高效液相色譜法測定食品中甜味素

尹彥青

（河北常山生化藥業股份有限公司，河北 常山 050800）

對“甜味”的追求是銘刻于人類的基因當中。隨著社會的發展，人們在追求“甜”的同時，也不忘追求“健康”【1】。盡管甜味素已經被證實并不會引發肥胖，對人體的危害也非常的微小，但是，如果食品加工過程中添加過量的甜味素，則有可能引發食用者發生腹瀉的可能，并且，實驗證明，甜味素攝取過量，極易造成苯丙酮尿癥患者無法正常代謝苯丙胺酸。此外，一些無良商家以更加廉價的其他人造甜味劑替代甜味素，造成食品安全隱患[2]。因此，對于測定食品中是否使用了甜味素，以及甜味素的具體含量，成為了相關監督部門以及食品檢測行業從業人員關注的重點。

一、高效液相色譜法原理

高效液相色譜是分析的有力工具。實施高效液相色譜法高效液相色譜法基本上是柱色譜法的一種高度改進形式。不是讓溶劑在重力作用下通過柱子滴下，而是在高達400個大氣壓的高壓下強制通過[3]。這樣可以更好地分離混合物的組分。另一個主要的改進就是柱色譜法的檢測方法。這些方法是高度自動化和極其敏感的。高效液相色譜法所采用的色譜柱中，二氧化硅顆粒充斥其中，通過混合物中的極性化合物比非極性化合物對極性二氧化硅的粘附時間更長這一特點，非極性電子將更快地通過圓柱。在這種情況下,柱子的大小是一樣的,但是硅石經過改性,通過在其表面附加長的烴鏈,使其成為非極性的——通常是8或18個碳原子。它們在溶劑中的溶解性也會降低，因為當它們擠進水分子或甲醇分子之間時，需要打破氫鍵。因此，它們在溶液中花費的時間較少，這會減慢它們通過柱的速度。這意味著現在是極性分子，將更快地通過色譜柱，從而快速的確定測定結果。

二、檢測實驗

（一）儀器與試劑

本次實驗所采用的儀器，包括高效液相色譜儀；離心機；電子天平。本次實驗所采取的試劑，包括實驗用純水；1000mg/L的水中甜蜜素溶液標準物質0.1001g；實驗用分析純（Sulfuric acid,hypochlorite,Sodium bicarbonate）；實驗用色譜純（Methanol,ethanol,n-ethane）。

（二）實驗流程

本次實驗選取了三種樣品，分別是市售飲料A、市售濃縮果汁B以及市售糖果C。對三種樣品進行取樣和制備，具體流程如下所述。

1.取樣品、微溫加熱除二氧化碳、氨水調節 PH=5、定容至 20 毫升、HA0.45μm 濾膜過濾，濾液備用。

2.樣品取樣和制備完成后，進行甜味素的測定：先取 20μl 甜味素標準溶液注入到高速液相色譜儀中，進行色譜分離測定；依據保留時間定性、外標法定量；重復上述測定過程，并進行結果標記。

三種樣品的甜味素測定過程一致，以此降低測定干擾。

3.結果

在陽離子模式下，以甲醇/水流動相（30:70，添加乙酸，pH為3.01），在正離子模式下分析阿斯巴甜，檢出限為5pg，水溶液中阿斯巴甜的線性響應范圍為10-200 pg[4]。該方法用于檢測飲料、濃縮果汁和糖果中的阿斯巴甜。其液色相譜如圖1、圖2和圖3所示。

4.討論

本文開發了一種同時測定液相色譜（LC）測定加工食品中甜味素的方法。通過在設置為160 rpm和50°C的恒溫振蕩器中使用30%甲醇溶液通過快速透析來制備樣品1小時。如果不使用固相萃取（SPE）進行純化步驟，則測試溶液中的基質對化合物的鑒定和定量沒有影響。該方法滿足所有驗證標準，所有樣品的定量限（LOQ）為0.01μg/ g。使用這種方法調查了3種加工食品中甜味素的含量，結果表明它們的檢出限低于較低的最低檢測限，以進一步增強產物識別能力。

需要注意的是，在本次實驗中，采用高效液相色譜法進行食品甜味素的測定，在檢測波長的確定時，需要充分的考慮到樣品甜味素的吸收情況，結合紫外線照射下，色譜流動相的相應值，210nm的波長是最佳波長。但是，在實際測定過程中，為了避免外部影響，以及樣品的不確定性，最終確定的檢測波長為220nm，這也是本次實驗中所采用的檢測波長，并且，實驗結果證明了該檢測波長能夠最大限度確保檢測結果準確。

其次，對食品中甜味素的測定來說，選擇合適的溶液酸堿度，有利于對溶液的測定結果的準確。同時，溫度也會在一定程度上，影響到甜味素的測定結果。因此，結合甜味素在3-5之間的酸堿度性質最穩定的特點，并且綜合實驗多方因素，將高效液相色譜法測定食品中的甜味素的溶液酸堿度確定為5，同時，色譜柱的溫度定為25℃。

三、結論

綜上所述，食品加工行業的發展，使得甜味素在我國的食品加工中被廣泛應用，同時，秉承對廣大人民群眾的健康負責，對待甜味素的使用要格外的嚴謹，因此，我國明確規定了食品加工中甜味素的使用量。有鑒于此，食品衛生監督部門出于提升我國食品安全、控制食品甜味素使用量的目的，應當在食品中甜味素的測定中，采用高效液相色譜法。