保嬰散對幼齡SD大鼠急性毒性的毒理學研究

蔣文慶，杜青云，郭秋平*，盧 圓，齊珍珍

（1.廣州白云山奇星藥業有限公司，廣東 廣州 510530；2.廣州醫藥研究總院有限公司藥物非臨床評價研究中心，廣東 廣州 510240）

兒童的生長發育不同于成人，同時由于兒童的器官及組織發育未完善，不能用成人的臨床數據和成年動物的臨床前安評數據來支持臨床兒科用藥的安全性。因此，采用幼齡動物開展兒科藥物的臨床安全性評價非常有必要。近年來，隨著在臨床上兒科用藥需求的增加，兒科藥物的安全性受到更多的關注。保嬰散是廣州白云山奇星藥業有限公司的獨家中成藥品種，由膽南星、鉤藤、人工牛黃、冰片、僵蠶（姜制）、全蝎（制）、珍珠、人工麝香、白附子（醬醋制）、天麻（姜制）、蟬蛻（去頭足）、琥珀、防風、天竺黃、朱砂組成，具有除痰、定驚、清熱解毒的功效，可用于治療小兒驚風、痰涎壅盛。保嬰散方中含有膽南星、全蝎、白附子、朱砂等毒性中藥[1-3]，有必要開展保嬰散的毒理學試驗。本試驗以保嬰散為研究對象，在出生19天的幼齡大鼠上進行急性毒性試驗，為保嬰散的臨床應用提供參考。

1 材料與儀器

1.1 藥物

保嬰散，廣州白云山奇星藥業有限公司提供。批號：20160704，有效期至：2018年6月30日。臨用時用0.5%羧甲基纖維素鈉配成所需濃度的藥液。

1.2 動物

成年SD大鼠，19～20周齡，SPF級，雌雄各12只，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物生產許可證號：SCXK（湘）2011-0003。本試驗使用的幼齡SD大鼠源于購進的雌雄大鼠交配繁殖。飼養于屏障級動物房，溫度20～26℃，相對濕度40～70%，12h/12h明暗光照交替。使用時體重范圍：雌性仔鼠42～56 g；雄性仔鼠42～57 g。

2 方 法

2.1 口服給藥急性毒性

取出生后19 d的幼齡大鼠30只，按體重隨機分為陰性對照組、保嬰散低劑量和高劑量（分別為2.2 g/kg、4.4 g/kg，按公斤體重折算，分別相當于人臨床用量37倍和74倍）組，每組10只大鼠，雌雄各半。給藥前禁食不禁水12 h，各組均以10 mL/kg灌胃給藥，24 h給藥兩次，兩次時間間隔6 h以上。陰性對照組給予等體積的0.5%CMC-Na溶液。給藥后觀察至少4 h，以后每天至少觀察1次，持續觀察14天。并于給藥后第2、3、5、7、11、14天測定動物體重。一般觀察包括動物體重變化、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物等。記錄所有動物的死亡情況、中毒癥狀及中毒反應的起始時間、嚴重程度、持續時間、是否可逆等。給藥后第14 d，處死動物，解剖，肉眼觀察動物心、肝、脾、肺、腎等主要器官。

2.2 統計方法

根據所觀察到的各種毒性反應（其出現時間、嚴重程度、持續時間等）和死亡情況，進行分析比較，確定最大給藥量。對體重進行統計分析，計算平均值和標準差，各實驗組進行組間比較之前先進行組間方差分析（F-test），當組間方差齊同時，組間比較采用Student-T檢驗（非配對的T檢驗）進行統計，組間方差不齊時，采用校正的Student-T檢驗進行統計分析。病理檢查異常情況則按其發生率和程度進行組間比較。

3 結 果

3.1 一般狀態觀察結果

保嬰散低劑量組給藥當天及第2～14天全部動物一般觀察未見異常。保嬰散高劑量組在第二次給藥后30 min內，10例動物中有3例雄性動物出現活動減少、閉眼癥狀，給藥后1～4h陸續恢復正常。第2～14天全部動物一般觀察未見異常。

3.2 大鼠死亡情況

連續14 d觀察中，保嬰散低、高劑量組均未見動物死亡。

3.3 保嬰散對大鼠體重的影響

與陰性對照組比較，保嬰散低、高劑量組雌雄動物體重均未見統計學意義的差異，在觀察期14 d體重均保持增長趨勢。

表1 保嬰散對SD大鼠體重的影響（±s，n=10）

表1 保嬰散對SD大鼠體重的影響（±s，n=10）

組別 劑量(g/kg) 性別 D1 D2 D3 D5 D7 D11 D14 增重(g)陰性對照 - ♂ 47±5 52±5 60±7 73±8 86±8 115±16 145±15 98±11♀ 47±4 53±4 59±5 72±7 82±7 110±10 131±10 84±8保嬰散 2.2 ♂ 49±2 53±2 60±3 73±2 87±4 115±9 147±6 99±5♀ 47±2 51±2 58±2 72±2 83±2 113±3 135±5 88±6保嬰散 4.4 ♂ 49±5 52±7 59±9 73±9 87±10 117±15 147±14 98±11♀ 47±4 51±5 57±4 71±6 80±6 109±7 132±7 84±5

3.4 保嬰散對大鼠病理學的影響

各組全部動物大體剖檢未見明顯異常。

4 結果討論及評價

根據中華人民共和國《藥物非臨床研究質量管理規范》[4-5]，在GLP條件下，本試驗選用出生19 d的幼齡大鼠（大約相當于2歲左右的嬰幼兒）進行了保嬰散的急性毒性試驗。保嬰散2.2、4.4 g/kg（按公斤體重折算相當于每日臨床用量的37、74倍）動物未見動物死亡，體重與陰性對照組相比無明顯差異，大體解剖也未見明顯異常。高劑量組動物在第二次給藥后30 min內，有3例雄性動物出現活動減少、閉眼的癥狀，給藥后1～4 h陸續即恢復正常。第2～14天全部動物一般觀察未見異常。

綜上所述，保嬰散每日最大給藥量為4.4 g/kg，約為每日臨床用量的74倍。保嬰散4.4 g/kg給藥后30 min內可引起部分雄性動物出現活動減少、閉眼癥狀，給藥后4 h可恢復正常。結合灌胃給藥的藥液體積和其它各項檢查指標綜合分析，該反應可能為胃部撐漲、飽腹疲憊的反應，非藥物毒性所致，無明顯毒理學意義。各組均未見明顯的毒性靶器官。