急性冠脈綜合征病人載脂蛋白E的基因多態性及其與冠狀動脈病變嚴重程度的關系

于 淼，李 潞，趙紅麗，高 璐

根據《中國心血管病報告2016》指出，目前心血管病死亡占城鄉居民總死亡原因的首位，隨著社會經濟的發展，心血管病危險因素流行趨勢明顯，導致心血管病發病人數持續增加，心血管病及疾病負擔日漸加重，已成為重大的公共衛生問題，其防治工作刻不容緩。目前我國現患心血管病人為2.9億人，其中冠心病(coronary heart disease，CHD)高達1 100萬人，急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome，ACS)作為冠心病較為嚴重的類型，更是嚴重威脅著人類的健康。冠心病是一種多種內在遺傳因子和外在環境相互作用導致的疾病[1-2]，其中血脂異常是冠心病的主要危險因素。由于載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)的基因多態性與血脂之間、血脂異常與冠心病發病之間的密切聯系，故ApoE的基因多態性與冠心病之間的內在聯系成為人們關注的焦點[3-4]。目前ApoE的基因多態性研究多集中在對血脂水平、降脂療效、藥物副作用等方面，對冠心病的嚴重類型ACS研究較少。本研究旨在探討ACS病人ApoE的基因多態性及其與冠狀動脈病變嚴重程度的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本研究選取2017年9月—2018年9月就診于沈陽醫學院附屬第二醫院急診或門診并且收住院的ACS病人，且這些病人均急診或擇期行冠狀動脈造影術，冠狀動脈造影結果顯示至少1支心外膜冠狀動脈或其主要分支狹窄超過50%，并根據病變嚴重程度行單純冠狀動脈造影術、冠狀動脈內球囊擴張術及(或)支架植入術、冠狀動脈搭橋術。共收集ACS病人210例作為ACS組，其中男120例，女90例；年齡(59.6±13.2)歲。同時收集體檢中心的健康體檢人群110名作為對照組，此人群無明顯胸悶胸痛、心電圖無明顯ST-T改變等冠心病的臨床表現，其中男60名，女50名；年齡(57.6±10.2)歲。

1.2 排除標準 所有研究對象均排除家族性高膽固醇血癥、甲狀腺功能異常、肝腎功能異常、感染性疾病、惡性腫瘤以及免疫系統疾病。研究個體之間無血緣關系。

1.3 儀器和試劑 ApoE基因型檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)購自武漢友芝友醫療科技有限公司；血液基因組DNA提取盒購自天根生化科技(北京)有限公司；生化血檢測試劑盒購自沈陽市威澤醫療用品經銷部；全自動醫用PCR分析系統為上海宏石醫療科技有限公司，型號規格：SLAN-96P。ApoE基因型檢測及血液基因組DNA提取由沈陽市心血管疾病實驗室完成，病人其他生化血檢測由沈陽醫學院附屬第二醫院檢驗科完成。

1.4 方法

1.4.1 ApoE基因多態性檢測方法 采用PCR-熒光探針法，通過試劑準備區、樣本準備區及核酸擴增區，利用儀器對PCR過程中相應通道信號強度進行實時監測和輸出，完成ACS組及對照組ApoE基因型檢測。

1.4.2 臨床資料采集及血生化指標檢測 病人入院后立即進行病史采集，包括一般情況、現病史、既往史、家族史、吸煙史、飲酒史及體格檢查[包括體質指數(BMI)]，空腹8 h后于次日抽取靜脈血，檢測肝腎功能、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。

1.4.3 Syntax評分 所有病人均于冠狀脈造影后進行Syntax評分，根據11項冠狀動脈造影病變解剖特點定量評價病變復雜程度的危險評分方法，用于評價病人冠狀動脈病變程度。Syntax評分中冠狀動脈造影因素包括冠狀動脈分布類型、狹窄部位、是否完全閉塞、三分叉病變、雙分支病變、主動脈相關開口病變、嚴重扭曲、病變長度>20 mm、嚴重鈣化、血栓、彌漫病變/小血管病變。Syntax評分的計算：冠狀動脈直徑≥1.5 mm、冠狀動脈狹窄≥50%的冠心病病人通過計算機軟件程序計算Syntax評分。

2 結 果

2.1 ACS組與對照組ApoE基因型及等位基因頻率分布 本研究檢測到5種ApoE基因型，分別是E3/3、E3/2、E4/3、E4/4及E4/2，未發現E2/2。ACS病人與對照組人群，ApoE基因中等位基因E3頻率均最高。本研究入選的210例ACS病人及對照組110名健康體檢者的基因型分布見表1。在等位基因分布方面，ACS組E4等位基因頻率高于對照組(17.6%與12.3%，P<0.05)，ACS組E2、E3等位基因頻率低于對照組，但差異無統計學意義(P>0.05)；在ApoE基因型分布方面：由于E4/4、E4/2人數較少，未進行統計分析，ACS組E3/3頻率低于對照組(57.6%與64.5%，P<0.05)。其他基因型比較差異均無統計學意義(P>0.05)。

表1 ACS組與對照組ApoE基因型及等位基因分布情況

與對照組比較，①P<0.05。

2.2 ACS組不同ApoE異構體病人Syntax評分比較 ACS組根據不同ApoE異構體進行分組，3組病人冠狀動脈Syntax評分所占比例見圖1。縱坐標指各組Syntax評分所占比例，ApoE4冠狀動脈Syntax>32分的比例明顯高于ApoE2、ApoE3(32%與12%、14%，P<0.05)，ApoE4冠狀動脈Syntax<22分的比例明顯低于ApoE2、ApoE3(23%與48%、39%，P<0.05)，其他各組比較差異無統計學意義(P均>0.05)。

與ApoE4組比較，＊P<0.05。

3 討 論

ApoE基因位于19號染色體長臂，屬于常染色體顯性遺傳基因，具有顯著遺傳多態性[5]，含有3種等位基因(E2、E3、E4)，產生6種基因型：3種純合子(E2/2、E3/3、E4/4)和3種雜合子(E2/3、E2/4、E3/4)，編碼3種異構體ApoE2(E2/2和E2/3)、ApoE3(E3/3)、ApoE4(E3/4和E4/4)。大量研究證實，ApoE基因可作為一種遺傳因子參與動脈硬化的發生與發展[6]，并且指出E4等位基因為動脈硬化發展的獨立危險因素，而E2等位基因為動脈硬化發揮保護作用。在ApoE基因多態性與心肌梗死相關性的研究中，不同試驗得出的結果不盡相同。一些報道提示E4是急性心肌梗死發病的危險因素[7]，但也有研究指出，ApoE基因多態性與急性心肌梗死的發病風險有很小的相關性。ApoE基因多態性與冠狀動脈血管狹窄程度相關性報道較少，且結果不盡相同[8]。有研究結果顯示，冠心病病人E4等位基因攜帶者其冠狀動脈病變明顯加重，但也有研究持相反觀點，提出ApoE基因多態性與冠心病冠狀動脈血管嚴重程度無關，與冠狀動脈受累數目亦無關。故目前隨著ApoE基因多態性研究的深入，其與冠心病、高血壓、心肌梗死、心力衰竭等的關系研究層出不窮，但因心血管疾病發病機制的多元性及復雜性[9]，故研究得出的結論不盡相同。本研究入選ACS病人為研究對象，進一步與對照組比較ApoE的基因多態性分布情況及與冠狀動脈病變嚴重程度的關系，研究結

果顯示，ACS組與對照組ApoE基因中等位基因E3頻率最高，這與以往的研究結果吻合，ACS組E4等位基因頻率高于對照組(17.6%與12.3%)，ACS組基因型E3/3頻率低于對照組(57.6%與64.5%)。ACS組根據不同ApoE異構體進行分組，ApoE4冠狀動脈Syntax評分>32分的比例明顯高于ApoE2、ApoE3(32%與12%、14%，P<0.05)，ApoE4冠狀動脈Syntax評分<22分的比例明顯低于ApoE2、ApoE3(23%與48%、39%，P<0.05)，其他各組比較差異無統計學意義(P>0.05)，可見含有ApoE4異構體的ACS病人冠狀動脈病變嚴重者所占比例較大，3種異構體中，ApoE2病人冠狀動脈病變相對較輕。 基因多態性與臨床疾病相關性是精準醫學的一部分。精準醫學是在大數據分析時代背景下，進一步升華個體化醫學的精準性。ApoE的基因多態性相關研究依托于沈陽市心血管重點實驗室，本實驗室已陸續開展了不同人群的ApoE的基因多態性的研究及與藥物療效及副作用關系等的研究，其他基因型研究亦在進行，旨在通過精準醫學與臨床醫學不斷聯系起來，進一步指導復雜疾病細致分組診療、藥物療效及副作用個體差異等工作。

本試驗入選病例較少，相關病例還在持續收集中，明確的結論還需大樣本研究進一步證實。