在體大鼠心臟采血方法實驗研究

周 宇，李雨嘉，余思宇，馮云鵬，路 暢，王程程，王巧玲*

（沈陽醫學院基礎醫學院，遼寧 沈陽 110034）

在眾多動物實驗的研究中，采血是經常運用的采集標本的方法。由于實驗操作的要求，常可選擇不同的采血方法。對于大型動物來說，一般采用靜脈采血的方式;而小型動物因靜脈較細、操作困難，一般以眼球或剪尾采血作為常用方式,但其缺點為采血量有限，故本實驗不適用。如若大鼠采血后即被處死，可選用采血量大又簡便的心臟直接抽血方式。綜合以上幾點，故以心臟采血方式作為本實驗的操作手法。目前，針對大鼠心臟采血實驗，研究者雖總結了一套比較成熟的方法[1]，但大鼠采血仍是困擾研究者的一項難題，操作過程中往往會出現因操作失敗而引起的溶血、采血量不足等情況，進而可能導致心包積水的發生。因此，本實驗采取心臟直接抽血法，操作簡便，可避免出現血量不足的現象。真空采血法的應用，因其具有無菌性、高質量標本的優點，可有效提高采血成功率和血液標本的質量，為臨床醫學的研究奠定了實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

SD大鼠40只，雌雄不限，購自沈陽醫學院動物實驗中心，體質量280～300 g，飼養條件：室溫飼養，飲用自來水，食普通大鼠顆粒飼料。水合氯醛，天津市科密歐化學試劑有限公司，批號20151010；0.9%氯化鈉注射液，山東華魯制藥有限公司，批號E15122806;真空采血管，江蘇宇力醫療器械有限公司，批號20160303；一次性使用靜脈血樣采集針，山東奧賽特醫療器械有限公司，批號20150108；2 ml一次性注射器；75%醫用酒精；醫用無菌敷料；解剖臺。

1.2 實驗方法

1.2.1 麻醉

采用腹腔麻醉的方法。用雙氧水將水合氯醛粉末制成10%水合氯醛溶液，按3 ml/kg劑量用注射器抽取麻醉藥，從大鼠左下腹30°進皮下，再成45°進入腹腔，回抽注射器有阻力后進行腹腔注射。待大鼠安靜下來，四肢酥軟，麻醉狀態達到最佳，其時效為3～5分鐘，可維持1小時左右。

1.2.2 固定

從籠內取出大鼠時，右手抓住大鼠尾巴根部，左手拇指和食指捏住大鼠頸部皮膚，固定住大鼠頭部，右手將尾巴和右腿向上提起0.5～1 cm，這時腹壁張力最大，保證同伴順利進行腹腔麻醉。待麻醉完畢，將大鼠仰臥位放置解剖臺，使身體完全展開，保證胸廓無扭曲現象并固定四肢。

1.4 采血方法

由于大鼠仰臥位時，心臟位于胸腔正中央，心尖稍偏向左側。因此，本實驗選擇胸部正中脫毛、酒精消毒、剪皮，暴露劍突和肋骨，然后用大剪刀剪開胸骨，完全暴露心臟。輸液針于心尖部插入，向心內滴注生理鹽水，大鼠心率可達216～600次/分[2]，易引起出血，需固定住輸液針，防止其脫落。采血同時并進行心臟灌流，保證足夠的血量。實驗者持采血針水平角度刺向右心室，另一端連接肝素化負壓采血管，利用負壓狀態使血液流入管內，抽血較容易。進針深度亦可影響實驗結果，常為刺入心臟后感覺進針無阻力即可抽血。

2 結 果

2.1 真空采血法優勢分析

與傳統采血法相比，真空采血法優勢如下[3-4]：血液采集過程密封性好，無菌程度高，一次性將血液標本注入真空管內，直接用于離心，省略掉注射器抽血后注入試管的環節，消除了致污因素;注射器采血不可避免的推拉對固定很不利，而采血針易于固定，可縮短抽血時間，避免因采血時間過長造成的溶血，血液檢測與分析結果的準確性高。同時分離膠管可快速將血清與血漿分離，減少血液污染和細胞與血清間的相互干擾，維持血清中被測組分的穩定。

2.2 不同采血方法對比結果

根據查閱文獻資料進行分析，對大鼠多種采血方法進行整理，最終選擇心臟采血方式。依據如表1。

2.3 采血量結果

依據對比結果，選用心臟采血法，采集大鼠血樣，為之后血清生化檢測實驗做輔助。兩組中SD大鼠血液量收集結果記錄如表2。

表1 不同采血方式對比結果

表2 SD大鼠血液采集量（ml）

3 討 論

在動物實驗研究中，經常對大鼠的血樣進行指標檢測，本實驗通過右心室采集血液樣本為下一步進行血液細胞分析及生化指標檢測提供材料，通過血清生化檢測結果可得到實驗組與對照組的異同，判斷實驗組注射磁性氧化石墨烯對大鼠是否有影響，從而明確氧化石墨烯的作用效果，為實驗的進行打下基礎。

然而血樣指標檢測實驗關鍵環節在于采血的成敗，若因采血操作技術不合格而導致血量不足，將會影響實驗結果的觀察。而直接心臟采血法由于其操作簡便，定位準確，可降低實驗操作失誤率。

由于大鼠個體較小，靜脈血管較細，肉眼直接穿刺失誤率較高，而其他的采血方法均有不同程度的缺點，若需得到更多血液，僅可采用挖眼或斷頸處死動物的方式，且存在潛在的危害[5-7]。本實驗中采用活體心臟采血的方式，符合國際上遵循的“3R”原則(Replacement替代,Reduction減少,Refinement優化)，避免動物資源的浪費，對尊重實驗動物方面有積極的意義。

操作過程中，保證熟練操作采血技術，需注意以下幾點：（1）麻醉藥的劑量需適中，過量將會直接處死動物，影響心臟灌流的進行；過少可能會出現動物麻醉不徹底，操作過程中覺醒的現象，影響實驗的進度；（2）大鼠固定需“直、正”：頭與身體保持平正；拉直頭部，使身體完全伸展開，避免由于體位不正，影響定位準確性；（3）心臟穿刺采血時，應注意掌握針頭進針的深度,動作迅速，防止凝血。（4）如需獲取血漿,注射器應先用稀釋的肝素潤濕，以防止凝血的發生。

本實驗活體心臟采血的方法，由于其肉眼觀測方便，進針較淺，穿刺極易成功，操作人員可經短暫訓練即可成功完成。因此，選擇此種方法可提高實驗的精確性，避免個體差異對實驗結果的影響。

本文編輯：吳 衛