惕是隱球菌性腦膜炎，一定要積極接受相關檢查。