不同因素對金線蓮組織培養的影響

李華娟 陸素君

摘 要：研究基本培養基MS、1/2MS、改良MS與不同濃度水平的6BA、NAA、馬鈴薯等方面對金線蓮芽的增殖、長勢方面產生的影響。在生根方面則主要是研究基本培養1/4MS、1/10MS、1/4改良MS以及添加物馬鈴薯對金線蓮組培生根的方面影響。結果表明，金線蓮增殖的最佳培養基為改良MS+6BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+200 g/L馬鈴薯，最佳生根培養基組合為1/4改良MS+NAA0.5 mg/L+馬鈴薯200 g/L。

關鍵詞：金線蓮;增殖;生根

中圖分類號：S567.23 ??文獻標識碼：A ??文章編號：1004-3020（2020）01-0022-03

Abstract：Effects of combination of basal medium （MS，1/2MS and modified MS） and different concentration of 6-BA，NAA and potato on the bourgeoning and growth vigor of Anoectochilus roxburghii（Wall.） Lindl while impacts of combination of medium （1/4MS，1/10MS and 1/4modifiedMS） and adding potato on the rooting of this plant were studied.Results showed that medium of “modifiedMS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+potato200 g/L” was the best on bud proliferation while medium of “1/4modifiedMS+NAA0.5 mg/L+potato 200 g/L” was the most excellent on rooting.

Key words：Anoectochilus roxburghii;proliferation take root

金線蓮Anoectochilus roxburghii是一種蘭科多年生藥用草本植物，多生長于海拔500～1 600 m的陰濕森林或竹林內[1]，素有“烏人參”美稱，該植物有調節內分泌、強心利尿、降血壓等功效，其提取物還有治療乳腺癌的作用[2]，具有廣闊的開發利用前景[3]，但由于其自然繁殖率極低，生長極為緩慢，加上近年來的大量采集，金線蓮資源日趨枯竭[4]。而采用組織培養手段對金線蓮進行短期快速繁殖，建立一套快繁體系，對該藥材的深入研究具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

金線蓮無菌初代瓶苗。

1.2 方法

1.2.1 芽的增殖

以MS、1/2MS、改良MS為基本培養基（改良MS對大量元素進行修改即KNO3 2 140 mg/L，NH4NO3 1 000 mg/L，其它成份與MS同），附加不同濃度的6-BA，NAA、馬鈴薯，采用正交表（L934）對不同組合處理試驗，3次重復，每處理接種10瓶，每瓶10個莖段，為避免因莖段部位不同而產生差異，本試驗均采用中部莖段，每10天觀察一次，50天后記錄芽的增殖情況，長勢等。試驗安排見表1。

1.2.2 試管苗生根

以1/4MS、1/10MS、1/4改良MS為基本培養基，附加濃度分別為0.5、1.0、1.5 mg/L的NAA，添加物為馬鈴薯，其濃度分別為0、100、200 g/L，碳粉0.5 g/L，三個重復，每處理接種10瓶，每瓶接種10株長約2.5 cm、有兩個節點且生長健壯的芽條。每10 d觀察一次，60 d后記錄苗的出根情況、根條數、根長等。試驗安排見表2。

1.3 其他培養條件

蔗糖30 g/L，瓊脂粉5.5 g/L，pH值5.8，培養溫度（25±1）℃，繼代增殖階段培養即800 Lx，生根階段1 200～1 500 Lx。

2 結果與分析

2.1 培養基、激素水平及馬鈴薯的添加對金線蓮繼代增殖的影響 ??由表3、表4可知，不同處理間在芽的增殖系數、芽生長狀況方面是有差異性的，而在芽的增殖方面增殖系數是評定增殖優劣的主要指標。在本次試驗中對各因子之間進行k值比較分析中發現，在不同培養基中以改良MS、6-BA濃度為3.0 m/L、NAA0.5 mg/L和馬鈴薯200 g/L的k值最大，是最佳理論組合。并且從芽的長勢來看，基本培養基1/2MS芽在粗壯程度、高生長、整齊度上是最差的，MS次之，最佳的是經過改良的MS，芽粗壯、較其他兩組都高且出芽整齊。進一步進行方差分析，由表4可知，四個因素中6-BA對增殖的影響達到極顯著水平，說明金線蓮對不同濃度的6-BA的誘導極其敏感，且6-BA濃度越高，越易在莖段節點處形成叢生芽點，而在6-BA濃度為0.5的基本無叢生芽點;而基本培養基對增殖系數的影響則達到顯著水平，NAA、馬鈴薯則影響不顯著，說明影響金線蓮增殖主要因素在于6-BA的濃度，其次是基本培養基成分。從k值來看，金線蓮的最佳增殖配方為改良MS+6BA3.0 m/L+NAA0.5 mg/L+馬鈴薯200 g/L。

2.2 基本培養基、不同激素水平、馬鈴薯的添加對金線蓮生根產生的影響 ??由表5可知，不同處理對金線蓮的生根率、根條數、根長方面影響是不同的，現在對生根的主要指標生根率的數據進行方差及極差分析，從k值大小來看，金線蓮生根產生最大影響的是馬鈴薯，其次是基本培養基，而NAA對其生根產生的影響相對較小，并且培養基以1/4改良MS最好，NAA則以1.0 mg/L、馬鈴薯以200 g/L為最佳。進一步對其進行方差檢驗可以看出，馬鈴薯對其生根的影響是極顯著的，培養基則對其生根的影響顯著，NAA對生根的影響不顯著。在添加了馬鈴薯的培養基中，均有良好的生根體現。在無馬鈴薯的培養基里，生根則受到顯著影響，根短且生根不齊，有的只在切口處形成根點而無法形成有效根。從試管苗的長勢來觀察，則1/4改良MS則表現在苗木生長更加粗壯，根系更加發達，因此1/4改良MS+NAA1.0 mg/L+馬鈴薯200 g/L最佳的生根培養基組合。

3 結果討論

（1）在金線蓮繼代增殖中，最適宜的培養基為改良MS+6BA3.0 m/L+NAA0.5 mg/L+馬鈴薯200 g/L，其芽萌發快且粗壯、增殖倍數高，生長速度快，苗相整齊，可達到快速育苗要求。

（2）在生根培養中，對基本培養基要求不高，三種培養基均可誘導出生根，其最佳的生根配方為1/4改良MS+NAA1.0 mg/L+馬鈴薯200 g/L能達到很好的生根效果。

（3）在對金線蓮的培養過程中，無論是在繼代增殖方面，還是在生根方面，均表現出對馬鈴薯的依賴，如在增殖中，缺少馬鈴薯的則表現為植株矮小，株干細弱，在生根方面則更加明顯，除了長勢弱，根系短、苗木長勢不齊，與添加了馬鈴薯在長勢上是無法比擬的。

參 考 文 獻

[1]中國科學院植物志編輯委員會.中國植物志（第七卷）[M].北京：科學出版社，2000：225-226.

[2]邱運亮，段鵬慧，趙華.植物組培快繁技術.北京[M]：化學工業出版社，2010：152.

[3]王小菁，陳剛，李明軍，等.植物生長調節劑在植物組織培養中的應用[M].北京：化學工業出版社，2010：102-103.

[4]李介元.臺灣金線蓮[J].臺灣農業探索.2001（2）：42.

（責任編輯：唐 嵐）