兒童呼吸道感染流感嗜血桿菌的檢驗及耐藥性分析

李曉紅

（太倉市第一人民醫院檢驗科，江蘇 太倉 215400）

流感嗜血桿菌屬于機會性致病菌，在人類上呼吸道中定植，其感染易發生于免疫力相對低下的人群，如嬰幼兒、老年人，主要引發呼吸道感染、支氣管肺部感染，感染后如未能及時治療，可繼發腦膜炎等全身感染，增加死亡風險，是致5歲以下兒童死亡的一個主要原因[1]。近年來，不斷提升流感嗜血桿菌的檢出率，加之廣泛的應用抗菌藥物，也隨之逐年升高該菌株的耐藥率，一定的影響了其臨床治療效果[2]。本研究即以本院接受的呼吸道感染患兒為研究對象，觀察流感嗜血桿菌的檢出情況，并分析分離出的菌株的耐藥性，為臨床合理選擇抗菌藥物提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究對象選取本院收治的561例呼吸道感染患兒，收治時間2019年1月～2019年12月，男341例，女220例；年齡32 d～13歲，平均（5.2±2.8）歲；發病季節：春季145例，夏季93例，秋季168例，冬季155例。納入標準：（1）與呼吸道感染診斷標準相符；（2）以咳嗽、發熱、咳痰等為主要癥狀表現；（3）年齡14歲以下；（4）病程3～14 d；（5）知情同意，自愿參與；（6）剔除重復菌株。排除標準：（1）抗生素治療在標本采集前已經開展；（2）細菌、病毒感染已經明確存在；（3）合并血液系統疾病、免疫缺陷疾病。

1.2 方法

1.2.1 標本采集：按照規定的操作規程采集呼吸道分泌物標本，采集前2h，指導患兒用生理鹽水漱口，如患兒無法自主漱口，指導患兒家長正確的利用生理鹽水清潔口腔，2h后利用無菌棉簽在患兒口腔內取呼吸道分泌物，取出后在無菌器皿內放置棉簽，或者呼吸道痰液標本利用低壓吸引器負壓吸取，取出后在無菌試管內放置，及時的向實驗室運送標本，開展細菌檢驗。

1.2.2 細菌檢驗與鑒定[3]：（1）巧克力培養基：由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供的流感嗜血桿菌培養基瓊脂。（2）流感嗜血桿菌的培養和鑒定：先開展涂片鏡檢，顯微鏡利用低倍鏡檢查時，每個視野內鱗狀上皮細胞不超過10個、白細胞超過25個則可判定為樣本合格；在巧克力平板、血平板內分別接種，完成后放入培養箱中，使用的培養箱要含5%CO2，溫度35℃，給予24 h的孵育。血平板不生長，巧克力平板上的可疑菌落（無色、透明、具有光滑的表面和整齊的邊緣、濕潤）進行涂片，給予革蘭染色后，陰性短小桿菌可見。在普通瓊脂平板上接種可以菌種（0.5麥氏濁度），生長因子貼三種，分別是V、X、X+V，35℃環境下進行24h孵育，細菌僅在X+V周圍生長，而X、V周圍不成長的然后采取由法國Bio-Merieux公司提供的VITEK-2 Compact全自動微生物鑒定儀。

1.2.3 藥敏試驗[4]：采取由法國Bio-Merieux公司提供的VITEK-2 Compact全自動微藥敏系統，由英國Oxoid公司提供的抗菌藥物藥敏紙片。β-內酰胺酶采用頭孢硝噻吩紙片。

1.3 統計學分析

采用SPSS 20.0統計分析，數（n）和率（%）表示計數資料，利用x2檢驗；利用WGONET5.6軟件開展耐藥性分析，P＜0.05表明差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 流感嗜血桿菌檢出情況

561例呼吸道分泌物標本中，共分離出67株流感嗜血桿菌，檢出率11.9%。流感嗜血桿菌在不同性別中的檢出率基本相同（P＞0.05）；但在不同年齡段、不同季節中的檢出率存在明顯差異（P＜0.05）。見表1。

表1 流感嗜血桿菌檢出情況n（%）

2.2 藥敏試驗結果分析

藥敏試驗結果顯示，耐藥率占據前三位的抗菌藥物分別為復方新諾明、氨芐西林、頭孢克洛，耐藥率分別為74.6%、73.1%、55.2%，具體見表2（剔除重復菌株）。

3 討 論

1982年時，流感嗜血桿菌首次被發現，這之后世界范圍內不斷的檢出該病菌[5]。流感嗜血桿菌屬于革蘭陰性短小桿菌，呈多形性，可在人與人之間傳播，傳播途徑為密切接觸和空氣飛沫，感染后可引起多種原發性和繼發性的疾病，如腦膜炎、關節炎、中耳炎、敗血癥，在我國該致病菌感染則多見于肺炎中[6]。在應用流感嗜血桿菌疫苗之前，流感嗜血桿菌可引起嚴重感染，且有著較高的病死率，據報道，流感嗜血桿菌感染死亡病例中，絕大多數為5歲以下兒童，因而該致病菌感染對少年兒童的健康有著嚴重威脅。分析原因，5歲以下兒童尚不具備健全的免疫系統，體內特異性抗體水平也不高，一旦患有呼吸道感染，該病菌在呼吸道中的定植風險提高，容易誘發感染。

表2 2019年度耐藥情況分析

近年來，隨著細菌培養與鑒定技術的提高，不斷提升流感嗜血桿菌的檢出率，本研究561例樣本中，檢出67株流感嗜血桿菌，檢出率可達到11.9%。本研究進一步分析了該病菌在不同性別、年齡、季節中的檢出情況，結果顯示，在不同性別中的檢出率基本相同，不過，由于本研究樣本量較少，流感嗜血桿菌檢出率在不同性別患兒中是否存在區別還需要開展進一步的研究；在不同年齡段中，3歲以上小兒的檢出率明顯低于3歲以小兒，這是因為小兒年齡不足3歲時，鼻毛清除細菌的能力較差，自身免疫功能也不強，再加上基本不進行大范圍的活性，增加了該病菌的感染風險；在不同季節中，冬季和春季的檢出率明顯更高，原因是這兩個季節氣候干燥、氣溫低，導致降低氣道黏膜局部的免疫功能，弱化清除細菌能力，再加上小兒多數時間處于通風不良的室內，容易傳播、擴散此病菌。

目前，臨床治療呼吸道感染患兒時，主要采用抗菌藥物治療，但抗菌藥物種類眾多，并不是所有藥物都能獲得理想的治療效果，還需選擇敏感抗生素，促進患兒盡早康復。本研究藥敏分析結果顯示，在選擇的11種抗生素中，耐藥率占據前三位的抗菌藥物分別為復方新諾明、氨芐西林、頭孢克洛，這可能與臨床中較為廣泛的使用這三種抗菌藥物密切相關。本研究中的β-內酰胺酶耐藥率較高達62.7%，表示需要重視流感嗜血桿菌耐藥性。本研究藥敏分析結果說明，并不適合采用氨芐西林和復方新諾明治療呼吸道感染患兒，可選擇頭孢噻肟、氧氟沙星等具有較低耐藥性的抗菌藥物，實際選用中，還要根據患兒特點來選擇，避免具有較大副作用的藥物，如氯霉素，以保證患兒用藥安全。

綜上，呼吸道感染患兒中較為常見流感嗜血桿菌感染，臨床治療此疾病患兒時，應積極的開展流感嗜血桿菌檢驗工作，明確是否存在流感嗜血桿菌感染，如存在則開展進一步的藥敏試驗，據此選擇敏感的、安全性高的抗菌藥物，增強臨床用藥的合理性，促進患兒疾病盡早康復。