尿液DACH2測定對膀胱尿路上皮癌的診斷價值

楊偉嬌　夏桃林　陶文　羅子寰　李遼源　何婭娣

【摘要】目的 探討尿液Dachshund同源基因2（DACH2）測定對膀胱尿路上皮癌的診斷價值。方法 收集因可疑膀胱腫瘤需行經尿道膀胱病變切除術患者的尿液，采用放射免疫法檢測尿液DACH2水平，采用受試者工作特征（ROC）曲線分析尿液DACH2水平對膀胱尿路上皮癌的診斷效能。結果 共納入72例患者，按照術后病理結果分為膀胱尿路上皮癌組（腫瘤組）49例、膀胱良性疾?。ò园螂籽缀湍蚵飞掀ぴ錾┙M（良性組）23例。腫瘤組患者術前尿液DACH2水平高于良性組（P < 0.05）。腫瘤組中，高級別者術前尿液DACH2水平高于低級別者（P < 0.05）。尿液DACH2水平診斷膀胱尿路上皮癌的ROC曲線下面積為0.796，最佳臨界值為4.05 ng/ml，此時的靈敏度和特異度分別為86.7%和83.4%。結論 尿液DACH2測定可作為早期診斷膀胱尿路上皮癌的腫瘤標志物。

【關鍵詞】膀胱尿路上皮癌;診斷;腫瘤標志物;Dachshund同源基因2

【Abstract】Objective To evaluate the value of urine DACH2 in the diagnosis of bladder urothelial carcinoma. Methods The urine samples of patients with suspicious bladder lesions who required transurethral resection were collected. The urine DACH2 concentration of all patients was analyzed by radioimmunologic assay. The receiver operating characteristic （ROC） curve was generated to assess the diagnostic efficacy of urine DACH2 level for bladder urothelial carcinoma. Results According to the results of pathological examination， 72 patients were divided into the benign diseases including chronic cystitis and urothelial hyperplasia （benign group， n = 23） and bladder urothelial carcinoma groups （cancer group， n = 49）. The preoperative urine DACH2 level in the cancer group was significantly higher than that in the benign group （P < 0.01）. In the cancer group， the preoperative urine DACH2 level in patients with high-grade bladder urothelial carcinoma was remarkably higher compared with that in their counterparts with low-grade carcinoma （P < 0.05）. The area under the ROC curve of urine DACH2 levels was 0.796. The specificity was 86.7% and the specificity was 83.4% when the optimal cutoff value of urine DACH2 level for the diagnosis of bladder urothelial carcinoma was 4.05 ng/ml. Conclusion The urine DACH2 level can serve as a tumor marker for early diagnosis of bladder urothelial carcinoma.

【Key words】Bladder urothelial carcinoma;Diagnosis;Tumor marker;Dachshund homolog 2

膀胱癌是最常見的泌尿系統腫瘤，其中90%以上為尿路上皮癌。筆者團隊前期研究已證實Dachshund同源基因2（DACH2）與膀胱尿路上皮癌的惡性生物學行為密切相關[1]。為進一步評價尿液DACH2檢測在膀胱尿路上皮癌診斷中的臨床價值，通過放射免疫方法分別檢測了49例膀胱尿路上皮癌和23例膀胱良性疾病患者的尿液DACH2水平，并進行統計學分析，現報告如下。

材料與方法

一、標本來源

收集中山大學附屬第三醫院泌尿外科2015年6月至2016年12月間因可疑膀胱腫瘤需行經尿道膀胱病變切除術患者的尿液標本。符合下列條件之一予以排除：①入院前已行抗腫瘤治療者;②復發膀胱腫瘤者。本研究經中山大學附屬第三醫院醫學倫理委員會批準，患者在采集標本前均已簽署知情同意書。

二、標本采集

檢測對象均在術前24 h留取清潔中段尿1 ml，立即按1∶100加入60 g/L牛血清白蛋白溶液，調節pH值為7.40，15 min內分離上清，-20℃保存。

三、主要試劑和儀器

DACH2放射免疫試劑盒由中國原子能科學研究院同位素研究所研制。XH-6010 γ射線計數儀由西安儀器廠生產。

四、檢測方法

首先將待測尿樣0.1 ml分別加入0.1 ml抗體和0.1 ml標記抗原，混勻，37 ℃溫育3 h，形成DACH2、抗原及抗體相結合的復合物，然后加0.5 ml分離劑15 min后，以3000轉/分離心20 min，棄上清去除未結合的物質，最后加入化學發光底物。檢測沉淀中的放射性計數60 s[2-3]。

五、統計學處理

采用SPSS 19.0分析數據。計量資料以表示，組間比較采用t檢驗。分析尿DACH2水平診斷膀胱尿路上皮癌的靈敏度、特異度，繪制受試者工作特征（ROC）曲線，計算曲線下面積（AUC），使用GraphPad Prism 8.0繪制散點圖。P < 0.05為差異有統計學意義。

結果

一、入組患者總體情況

共納入72例患者，按照術后病理結果分為膀胱尿路上皮癌組（腫瘤組）49例、膀胱良性疾病（包括慢性膀胱炎和尿路上皮增生）組（良性組）23例。腫瘤組中，男32例、女17例，年齡44 ～ 73歲、中位年齡55歲，病理低級別（G1 ～ G2）31例、高級別（G3）18例。良性組中，男13例、女10例，年齡41 ～ 69歲、中位年齡50歲。2組患者的性別構成、年齡比較差異均無統計學意義（P均> 0.05）。

二、腫瘤組和良性組患者的尿液DACH2水平比較

腫瘤組和良性組患者術前尿液DACH2水平分別為（7.42±1.23）、（2.03±0.51）ng/ml，腫瘤組患者術前尿液DACH2水平高于良性組（t = 11.080，P < 0.05），見圖1A。腫瘤組49例中，高級別者術前尿液DACH2水平為（8.15±1.42）ng/ml，高于低級別者（5.48±1.07）ng/ml（t = 4.867，P < 0.05），見圖1B。因本研究僅納入2例肌層浸潤性腫瘤，故未進一步行腫瘤分期間的比較。

三、尿液DACH2診斷膀胱尿路上皮癌的效能分析

尿液DACH2水平診斷膀胱尿路上皮癌的ROC AUC為0.796。在保持85%靈敏度時，尿液DACH2 的臨界值為5.03 ng/ml，特異度為51.5%;在保持95%靈敏度時，尿液DACH2 水科的臨界值為2.73 ng/ml，特異度為42.6%。在尿液DACH2診斷膀胱尿路上皮癌的 ROC曲線上，離靈敏度和特異度均為1.000交匯點最近的臨界值為4.05 ng/ml，此時的靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值分別為0.867、0.834、0.638、0.751，同時兼顧到靈敏度和特異度，可作為尿液DACH2診斷膀胱尿路上皮癌最佳臨界值，見圖2。

討論

膀胱癌是最常見的泌尿系統惡性腫瘤，發病率在世界范圍內男性中居第4位、女性中居第8位。據報道，膀胱癌整個診治過程中所耗費用超過其他腫瘤[4-6]。經膀胱鏡及輸尿管鏡的組織病理學檢查是診斷膀胱癌的金標準，但其存在費用高、患者不適及出血感染等缺點，尿脫落細胞檢查也是膀胱尿路上皮癌的主要診斷手段之一，但其靈敏度較低[7]。因此，探索有效的膀胱癌診斷方法，盡早診斷、盡早治療，對于提高療效和減輕患者經濟負擔具有重要意義。

DACH2基因位于Xq21.3，目前，有關DACH與腫瘤的相關研究主要以DACH1為主[8-10]。目前DACH2與腫瘤的相關研究甚少[11-12]。筆者前期研究發現，膀胱腫瘤組織DACH2高表達與膀胱尿路上皮癌的惡性侵襲有關[1]。本研究顯示，腫瘤組尿液DACH2水平高于后者，且尿液DACH2水平與腫瘤分級相關，腫瘤分級較高的患者，其尿液DACH2水平也較高。研究結果提示，測定尿液DACH2水平可作為一種早期診斷膀胱尿路上皮癌的方法。

本研究進一步以術后病理檢查結果為金標準，分析尿液DACH2水平診斷的靈敏度和特異度，在選擇病例時有效地避免偏倚是至關重要的。通過嚴格納入標準最大限度地降低病例選擇的偏倚。結合2組患者年齡及性別構成比較差異無統計學意義，說明2組病例間具有較好的可比性。通過ROC曲線分析尿液DACH2濃度的診斷效能，結果顯示AUC為0.796，具有較好的診斷效能，且測定尿液DACH2簡單易行，宜于臨床推廣使用。從尿液DACH2診斷膀胱尿路上皮癌的ROC曲線中可看出，當尿液DACH2診斷膀胱尿路上皮癌的臨界值選取為4.05 ng/ml時，其診斷的靈敏度和特異度分別為86.7%和83.4%，診斷效能較高。因為本研究納入的樣本量較小，因此日后尚待更大樣本量的研究進一步探究此臨界值作為尿液DACH2診斷膀胱尿路上皮癌的可行性。

綜上所述，尿液DACH2水平診斷膀胱尿路上皮癌具有一定意義。我們認為尿液DACH2檢測簡便易行，可考慮作為早期診斷膀胱尿路上皮癌的客觀指標，具有進一步深入研究的價值。

參 考 文 獻

[1] He YD， Luo ZH， Yang M， Ruan XX， Liu SY， Wu ZQ， Deng WM， Shao CK， Su ZL， He D， Gao X， Li LY. Prospective validation of DACH2 as a novel biomarker for prediction of metastasis and prognosis in muscle-invasive urothelial carcinoma of the bladder. Biochem Biophys Res Commun， 2015， 459（3）：416-423.

[2] Halder S， Dey RK， Chowdhury AR， Bhattacharyya P， Chakrabarti A. Differential regulation of urine proteins in urothelial neoplasm. J Proteomics， 2015， 127（Pt A）：185-192.

[3] Li LY， Yang M， Zhang HB， Su XK， Xu WF， Chen Y， Shen ZJ， Gao X. Urinary fibronectin as a predictor of a residual tumour load after transurethral resection of bladder transitional cell carcinoma. BJU Int， 2008， 102（5）：566-571.

[4] Zibelman M， Plimack ER. Systemic therapy for bladder cancer finally comes into a new age. Future Oncol， 2016， 12（19）：2227-2242.

[5] Soloway MS. Bladder cancer： active surveillance for low-grade Ta bladder tumours. Nat Rev Urol. 2016， 13（6）：303-304.

[6] Cancer Genome Atlas Research Network. Comprehensive molecular characterization of urothelial bladder carcinoma. Nature， 2014， 507（7492）：315-322.

[7] Chou R， Gore JL， Buckley D， Fu R， Gustafson K， Griffin JC， Grusing S， Selph S. Urinary biomarkers for diagnosis of bladder cancer： a systematic review and meta-analysis. Ann Intern Med， 2015， 163（12）：922-931.

[8] Xu H， Yu S， Yuan X， Xiong J， Kuang D， Pestell RG， Wu K. DACH1 suppresses breast cancer as a negative regulator of CD44. Sci Rep， 2017， 7（1）：4361.

[9] Liu Q， Li A， Yu S， Qin S， Han N， Pestell RG， Han X， Wu K. DACH1 antagonizes CXCL8 to repress tumorigenesis of lung adenocarcinoma and improve prognosis. J Hematol Oncol， 2018， 11（1）：53.

[10] Zhao F， Wang M， Li S， Bai X， Bi H， Liu Y， Ao X， Jia Z， Wu H. DACH1 inhibits SNAI1-mediated epithelial-mesenchymal transition and represses breast carcinoma metastasis. Onco-genesis， 2015， 4（3）：e143.

[11] Wu K， Chen K， Wang C， Jiao X， Wang L， Zhou J， Wang J， Li Z， Addya S， Sorensen PH， Lisanti MP， Quong A， Ertel A， Pestell RG. Cell fate factor DACH1 represses YB-1-mediated oncogenic transcription and translation. Cancer Res， 2014， 74（3）：829-839.

[12] Shin K， Ko YG， Jeong J， Kwon H. Fbxw7β is an inducing mediator of dexamethasone-induced skeletal muscle atrophy in vivo with the axis of Fbxw7β-myogenin-atrogenes. Mol Biol Rep， 2018， 45（4）：625-631.

（收稿日期：2019-12-04）

（本文編輯：林燕薇）