持續(xù)感染狀態(tài)的HPV-16及HPV-58亞型在宮頸病變中的分布及危險(xiǎn)因素

劉群香, 王 莉, 李江麗

(廣東省廣州市南方醫(yī)院太和分院婦產(chǎn)科, 廣東 廣州 510540)

存在多次人工流產(chǎn)史與人乳頭病毒(Human papillomavirus,HPV)感染者，是宮頸病變的高危人群[1]。宮頸病變未得到及時(shí)治療，可發(fā)展為宮頸癌，此時(shí)無(wú)論采用何種方法進(jìn)行治療，患者預(yù)后通常較差[2]。HPV持續(xù)感染可促進(jìn)宮頸上皮細(xì)胞發(fā)生病變與增殖，導(dǎo)致上皮惡性病變細(xì)胞突破基底膜與上皮組織受損[3]。通過(guò)阻斷HPV的感染途徑可有效預(yù)防宮頸癌的發(fā)生[4]。目前，被鑒定出的HPV分型超過(guò)200余種，其中50余種與宮頸病變密切相關(guān)。HPV分為低危型與高危型，低危型HPV感染為一過(guò)性，并不會(huì)導(dǎo)致臨床病理改變，只有高危型HPV持續(xù)感染才可導(dǎo)致宮頸上皮發(fā)生內(nèi)瘤變[5]。HPV-16、HPV-58在我國(guó)屬于常見(jiàn)的高危感染亞型，本文主要對(duì)我院宮頸病變患者HPV-16、HPV-58分布情況與導(dǎo)致其病變的危險(xiǎn)因素進(jìn)行研究，旨在為臨床中該病患者的治療與預(yù)防提供數(shù)據(jù)與理論支持。現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2017年1月至2019年3月我院收治的宮頸病變患者100例作為觀察組，另選我院體檢正常女性患者90例作為對(duì)照組。觀察組年齡28～43歲，平均年齡(35.27±5.42)歲，宮頸病變類(lèi)型：宮頸炎28例、宮頸上皮內(nèi)瘤變53例；其中Ⅰ期38例、Ⅱ～Ⅲ期15例、宮頸癌19例。對(duì)照組年齡26～45歲，平均年齡(34.17±5.66)歲。兩組患者年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲；②性生活史1年以上，無(wú)宮頸病變手術(shù)史；③非妊娠狀態(tài)，檢查前3d無(wú)陰道用藥與性生活。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有免疫性疾病或是正在服用免疫抑制劑；②存在宮頸錐切與子宮疾病史患者；③處于月經(jīng)期、浦乳期者；④半年內(nèi)有過(guò)激素治療與放化療史；⑤心、肝、腎存在嚴(yán)重疾病或是功能不全；⑥患有精神抑郁類(lèi)疾病或是長(zhǎng)期服用抗精神抑郁類(lèi)藥物。

1.2方法:標(biāo)本采集與處理：使用一次性宮頸細(xì)胞采集器刷取宮頸口處脫落細(xì)胞，取出后將刷頭保存于裝有細(xì)胞保存液的樣本管中，放入4℃冰箱中進(jìn)行保存，于兩周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，樣本避免反復(fù)凍融。將樣本轉(zhuǎn)移到1.5mL微量離心管中，使用離心機(jī)14000r/min，進(jìn)行離心后，將上清液去除，保留管底沉淀物，加入50μL DNA提取液，使用100℃加熱10min，再度14000r/min離心10min，取上清液待檢。PCR反應(yīng)總體積為25μL，每次實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置一個(gè)陰性對(duì)照與陽(yáng)性對(duì)照，處理方法相同，PCR反應(yīng)條件為50℃，15min。95℃，10min；隨后循環(huán)35次(94℃，30s；42℃，90s；72℃，30s)；72℃延伸5min。將PCR產(chǎn)物與固定有HPV分型探針?lè)湃?mL雜交液A(2倍SSC，0.1SDS，pH7.4)管中，沸水浴10min后于51℃雜交1.5h，模條轉(zhuǎn)移至洗滌液B(0.5倍SSC，0.1% SDS，pH7.4)，于51℃輕搖后洗滌5min，將液體棄除。模型與POD溶液中室溫輕搖孵育30min；模條分別使用雜交液A洗滌2次，每次5min。洗滌液C(0.1moL/L檸檬酸鈉，pH5.0)中避光顯色15min。顯色完畢后將模條浸泡于水中清洗，最后取出模條裝入封口袋于4℃環(huán)境中避光保存，最后根據(jù)藍(lán)色斑點(diǎn)出現(xiàn)的有無(wú)于位置判定HPV是否感染與其基因亞型。陽(yáng)性對(duì)照組于空白對(duì)照模條雜交法相同。對(duì)照模條PC點(diǎn)出現(xiàn)藍(lán)色斑點(diǎn)表示PCR、雜交、顯色等各環(huán)節(jié)操作正常，該結(jié)果為有效結(jié)果。

1.3觀察指標(biāo):對(duì)觀察組HPV-16、HPV-58分布情況進(jìn)行觀察記錄，對(duì)兩組一般資料進(jìn)行單因素分析，將具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義指標(biāo)納入二元Logistic回歸分析，得出導(dǎo)致其宮頸病變的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

2 結(jié) 果

2.1不同類(lèi)型宮頸病變者HPV-16、HPV-58分布情況:宮頸炎共檢出10例HPV-16陽(yáng)性、HPV-58陽(yáng)性13例；宮頸上皮內(nèi)瘤變I期共檢出14例HPV-16陽(yáng)性、HPV-58陽(yáng)性12例；宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ～Ⅲ期共檢出9例HPV-16陽(yáng)性、HPV-58陽(yáng)性10例；宮頸癌共檢出14例HPV-16陽(yáng)性、HPV-58陽(yáng)性15例；各組HPV-16陽(yáng)性、HPV-58陽(yáng)性情況比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.2兩組影響因素單因素分析:單因素分析顯示：觀察組與對(duì)照組之間初次性行為年齡<35歲、≥35歲、性伴侶數(shù)量≥2個(gè)、1個(gè)、有無(wú)陰道炎癥比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3二元Logistic回歸分析結(jié)果:二元Logistic回歸分析顯示：初次性行為年齡、性伴侶數(shù)量、陰道炎癥、宮頸癌家族史是導(dǎo)致宮頸病變的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表3。

表1 不同類(lèi)型宮頸病變者HPV-16 HPV-58分布情況n(%)

表2 兩組影響因素單因素分析n(%)

表3 二元Logistic回歸分析結(jié)果

3 討 論

隨著分子流行病學(xué)的發(fā)展，HPV感染與宮頸病變的關(guān)系越來(lái)越明確。根據(jù)研究結(jié)果[6]，90%宮頸病變患者可發(fā)生HPV感染。HPV屬于影響宮頸病變的主要因素，持續(xù)感染高危型HPV是導(dǎo)致病變進(jìn)展為癌癥的必要條件[7]。全球范圍內(nèi)HPV分型存在顯著的地域差異，HPV-16與HPV-58是最常見(jiàn)持續(xù)感染狀態(tài)的兩個(gè)亞型[8]。HPV-16是公認(rèn)感染最高的亞型，HPV-58是亞洲僅次于HPV-18的高危基因亞型。而臨床中導(dǎo)致宮頸病變的因素多樣，所以對(duì)HPV分型與導(dǎo)致宮頸病變的危險(xiǎn)因素進(jìn)行分析，能夠?yàn)閷m頸疾病的預(yù)防提供幫助。

本文研究中不同類(lèi)型宮頸病變患者均可發(fā)現(xiàn)HPV異常表達(dá)情況，其中宮頸癌患者HPV-16、HPV-58檢出率最高，其次為宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ～Ⅲ期，隨后為宮頸上皮內(nèi)瘤變I期，占比最少為宮頸炎患者。根據(jù)分析結(jié)果顯示：不同類(lèi)型宮頸病變患者HPV-16、HPV-58分布相較差異顯著。HPV-16是常見(jiàn)的高危型HPV，對(duì)宮頸上皮細(xì)胞浸潤(rùn)與黏附力較強(qiáng)且HPV-16過(guò)度表達(dá)可促進(jìn)宮頸上皮細(xì)胞增殖，抑制其凋亡，同時(shí)還可整合宿主線粒體DNA家屬癌細(xì)胞分化，提高惡性病變發(fā)生率[9]。曾有研究[10]指出，HPV-16持續(xù)性感染患者，會(huì)隨著宮頸病變的嚴(yán)重程度而增高。HPV-58是臨床中可引起宮頸上皮細(xì)胞發(fā)生病變的因素之一，對(duì)于宮頸上皮細(xì)胞持續(xù)性病變影響尤為顯著，加速HPV病毒顆粒對(duì)宮頸上皮細(xì)胞基底膜組織損害，對(duì)異常宮頸病變細(xì)胞持續(xù)性細(xì)胞核異型性與分裂現(xiàn)象改變具有加劇的作用。多種研究指出，HPV-58在我國(guó)部分地區(qū)的檢出率較高，這應(yīng)該與人群免疫基因攜帶與種族流行病學(xué)差異有關(guān)[11]。本文研究以及相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)論充分表明隨著宮頸病變的逐漸發(fā)展，患者HPV16與HPV-58會(huì)顯著改變。HPV高表達(dá)可促進(jìn)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子異常的調(diào)控，增加宮頸上皮細(xì)胞異常病變風(fēng)險(xiǎn)，還可影響宮頸柱上皮細(xì)胞周期調(diào)控，到細(xì)胞比例發(fā)生異常。

本研究單因素二元Logistic回歸分析顯示：初次性行為年齡、性伴侶數(shù)量、陰道炎癥、宮頸癌家族史是導(dǎo)致宮頸病變的影響因素與獨(dú)立危險(xiǎn)因素。根據(jù)研究[12]，年齡越小者開(kāi)始性生活發(fā)生宮頸病變的風(fēng)險(xiǎn)越高。性伴侶數(shù)量≥2個(gè)者因性伴侶的不固定，性伴侶過(guò)多可造成陰道微生態(tài)失衡，如若性伴侶存在生殖器不潔等情況，可導(dǎo)致細(xì)菌交叉感染，引起生殖器官及其他附件出現(xiàn)炎癥。陰道炎癥刺激會(huì)導(dǎo)致患者生殖器官受到刺激影響生理功能，其中陰道微生態(tài)會(huì)發(fā)生顯著改變，導(dǎo)致有害菌能夠持續(xù)繁殖危害生殖器官健康，同時(shí)導(dǎo)致患者HPV感染率的提升。家族中有宮頸癌家族史者，發(fā)生宮頸癌的幾率可顯著提升，這可能與家族遺傳基因有關(guān)。多類(lèi)研究指出，癌癥具有遺傳性，家族中存在癌癥患者后背該癌癥的發(fā)病率將顯著提升[13]。

綜上所述，本文中宮頸病變各類(lèi)型患者均檢出HPV-16、HPV-58分布，其中宮頸癌患者占比最高，其次為宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ～Ⅲ期、三是宮頸上皮內(nèi)瘤變I期，占比最少的是宮頸炎患者，這提示隨著疾病的進(jìn)展患者HPV-16、HPV-58會(huì)隨之提高。初次性行為年齡、性伴侶數(shù)量、陰道炎癥、宮頸癌家族史是導(dǎo)致宮頸病變的影響因素與獨(dú)立危險(xiǎn)因素；臨床中對(duì)于此類(lèi)患者需高度重視，患者就診時(shí)如存在上述因素，需考慮其是否存在宮頸病變。