MTHFR C677T基因多態(tài)性對(duì)H型高血壓患者葉酸降低同型半胱氨酸治療的影響

張?jiān)骑w，徐炳欣，趙艷，吳帆，楊瓊瓊

(許昌市中心醫(yī)院，河南 許昌 461000)

H型高血壓是指合并高同型半胱氨酸血癥(hyperhomocysteinemia，HHcy)的原發(fā)性高血壓，約占我國(guó)成年高血壓患者的75%[1]。高血壓和HHcy均為心腦血管病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[2]，中國(guó)人群高血壓與HHcy同時(shí)存在，將使心血管事件發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)比單純高血壓病患者高5倍[3]。既往研究顯示，MTHFRC677T基因多態(tài)性與HHcy發(fā)生之間的關(guān)系密切[4]。然而，MTHFRC677T基因多態(tài)性是否會(huì)影響H型高血壓患者應(yīng)用葉酸降低同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)的治療效果，目前尚缺少臨床研究證據(jù)，且該基因多態(tài)性在不同地區(qū)人群中的分布有所不同[5]。基于此，本研究檢測(cè)河南中部地區(qū)H型高血壓患者M(jìn)THFRC677T的基因多態(tài)性，探討MTHFRC677T基因多態(tài)性對(duì)葉酸降低Hcy治療的影響，以期為當(dāng)?shù)馗哐獕旱姆乐渭敖档虷cy治療工作提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2018年6—12月在許昌市中心醫(yī)院心血管內(nèi)科就診的260例河南中部漢族H型高血壓患者作為研究對(duì)象。年齡28～51歲，平均(38.4±7.5)歲，男152例，女108例。納入標(biāo)準(zhǔn)：H型高血壓患者，其臨床診斷符合中國(guó)高血壓防治指南(2018年修訂版)[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)入院就診前1個(gè)月內(nèi)曾規(guī)律服用葉酸及其他維生素類藥物；(2)嚴(yán)重肝腎功能不全者；(3)合并惡性腫瘤患者；(4)妊娠期婦女。依據(jù)MTHFRC677T基因檢測(cè)結(jié)果，將患者分為A、B、C 3組，基因類型分別為CC、CT、TT型。記錄3組患者年齡、性別、血漿Hcy、合并疾病等臨床資料。該研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)并與患者簽署知情同意書。

1.2 治療方法 所有患者入組后接受常規(guī)降血壓治療。降低血漿Hcy治療方案：口服給予葉酸片(常州制藥廠有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H32023302)，每次5 mg，每日1次。所有患者隨訪6個(gè)月。

1.3 檢測(cè)方法 采用熒光染色原位雜交技術(shù)測(cè)定MTHFRC677T基因多態(tài)性。用1X NH4Cl 預(yù)處理液處理血樣，離心、制備白細(xì)胞懸液、加入MTHFRC677T基因(rs1801133)耀金分試劑(北京華夏時(shí)代基因科技發(fā)展有限公司)，將樣本置入TL998A 熒光檢測(cè)儀(西安天隆科技有限公司生產(chǎn))，其結(jié)果由天隆700軟件分析和自動(dòng)判讀，給出MTHFRC677T基因SNP 信息。采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血漿Hcy濃度，Hcy檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美康生物科技股份有限公司(產(chǎn)品編號(hào)H422T2)。以上步驟嚴(yán)格按試劑盒和檢驗(yàn)儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。

1.4 觀察指標(biāo) 記錄3組服用葉酸前后血漿Hcy檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算3組治療6個(gè)月后降低血漿Hcy治療有效率，本研究以血漿Hcy水平<15 μmol·L-1定義為降低Hcy治療有效[7]。觀察3組患者飲酒史、熬夜史、吸煙史對(duì)降低血漿Hcy治療的影響，其中患者住院前3個(gè)月內(nèi)平均每周飲酒次數(shù)>2次定義為有飲酒史，平均每周4 d及以上晚上10點(diǎn)以后入眠定義為有熬夜史，平均每日吸煙>5支定義為有吸煙史，定義標(biāo)準(zhǔn)均為本研究需要自行制定。

2 結(jié)果

2.1 3組一般資料比較 3組患者年齡、性別比例、肝功能、腎功能、糖尿病和高脂血癥比例差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見表1。

表1 3組基線資料比較

2.2MTHFRC677T等位基因的Hardy-Weinberg遺傳平衡 納入研究的260例患者，MTHFRC677T基因CC、CT、TT的例數(shù)及比例分別為53例(20.4%)、119例(45.8%)和88例(33.8%)，各基因類型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡(χ2=0.510，P=0.775)，樣本具有群體代表性。

2.3 3組治療前后血漿Hcy水平比較 重復(fù)測(cè)量方差分析顯示，治療前3組血漿Hcy水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，治療后，A組血漿Hcy水平低于B組(t=-4.343，P<0.001)和C組(t=-5.679，P<0.001)。見表2。MTHFRC677T基因類型(CC、CT、TT)對(duì)葉酸降低Hcy治療有影響(F=4.451，P=0.017)；3組血漿Hcy水平有隨治療時(shí)間變化的趨勢(shì)(F=1 129.653，P<0.001)，各組治療后血漿Hcy水平均低于治療前；MTHFRC677T基因類型(CC、CT、TT)與治療時(shí)間有交互作用(F=5.132，P=0.006)，3組血漿Hcy水平隨時(shí)間的變化趨勢(shì)不同，見圖1。

表2 3組治療前后血漿Hcy水平

注：與B、C組比較，aP<0.001；Hcy—同型半胱氨酸。

a、b為字母標(biāo)記法的組內(nèi)時(shí)間點(diǎn)比較，均P<0.05；*#為與A組治療后比較，均P<0.05；Hcy—同型半胱氨酸。

圖1 3組治療前后血漿Hcy水平

2.4 3組治療有效率比較 治療6個(gè)月后，A組血漿Hcy水平<15 μmol·L-1的例數(shù)為43例，有效率為81.1%，B組和C組分別為76(63.9%)和52(59.1%)。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，3組治療有效率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.491，P=0.024)；經(jīng)卡方分割法兩兩比較，A組治療有效率高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.311，P=0.007)；而A組和B組比較(χ2=5.128，P=0.024)、B組和C組比較(χ2=0.489，P=0.485)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.5 降低血漿Hcy治療效果的影響因素分析 以治療是否有效為因變量，以年齡、性別、吸煙史、熬夜史、飲酒史、MTHFRC677T基因類型(CC、CT、TT)為協(xié)變量行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，與TT型患者相比，CC患者應(yīng)用葉酸降低血漿Hcy治療效果是TT型患者的2.977倍，有熬夜史患者降低血漿Hcy治療有效的可能是無(wú)熬夜史患者的44.3%，有飲酒史患者降低血漿Hcy治療有效的可能是無(wú)飲酒史患者的39.6%。見表3。

表3 降低血漿Hcy治療是否有效影響因素的多因素Logistic回歸分析

注：Hcy—同型半胱氨酸。

3 討論

葉酸是臨床上常用于降低Hcy治療的藥物[8]，作用機(jī)制在于葉酸體內(nèi)代謝產(chǎn)生一碳單位參與甲硫氨酸循環(huán)，而甲硫氨酸循環(huán)是Hcy代謝的重要途徑之一[9]。MTHFR是影響葉酸在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為一碳單位的關(guān)鍵酶，該酶活性受MTHFR基因多態(tài)性的影響。編碼MTHFR的基因存在多種突變，本研究檢測(cè)MTHFRC677T位點(diǎn)，是因?yàn)榧韧芯匡@示該位點(diǎn)突變對(duì)漢族人群影響最大[10]。

本研究中，經(jīng)過(guò)6個(gè)月的治療，3組治療后血漿Hcy水平均顯著低于治療前，這表明葉酸可有效降低H型高血壓患者的Hcy，與田京輝等[11]的研究結(jié)果相一致。重復(fù)測(cè)量方差分析顯示，MTHFRC677T基因類型對(duì)患者降低Hcy有影響，且3組血漿Hcy水平隨時(shí)間的變化趨勢(shì)不同，其中A組患者治療后血漿Hcy水平明顯低于B組和C組。進(jìn)一步行多因素Logistic回歸顯示，CC患者應(yīng)用葉酸降低血漿Hcy治療效果是TT型患者的2.977倍。這表明，CC型患者應(yīng)用葉酸降低血漿Hcy治療效果較好?？赡茉蛑饕紤]與影響血漿Hcy水平的因素相關(guān)。有研究指出血漿Hcy水平升高是葉酸攝入量與葉酸代謝酶活性等因素綜合作用的結(jié)果[12]。本研究中A組患者葉酸代謝酶活性正常，其血漿Hcy水平升高的主要影響因素可能是日常攝入葉酸劑量偏低；而B組和C組患者血漿Hcy水平升高可能受日常攝入葉酸劑量不足與MTHFR酶活性偏低綜合因素的影響。

華文娟等[13]分析了影響體檢人群血清Hcy水平升高的因素，指出吸煙、飲酒、熬夜等不良生活習(xí)慣均會(huì)影響血清Hcy水平。本研究考察了H型高血壓患者住院前合并的吸煙史、飲酒史、熬夜史對(duì)降低Hcy治療的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飲酒史、熬夜史均顯著影響患者降低血漿Hcy治療效果，而吸煙史對(duì)降低血漿Hcy治療的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。飲酒影響降低血漿Hcy治療效果的具體作用機(jī)制目前尚不清楚，考慮可能與飲酒導(dǎo)致的交感和迷走神經(jīng)的功能平衡失調(diào)有關(guān)[14]。熬夜影響降低血漿Hcy的治療，原因可能與患者晝夜節(jié)律的改變有關(guān)，有研究已證實(shí)晝夜節(jié)律改變是導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂的重要因素[15]。因此，H型高血壓患者在降低Hcy治療時(shí)應(yīng)戒酒并改變熬夜習(xí)慣。

葉酸降低Hcy治療有很好的安全性[16]，因此本研究中沒(méi)有觀察與葉酸相關(guān)的藥物不良反應(yīng)發(fā)生情況。目前有關(guān)MTHFRC677T基因多態(tài)性對(duì)H型高血壓患者影響的臨床研究，針對(duì)亞洲人群的相對(duì)較少[17]。因此本研究結(jié)論對(duì)于指導(dǎo)中國(guó)漢族H型高血壓患者降低Hcy治療有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

本研究也存在一些局限性。首先是沒(méi)有考察降低Hcy治療對(duì)H型高血壓患者臨床癥狀改善的影響，這在以后有待進(jìn)一步研究；其次是單中心研究納入樣本量較少，研究時(shí)間較短，因此本研究的研究結(jié)論尚需多中心更大樣本量的研究予以證實(shí)。