不同益生菌對柳州麻雞體增重、腸道酶活和免疫指標的影響

2020-04-22 06:25:58劉歡歡劉珍珠晁群芳

西南農業學報 2020年1期

劉歡歡,劉珍珠,婁愷,晁群芳*,曾軍*

(1.新疆大學生命科學與技術學院，新疆烏魯木齊 830046；2.新疆農業科學院微生物應用研究所新疆特殊環境微生物重點實驗室，新疆烏魯木齊 830091)

【研究意義】近年來，人們對食品的質量與安全問題越來越關注，在肉類消費選擇中，無抗生素喂養的健康動物更受青睞。因此，禽類養殖行業一直在積極的尋找與研究各種可替代抗生素的綠色健康添加劑，而益生菌是研究最為廣泛的替抗添加劑之一。益生菌是常常定殖于動物腸道中的微生物，它們可分泌有益的代謝產物，如消化酶可提高動物營養吸收或抑菌物質可形成良性腸道微生態環境，還有的益生菌作為抗原可增強動物機體的免疫功能[1]。許多研究表明不同種群的微生物有不同的益生功能，常見的益生菌如乳酸菌可產酸分泌抑菌物質[2]，丁酸梭菌不僅可產酸還可以分泌消化酶[3]，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌可分泌蛋白酶淀粉酶等[4]，雙歧桿菌可提供營養物質等[5]，同時應用于動物試驗中效果顯著。【前人研究進展】黃燕等[6]在蛋雞的基礎飼糧中添加不同比例的復合益生菌，結果表明復合益生菌可以顯著改善蛋雞的產蛋性能和蛋品質；但Maryam A 等[7]在肉雞飼料中添加單種益生菌和復合益生菌卻發現，所添加的益生菌改變了肉雞腸道菌群卻沒有提高肉雞的生長性能和蛋品質等。【本研究切入點】然而，多種不同的益生菌在動物試驗中效果如何，卻未見報道。【擬解決的關鍵問題】因此，本實驗將常見益生菌乳酸菌，丁酸梭菌，枯草芽孢桿菌，地衣芽孢桿菌，雙歧桿菌，以及兩種方式復配的復合益生菌添加在5日齡柳州麻雞飲水中，比較幾種益生菌對動物的生長性能，腸道酶活和血清免疫指標的影響，探索益生功能效果最好的益生菌添加劑，為益生菌的研發與應用提供數據基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 益生菌雞源性益生菌丁酸梭菌DSSJ(活菌數≥1×107CFU/mL)、乳酸菌KJT(活菌數≥1×107CFU/mL)、地衣芽孢桿菌Db(活菌數≥1×107CFU/mL)，枯草芽孢桿菌Kb(活菌數≥1×107CFU/mL)和雙歧桿菌DD(活菌數≥1×107CFU/mL)，由新疆農科院微生物應用研究所擴增培養。

1.1.2 實驗動物 5日齡柳州麻雞2000只，由新疆南山某養殖場提供。

1.2 方法

1.2.1 實驗分組處理設計實驗分組方法見表1，2000只柳州麻雞，分為8組，對照組，KJT組，DSSJ組，Db組，Kb組，DD組，復合1組和復合2組。

1.2.2 飼養管理方法試驗雞采用網上平養，自由飲水自由采食，按照程序對試驗雞進行嚴格免疫。前期(1～28日齡)基礎日糧為肉小雞粒狀配合飼料，購于新疆天康飼料有限公司；后期(30日齡之后)為玉米豆粕型基礎日糧；日糧配方和營養水平見表2。

1.2.3 樣品采集和指標檢測 (1) 采樣：每組隨機抓取20只以上的試驗雞于試驗第 1，6，10，23，30天早上08: 00 空腹稱量，計算體增重(Body weight gain，BWG)和日增重(Daily gain，DG)；試雞在取樣前禁食 12 h，于試驗第34天從各組隨機選取體重適中的柳州麻雞 10 只，采血 2 mL，于 3000 r/min 離心 10 min，分離血清于 1.5 mL 離心管中，-20 ℃ 冷凍保存，用于血清免疫指標測定[8]；頸靜脈放血處死后解剖，分別截取每只雞的十二指腸，空腸，回腸和盲腸段，用于測定腸道的淀粉酶，蛋白酶和脂肪酶活性[9]。

(2)腸道酶活測定：取十二指腸，空腸，回腸和盲腸腸段分別于低溫下稱取0.1 g腸道內容物，按照淀粉酶(AMS)試劑盒，脂肪酶試劑盒和糜蛋白酶試劑盒說明書，測定每只雞各個腸段的淀粉酶，脂肪酶和蛋白酶酶活；試劑盒購自于南京建成生物工程研究所。

(3)血清免疫指標檢測：選取免疫球蛋白M，A，G為血清免疫指標，按照雞免疫球蛋白M(IgM)，雞免疫球蛋白A(IgA)和雞免疫球蛋白G(IgG)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書操作；試劑盒購自于江蘇酶標生物有限公司。

(4)數據分析：用統計軟件IBM SPSS Statistics 2的one-way ANOVA對數據進行方差分析， Duncan法進行多重比較，以P<0.05差異顯著性判斷標準，實驗數據用Mean±SE表示。

表2 基礎日糧與營養水平Table 2 Basic diet and nutritional level

注：a預混料為每千克飼糧提供：Cu 14.4.0 mg，Fe 300.0 mg，Mn 156.0 mg，Zn 116.0 mg，I 1.1 mg，Se 0.5 mg， VA 9600 IU，VD 4500 IU，VE 58 IU，VK 12 mg，B16mg，B215 mg，B6 11 mg，B120.06 mg，煙酸 90 mg，泛酸 20 mg，葉酸 3.5 mg，生物素 0.4 mg。b計算值。
Note:aPremix provided for each kilogram of foodstuff: Cu 14.4.0 mg, Fe 300.0 mg, Mn 156.0 mg, Zn 116.0 mg, I 1.1 mg, Se 0.5 mg,VA 9600 IU, VD 4500 IU, VE 58 IU, VK 12mg,B16 mg, B215 mg, B611 mg, B120.06 mg, niacin 90 mg, pantothenic acid 20 mg, folic acid 3.5 mg, biotin 0.4 mg.bCalculation.

2 結果與分析

2.1 不同益生菌對柳州麻雞生長性能的影響

2.1.1 不同組柳州麻雞的體增重和日增重結果如表3和表4所示，6日內F1組柳州麻雞增重高達67.34 g，平均每只柳州麻雞每日增重11.22 g，與DSSJ，Kb，和F2組差異顯著(P<0.05)，與Db，KJT和對照組差異極顯著(P<0.01)；其次是DD組體增重為62.91 g，平均每日增重10.49 g；對照組平均體增重為46.74 g，與其他各組相比最少。10日內體增重最高的也是DD組和F1組，分別為127.51和127.15 g，平均日增重分別為12.75和12.72 g，與Db組差異顯著(P<0.05)，與對照組相比差異極顯著(P<0.01)；對照組平均體增重最少，為92.74 g，平均日增重為9.27 g，與其他組之間差異顯著(P>0.05)。23日內，柳州麻雞平均體增重最多的依舊是F1組，為449.78 g，每日平均增重19.56 g，與對照組和Db組相比，差異極顯著(P<0.01)；其次是F2組和Kb組，分別為434.98和432.98 g，平均日增重分別為18.83和18.91 g；對照組的平均體增重依舊最少，為378.58 g，均顯著低于試驗組(P<0.05)。試驗期到了30 d，F1組平均日增重高達21.61 g/只·天，平均每只柳州麻雞增重648.18 g，比對照組平均體重多出112 g，差異極顯著(P<0.01)，其次為Kb組，平均每只雞每日增重20.38 g，比對照組生長速度多了2.5 g/只·天。

2.1.2 不同組柳州麻雞的強壯雞與弱雞比例統計試驗期6 d，以柳州麻雞體重小于90 g的為弱雞，大于130 g的為強雞；試驗期10 d，以柳州麻雞體重低于120 g為弱雞，體重高于200 g為強雞；試驗期23日，以柳州麻雞體重小于350 g的為弱雞，大于550 g的為強雞；試驗期30日，以柳州麻雞體重小于500 g的為弱雞，大于800 g的為強雞。

如表5和表6所示，F1組在各時期，柳州麻雞弱雞所占比例皆為最低，分別為3 %，0 %，3 %和3 %；試驗初期(6日)和實驗中期(10日)，弱雞率最高的為Db組，但弱雞平均體重卻高于對照組；實驗后期(23日)和實驗末期(30日)對照組柳州麻雞弱雞率為最高分比為24 %和24 %，其次為Db組，22 %和21 %。同時F1組在所有時期的強雞比例比其他各組高，分比為24 %，17 %，17 %和10 %；KJT組在試驗初期和試驗后期的強雞較高，Kb組強雞率在試驗中、后期較高；對照組的強雞率在各時期為最低，分別為2 %，3 %，3 %，2 %。

表3 不同組柳州麻雞的體增重結果Table 3 Results of body weight gain of different groups of Liuzhou Ma chicken

注：同列數據字母相同表示差異不顯著(P>0.05),相鄰字母表示差異顯著(P<0.05),相間字母表示差異極顯著(P<0.01);下同。
Note: The same data in the same column indicates that the difference is not significant (P>0.05), the adjacent letters indicate significant difference (P<0.05), and the interphase letters indicate that the difference is extremely significant (P<0.01);The same as below.

表4 不同組柳州麻雞的日增重結果Table 4 Daily weight gain results of different groups of Liuzhou Ma chicken

表5 不同組柳州麻雞弱雞率Table 5 Different groups of Liuzhou Ma chicken weak chicken rate

表6 不同組柳州麻雞強雞率Table 6 Different groups of Liuzhou Ma chicken strong chicken rate

2.2 不同益生菌對腸道酶活的影響

2.2.1 柳州麻雞腸道脂肪酶酶活如表7所示，與對照組相比，十二指腸和空腸的脂肪酶活較高，回腸和盲腸的酶活較低；相對于對照組，其他益生菌組對十二指腸和空腸腸道脂肪酶活的改變較小，但是DSSJ，DD，F1和F2對回腸的脂肪酶活顯著增高(P<0.05)，DSSJ，Db，F1和F2對盲腸的脂肪酶活顯著增高；DSSJ組柳州麻雞十二指腸脂肪酶活平均為1.43 U/g，顯著高于其他組(P<0.05)；復合1組的空腸，回腸和盲腸腸道酶活分別為1.77，1.53和1.35 U/g，相比于對照組顯著增高(P<0.05)。

表7 柳州麻雞腸道脂肪酶酶活結果Table 7 Intestinal lipase activity of Liuzhou Ma chicken (U/g)

表8 柳州麻雞腸道淀粉酶酶活結果Table 8 Intestinal amylase activity of Liuzhou Ma chicken intestine (U/g)

表9 柳州麻雞腸道蛋白酶酶活結果Table 9 Liuzhou Ma chicken intestinal protease activity results (U/g)

2.2.2 柳州麻雞腸道淀粉酶酶活如表8所示，每組柳州麻雞整個腸段中，十二指腸淀粉酶活高于其他腸段；在十二指腸中，DSSJ，Db，F1和F2的淀粉酶活分別為7.06，7.28，7.14和7.4 U/g，顯著高于對照組CK(P<0.05)；在空腸中，淀粉酶活最大值為Kb組，平均酶活為5.79 U/g，其次是DD組，為5.29 U/g，顯著高于對照組(P<0.05)；在回腸中，DD組淀粉酶活極顯著高于對照組(P<0.01)，為5.63 U/g，其次為Kb組和F2組，分比為4.26和4.14 U/g，與對照組相比，呈顯著性差異(P<0.05)；而盲腸中，F2組淀粉酶活最高為3.52 U/g，與其他各組差異顯著(P<0.05)。

2.2.3 柳州麻雞腸道蛋白酶酶活如表9所示，在十二指腸腸段中，F1組蛋白酶活為621.18 U/g，是所有組中最高的，相對于對照組和KJT組差異極顯著(P<0.01)，其次為DD組，平均酶活為467.59 U/g；在空腸中，F1和DD組平均蛋白酶活為461.45和419.22 U/g，極顯著高于CK，KJT，其次為F2，與對照組和KJT組形成顯著性差異(P<0.05)；在回腸中，F1組蛋白酶活高達484.21 U/g，與對照組呈極顯著差異(P<0.01)，其次為DD組，251.31 U/g；在盲腸中，蛋白酶活最高依舊為F1組，409.91 U/g，與對照組呈顯著性差異(P<0.05)，其次，DD組平均酶活為284.75 U/g；F1組在各個腸段中的蛋白酶活都是最高的，其次為DD組。

2.3 不同益生菌對柳州麻雞血清免疫指標的影響

如表10所示，試驗組血清中免疫球蛋白A(Ig A)，免疫球蛋白M(Ig M)和免疫球蛋白G(Ig G)的含量均高于對照組。其中，F1組的3種抗體含量比對照組分別增加11.8 %(P>0.05)，37.46 %(P<0.05)，32.29 %(P<0.01)；F2組血清中的Ig A 和IgM含量分別為對照組的1.63倍(P<0.05)和1.37倍(P<0.05)；DD組血清抗體IgM的含量為4837.93 ng/mL，也與對照組形成明顯的差異(P<0.05)，乳酸菌KJT組血清抗體IgG含量高于對照組3694.72 ng/mL(P<0.05)。

3 討論

3.1 不同益生菌對柳州麻雞生長性能的影響

許多研究表明在禽類養殖應用中，給動物飼喂添加益生菌的飼料或飲水，可以提高動物的生長性能。王斌等[10]添加0.1 %唾液乳桿菌(活菌數≥1×1010cfu/g)和鼠李糖乳桿菌(活菌數≥1×1010cfu/g)1日齡白萊航SPF蛋用公雛雞的基礎日糧中，飼喂24 d后，乳酸菌組的雞體重與對照組相比明顯增加(P<0.05)，這說明乳酸菌可以提高動物的生長性能，這與本實驗中KJT組結果類似，在試驗期結束后，KJT組的柳州麻雞的體增重比對照組多10.62 %(P<0.05)；肖克權等[11]在基礎日糧中添加0.2 %的丁酸梭菌(活菌數≥1×109cfu/g)和枯草芽孢桿菌(活菌數≥3×109cfu/g)，20 d內2組益生菌試驗組的麻羽肉雞的日采食量，日體增重和料重比與對照組相比都有明顯的差異，有效增加了麻羽肉雞的體增重(P<0.05)，而本實驗中DSSJ組柳州麻雞平均體重相比對照組卻無明顯差異(P>0.05),Kb組麻雞體增重卻增加14.02 g(P<0.01)，結果與肖克權等相似；孫全友等[12]按照2×109cfu/kg比例在AA肉雞飼糧中添加了地衣芽孢桿菌，飼喂42 d后，地衣芽孢桿菌組相比于對照組平均日增重顯著增加了(P<0.05)，這與本實驗Db組柳州麻雞體增重無顯著差異的結果不一致；班慧[13]在AA肉仔雞日糧中添加0.02 g/100g 的雙歧桿菌菌粉，42 d試驗周期結果顯示，雙歧桿菌組與對照組的體增重差異不顯著(P>0.05)，這與本實驗DD組體增重結果一致，都未形成顯著性差異。本實驗還有兩種復配益生菌組，F1即乳酸菌和丁酸梭菌1∶1混合，和F2組乳酸菌，丁酸梭菌，地衣芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌和雙歧桿菌混合而成，實驗結果證明，兩種益生菌混合組對柳州麻雞體增重效果更好。

因為每組雞籠容納250只雞，采食飲水等問題使每只雞體重分布不均，因此選擇體重集中在80 %以上的區間內進行數據分析，并進行了少數弱雞和強雞的體重情況，結果表明，益生菌組弱雞少于對照組，且弱雞體重大部分大于對照組弱雞平均體重，而益生菌組強壯雞數量更多于對照組，平均體重也更高。

表10 不同益生菌對柳州麻雞血清免疫指標的影響Table 10 Effect of different probiotics on serum immune index of Liuzhou Ma chicken (ng/mL)

3.2 不同益生菌對柳州麻雞腸道酶活的影響

腸道益生菌可以幫助動物機體消化，增強腸道酶活力。陳靜等[14]在肉雞飲水中添加不同比例的植物乳桿菌，每隔兩周解剖并取空腸和回腸腸道內容物檢測淀粉酶活性和蛋白酶活性，結果表明肉雞空腸中的蛋白酶活和淀粉酶活以及回腸中蛋白酶活都顯著高于對照組(P<0.05)。李佳駿等[15]在科寶肉雞基礎飼糧中添加0.1 %的枯草芽孢桿菌 168 制劑 (活芽孢數為 1.0 ×109CFU/g)，分別在飼喂42 d后解剖取回腸和空腸洗去內容物檢測腸道粘膜消化酶活，發現實驗組空腸脂肪酶，蛋白酶和回腸蛋白酶活性均高于對照組(P<0.05)。本實驗用5種益生菌和2種復配益生混合菌，檢測了這幾種益生菌對柳州麻雞的十二指腸，空腸，回腸和盲腸的脂肪酶，淀粉酶和蛋白酶酶活的影響，結果表明，DSSJ可以顯著提高柳州麻雞的十二指腸淀粉酶酶活、脂肪酶酶活，和回腸和盲腸的脂肪酶酶活(P<0.05)；Db可以顯著提高柳州麻雞十二指腸淀粉酶酶活和盲腸脂肪酶酶活(P<0.05)；Kb可以增加空腸和回腸的淀粉酶酶活；DD可以增加空腸和回腸的淀粉酶和蛋白酶酶活，以及十二指腸的蛋白酶酶活(P<0.05)；F1組復合菌可以使十二指腸淀粉酶酶活和十二指腸，空腸，回腸的脂肪酶酶活以及全腸段的蛋白酶酶活(P<0.05)；F2組復合菌可以增加回腸和盲腸的脂肪酶酶活和淀粉酶酶活，以及空腸的蛋白酶酶活(P<0.05)。而KJT組與對照組各段腸段的酶活無顯著性差異(P>0.05)。

3.3 不同益生菌對柳州麻雞血清免疫指標的影響

血清免疫球蛋白包括免疫球蛋白G(Ig G)，免疫球蛋白M(Ig M)和免疫球蛋白A(Ig A)，是動物體液免疫的標志。甄玉國等[16]在肉仔雞的基礎日糧中添加2 %的植物乳桿菌(活菌數≥1.36×1010cfu/mL),飼喂42 d后，測定了肉仔雞血清中Ig A 和Ig G等含量，與對照組相比，基礎日糧中添加2 %的植物乳桿菌的實驗組中的免疫球蛋白含量分別增加了33.27 %(P<0.05)和17.88 %(P<0.05)。在本實驗中，KJT組并未顯著提升柳州麻雞血清免疫抗體IgA和IgM的含量，但是，卻顯著提高了IgG的含量(P<0.05)，這與甄玉國的實驗部分結果相似；此外，DD組血清抗體IgM的含量與對照組相比，明顯增加了(P<0.05)。謝文惠等[17]在基礎日糧中添加不同比例的枯草芽孢桿菌，嗜酸乳桿菌，酵母菌和雙歧桿菌混合菌，可不同程度的提高IgG和Ig A的含量(P<0.05)。本實驗中，2種復配菌都有效的提高了柳州麻雞血清免疫球蛋白含量，F1組的3種抗體含量比對照組分別增加11.8 %(P>0.05)，37.46 %(P<0.05)，32.29 %(P<0.01)；F2組血清中的Ig A 和IgM含量分別為對照組的1.63倍(P<0.05)和1.37倍(P<0.05)。