山丹顆粒對(duì)垂體后葉素致大鼠急性心肌缺血的影響

謝玲玲，李仁杰

山丹顆粒是臨床經(jīng)驗(yàn)方，由山楂、丹參、川芎等中藥組成，其功效為活血散瘀、行氣止痛，臨床用于治療胸痹心痛。臨床人擬用量為生藥45 g/d[生藥0.64 g/(kg·d)，按70 kg體重計(jì)算]。本研究觀察山丹顆粒對(duì)垂體后葉素(Pit)致大鼠急性心肌缺血的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 無(wú)特定病原體(SPF)級(jí)SD大鼠60只，雌雄各半，體重180～220 g；購(gòu)于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK(粵)2014-136。

1.2 藥物 山丹顆粒(規(guī)格：每袋5 g，1 g顆粒相當(dāng)于4.5 g生藥，深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院提供，批號(hào)：20170421)，口服，每次1袋，每日2次。硝酸異山梨酯片(規(guī)格：每片5 mg，北京恒生藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H11021331，批號(hào)：170803)，口服，每日1～2片，每日2次或3次。

1.3 試劑 鹽酸異丙腎上腺素(上海禾豐制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H31021344，批號(hào)：41170612)；戊巴比妥鈉(SIGMA，批號(hào)：127k1005)；肝素注射液(南京新百藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H32025851，批號(hào)：170316)；氯化鈉注射液(四川科倫藥業(yè)股份有限公司， 國(guó)藥準(zhǔn)字：H20056626，批號(hào)：1509130223)；大鼠肌鈣蛋白T(cTnT)檢測(cè)試劑盒(上?？道噬锟萍加邢薰?。

1.4 儀器 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)；多導(dǎo)生理記錄儀，澳大利亞AD公司生產(chǎn)；BY-R4000型低速醫(yī)用離心機(jī)(北京白洋醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn))；電熱恒溫培養(yǎng)箱(蘇州澳爾利烘箱電熱設(shè)備制造有限公司生產(chǎn))；ReadMax 1900型光吸收型全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(上海閃譜生物科技公司生產(chǎn))；Nikon130285型光電顯微鏡。

1.5 方法 將60只SPF級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為6組，分別為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、山丹顆粒低劑量組(生藥4.05g/kg)、山丹顆粒中劑量組(生藥8.10 g/kg)、山丹顆粒高劑量組(生藥16.20 g/kg)、硝酸異山梨酯片組(2.70 mg/kg)，每組10只。灌胃給藥，空白對(duì)照組、模型對(duì)照組給予等量蒸餾水，每日1次，連續(xù)給藥14 d，末次給藥60 min后，戊巴比妥鈉(55 mg/kg)腹腔注射麻醉后，分離頸總動(dòng)脈，近頭端處結(jié)扎，左心室插管測(cè)心室內(nèi)壓，分離右側(cè)股動(dòng)脈，近足端結(jié)扎，測(cè)量動(dòng)脈壓，Ⅱ?qū)碾妶D，以上連接于多道生理記錄儀。尾靜脈注射垂體后葉素注射液(0.4 U/kg)[1-3]造模，空白對(duì)照組注射等體積生理鹽水，描記造模前及造模后15 s、15 min、30 min的心電圖、股動(dòng)脈壓及左心室內(nèi)壓，監(jiān)測(cè)動(dòng)脈收縮壓(SAP)、左室收縮壓(LVSP)、左室舒張期末壓(LVEDP)。描記結(jié)束后大鼠腹主動(dòng)脈采血，測(cè)cTnT。采血后取心臟，用福爾馬林溶液固定，取左心室，用于蘇木素-伊紅(HE)染色，觀察心肌組織結(jié)構(gòu)的變化。

2 結(jié) 果

2.1 山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血ST段的影響 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠注射Pit后15 min、30 min ST段顯著升高(P<0.01)。與模型對(duì)照組比較，山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit后15 min、30 min ST段均降低(P<0.05)。山丹顆粒低劑量組與山丹顆粒中劑量組雖然呈劑量依賴性降低ST段，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見(jiàn)表1。

表1 山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血ST段的影響(±s) 單位：mV

①與空白對(duì)照組比較，P<0.01；與模型對(duì)照組比較，②P<0.05。

2.2 山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血T波的影響 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠注射Pit后15 min、30 min T波顯著降低(P<0.05)。與模型對(duì)照組比較，山丹顆粒中劑量組大鼠注射Pit后30 min T波顯著升高(P<0.05)；山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit后15 min、30 min T波顯著升高(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血T波的影響(±s) 單位：mV

①與空白對(duì)照組比較，P<0.05；與模型對(duì)照組比較，②P<0.05。

2.3 山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血?jiǎng)用}收縮壓的影響 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠注射Pit后15 s、15 min動(dòng)脈收縮壓均升高(P<0.05)。山丹顆粒各劑量組與模型對(duì)照組比較各時(shí)間點(diǎn)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表3。

表3 山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血?jiǎng)用}收縮壓的影響(±s) 單位：mmHg

注：1 mmHg=0.133 kPa；①與空白對(duì)照組比較，P<0.05。

2.4 山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血左室收縮壓的影響 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠注射Pit后15 s、15 min左室收縮壓顯著升高(P<0.05)。與模型對(duì)照組比較，山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit后15 min左室收縮壓顯著降低(P<0.05)。詳見(jiàn)表4。

表4 山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血左室收縮壓的影響(±s) 單位：mmHg

①與空白對(duì)照組比較，P<0.05；與模型對(duì)照組比較，②P<0.05。

2.5 山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血左室舒張期末壓的影響 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠注射Pit后15s、15min，左室舒張期末壓均顯著升高(P<0.01)。與模型對(duì)照組比較，山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit后15 s、15 min左室舒張期末壓顯著降低(P<0.05)；山丹顆粒中劑量組大鼠注射Pit 15 min左室舒張期末壓降低(P<0.05)。詳見(jiàn)表5。

表5 山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血左室舒張期末壓的影響(±s) 單位：mmHg

①與空白對(duì)照組比較，P<0.01；與模型對(duì)照組比較，②P<0.05。

2.6 山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血血清cTnT的影響 與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血清cTnT顯著升高(P<0.01)；與模型對(duì)照組比較，山丹顆粒高劑量組大鼠血清cTnT顯著降低(P<0.05)。詳見(jiàn)表6。

表6 山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血 血清cTnT的影響(±s) 單位：μg/L

①與空白對(duì)照組比較，P<0.01；與模型對(duì)照組比較，②P<0.05。

2.7 大鼠左心室心肌組織HE染色 由HE染色可見(jiàn)，空白對(duì)照組大鼠心肌無(wú)病變，細(xì)胞排列緊密、層次清晰，細(xì)胞核圓形或橢圓形，核仁清晰，心肌細(xì)胞胞漿、核染色均勻。模型對(duì)照組大鼠心肌左心室片狀透壁壞死，多處局灶性損害，肌纖維腫脹和斷裂，心肌細(xì)胞溶解消失，呈片狀淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。各給藥組心肌細(xì)胞出現(xiàn)局灶性的間質(zhì)反應(yīng)，肌纖維斷裂以及水腫，部分心肌細(xì)胞溶解消失，但與模型對(duì)照組病變程度相比均有所減輕。詳見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠左心室心肌組織HE染色圖(×200倍)

(A為空白對(duì)照組；B為模型對(duì)照組；C為山丹顆粒低劑量組；
D為山丹顆粒中劑量組；E為山丹顆粒高劑量組；F為硝酸異山梨酯組)

3 討 論

心肌缺血是指心臟的血液灌注減少，心臟的供氧失衡，心肌能量代謝失常，不能支持心臟正常功能的病理狀態(tài)。Pit作用于加壓素受體，可引起冠狀動(dòng)脈痙攣，心肌供血不足和心肌損傷，收縮全身小血管使心臟負(fù)荷加重，導(dǎo)致心肌缺血[4-6]。本研究中山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit 15 min后左室收縮壓顯著降低，可以降低心肌耗氧量。山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit 15 s、 15 min后左室舒張期末壓顯著降低，說(shuō)明山丹顆?？梢越档托呐K后負(fù)荷，進(jìn)而降低心肌耗氧量，緩解由Pit造成的心肌缺血、缺氧。

ST段反映心室各部處于去極化狀態(tài)，故無(wú)電位差。正常接近于等電位線。當(dāng)某部位的心肌出現(xiàn)缺血時(shí)，心室在除極后仍存在電位差，表現(xiàn)為ST段發(fā)生偏移[7-8]。山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit 15min、30 min后ST段升高幅度顯著降低。T波位于ST段之后，是心室復(fù)極所產(chǎn)生的，從基線開(kāi)始緩慢上升后較快下降。T波方向和QRS波群的主波方向一致。T波低平或倒置，常見(jiàn)于心肌缺血[9-10]。山丹顆粒中劑量組大鼠注射Pit 后30 min T波高度顯著升高，山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit 后15 min和30 min T波高度顯著升高。從改變ST段升高幅度和T波降低幅度可以得出山丹顆?？蓽p輕Pit造成的心肌缺血程度。肌鈣蛋白(Tn)是肌肉組織收縮的調(diào)節(jié)蛋白，cTnT是心肌細(xì)胞特有的抗原，當(dāng)心肌細(xì)胞受到損傷時(shí)cTnT從心肌纖維上降解下來(lái)[11]。血清中cTnT升高表明心肌細(xì)胞受損，其特異性與敏感性均高于常用的心肌酶譜[12]。山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit后血清cTnT水平顯著降低，提示山丹顆粒具有減輕由Pit誘發(fā)心肌缺血而引起的心肌細(xì)胞損傷的作用。

山丹顆粒對(duì)Pit致大鼠急性心肌缺血模型具有保護(hù)作用，以上藥效學(xué)結(jié)果為山丹顆粒在臨床治療胸痹心痛提供了試驗(yàn)依據(jù)。