HCG日血清雌、孕激素水平對內膜整合素αVβ3和LIF表達及凍融胚胎移植結局的影響

許偉標 蔡喆

【摘要】 目的 探討人絨毛膜促性腺激素（HCG）日血清雌、孕激素水平對內膜整合素αVβ3、白血病抑制因子（LIF）表達及凍融胚胎移植（FET）結局的影響。方法 122例實施128個周期體外受精（IVF）助孕的患者， 按HCG日血清雌二醇（E2）及孕酮（P）水平分為A組（E2<5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 33個周期， 31例）、B組（E2≥5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 36個周期， 33例）、C組（E2<5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml，?28個周期， 28例）、D組（E2≥5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 31個周期， 30例）。所有患者均進行超排卵方案及凍融胚胎移植。取卵后7 d左右吸取內膜組織， 比較四組HCG日血清E2、P、LH水平及凍融胚胎移植臨床結局、種植窗期內膜整合素αVβ3和LIF表達情況。結果 B組HCG日血清E2為（7528.2±239.0）pg/ml， D組HCG日血清E2為（7895.9±282.4）pg/ml， 均高于A組的（1739.1±162.9）pg/ml， 差異有統計學意義（P<0.05）;C組HCG日血清P為（1.4±0.6）ng/ml， D組HCG日血清P為（1.2±0.4）ng/ml，?均高A組的（0.6±0.2）ng/ml， 差異有統計學意義（P<0.05）。結論 HCG日血清雌、孕激素水平不影響內膜整合素αVβ3和LIF表達及凍融胚胎移植周期的結局。

【關鍵詞】 雌激素;孕激素;整合素αVβ3;白血病抑制因子

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.035

人類輔助生殖技術（assisted reproductive technology， ART）發展迅速， 體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization?and embryo transfer， IVF-ET）獲得胚胎的數量及質量也不斷提高， 但對于母體與胚胎間的聯系了解不多。IVF助孕中， 激素生理平衡的改變會使內膜相關因子表達產生變化， 這種變化可能影響凍融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer， FET）周期結局。整合素是存在于細胞表面的一種跨膜糖蛋白， 在內膜中會發生周期性改變。研究發現[1， 2]， 整合素αVβ3表達于黃體期， 持續至妊娠期， 與種植窗一致， 是內膜容受性標志物之一。白血病抑制因子（leuakemia inhibitory factor， LIF）是一種多功能糖蛋白， 黃體中期表達最高， 即種植窗期表達最高， 增生期極低水平表達， 是內膜容受性標記物。本研究探討HCG日血清雌、孕激素水平對種植窗期內膜整合素αVβ3和LIF表達及凍融胚胎移植結局的影響。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2017年1～12月在本中心實施128個周期IVF助孕的122例患者， 依據Wu等[3]的研究， ROC曲線分析HCG日血清E2、P水平對IVF結局的影響， 確定高P界值為1.05 ng/ml，?高E2界值為5210 ng/ml。根據HCG日血清E2、P水平分為A組（E2<5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 33個周期，?31例）、B組（E2≥5210 pg/ml、P<1.05 ng/ml， 36個周期， 33例）、C組（E2<5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 28個周期， 28例）、D組（E2≥5210 pg/ml、P≥1.05 ng/ml， 31個周期， 30例）。納入標準：①年齡<40歲;②卵巢儲備功能正常;③獲得>4個卵子;④男方精液常規檢查正常。四組患者一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05）， 具有可比性。見表1。

1. 2 方法

1. 2. 1 超排卵方案 采用黃體期長方案， 長效促性腺激素釋放激素激動劑（GnRH-a）降調節， 14～20 d后給予卵泡刺激素（FSH）超排卵治療， 卵泡最大直徑≥18 mm時注射HCG， 36～38 h后超聲指導下取卵。受精后18～20 h觀察受精情況， 胚胎培養3 d， 冷凍所有胚胎。

1. 2. 2 凍融胚胎移植 月經第2～4天， 陰超記錄子宮、內膜、卵巢及卵泡情況， 若未見優勢卵泡且內膜≤5 mm予戊酸雌二醇片（商品名：補佳樂）4 mg， b.i.d.， 12～14 d后抽血查促黃體生成素（LH）、E2及P， 如有卵泡發育或內膜<8 mm則取消周期， 如內膜厚度≥8 mm， 當日給予黃體酮60 mg肌內注射， 注射第4天行凍融胚胎移植。移植后第12～14天測定血清HCG。移植后第28～30天陰超檢查見宮腔內有孕囊者為臨床妊娠。

1. 3 觀察指標 比較四組HCG日血清E2、P、LH水平及凍融胚胎移植臨床結局、種植窗期內膜整合素αVβ3和LIF表達情況。HCG日當天抽取空腹肘靜脈血3 ml， 分血清， -20℃保存待測， 檢測E2、P及LH水平。在卵子獲取后的7～8 d吸取子宮內膜組織。獲取子宮內膜前用生理鹽水沖洗陰道、宮頸外口， 用子宮內膜取樣器Pipelle管于子宮體中上段吸取少許內膜組織， 檢測LIF、整合素αVβ3。凍融胚胎移植臨床結局包括可移植胚胎數、優質胚胎率、種植率、臨床妊娠率、流產率。

1. 4 統計學方法 采用SPSS22.0統計學軟件進行數據統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗;計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 四組患者HCG日血清E2、P及LH水平比較 B組HCG日血清E2為（7528.2±239.0）pg/ml， D組HCG日血清E2為（7895.9±282.4）pg/ml， 均高于A組的（1739.1±162.9）pg/ml， 差異有統計學意義（P<0.05）;C組HCG日血清P為（1.4±0.6）ng/ml， D組HCG日血清P為（1.2±0.4）ng/ml， 均高A組的（0.6±0.2）ng/ml， 差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2. 2 四組患者凍融胚胎移植臨床結局比較 四組可移植胚胎數、優質胚胎率、種植率、臨床妊娠率、流產率比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。見表3。

2. 3 四組種植窗期內膜整合素αVβ3和LIF表達的比較 四組內膜整合素αVβ3和LIF表達情況比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。見表4。

3 討論

子宮內膜在組織學及分子學上周期性改變， 內膜的容受性也發生改變[4]。在種植窗期， 雌、孕激素調節了子宮內膜中因子的表達， 這些內膜因子可能作為胚胎著床的介質影響胚胎著床。大量的研究發現[5-7]， 子宮內膜種植窗期一些因子的表達都可以反映內膜容受性。

3. 1 整合素αVβ3和LIF 在內膜中的表達 子宮內膜上皮處于接受狀態時， 內膜上皮上的粘附分子表達， 從而促使胚胎與之發生附著反應。整合素作為粘附因子的一員， 是細胞膜上以α、β異二聚體形式存在的糖蛋白分子， 是多種細胞外基質分子的受體， 其介導細胞間的信號傳導， 在內膜的表達中存在多種亞型， 只有αVβ3開始表達于月經的黃體中期， 維持到妊娠期， 是內膜植入窗啟動的標示[8]。

LIF可以調節胚胎滋養層細胞功能和血管形成， 多種動物的內膜上發現有LIF-mRNA和其蛋白的表達。在增殖期， LIF-mRNA和蛋白很難測到， 但在分泌期， 兩者的水平明顯升高， 而此時段是胚胎種植時間， 因此， LIF與內膜的容受性有關[9， 10]。Stewart等[11]通過研究發現， 老鼠的LIF基因被敲除后， 卵子受精后可以形成囊胚， 但不能著床， 而在該小鼠子宮腔內補充LIF后， 囊胚的種植率有明顯提高， 這表明LIF可以作為內膜容受性的標志物。

3. 2 E2、P水平對整合素αVβ3和LIF表達及凍融胚胎移植結局的影響 超排卵中孕激素升高會使孕激素受體（PR）的表達下降， 同時會促進內膜的整合素αVβ3表達提早、增強。在一項對黃素化卵泡的研究中發現， 正常排卵組的P水平更高， 整合素αVβ3的表達增強， 表明植入窗推遲及內膜容受性下降， 胚胎植入率下降[12]。林娜等[13]比較高雌孕激素水平對種植期整合素αVβ3表達的影響， 結果顯示高E2組、高P組、高E2并高P組整合素αVβ3與對照組比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。本研究中對照組為低E2并低P組， 結果顯示四個組中， 內膜整合素αvβ3的表達也沒有差異， 這可能與P水平設定的界值不同有關， 使得研究的結果不一致。

相關研究[5]顯示， 種植窗期血清P水平在妊娠組高于非妊娠組， LIF的表達也在妊娠組較高， 且LIF的表達與血清P水平相關， 提示種植窗內膜LIF的表達受P調節， 而E2的水平則與LIF的表達沒有相關性。也有研究[6]表明， 切除卵巢后， 添加外源性雌激素并不能誘導LIF蛋白的表達， 但是孕激素則可誘導LIF的表達增加。E2上升可使植入期時間縮短， 排卵后E2的變化也使LIF發生變化， 兩者關系密切。但是， 在本研究中， 無論是P升高組， 還是E2升高組， LIF的表達都沒有增加， 所以LIF的表達除了與P、E2的水平相關外， 還可能與E2/P的比例有關， 兩者維持在適當比例， LIF的表達才可能增強。

本研究結果顯示， 四組可移植胚胎數、優質胚胎率、種植率、臨床妊娠率、流產率比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。四組膜整合素αVβ3和LIF表達情況比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。

綜上所述， HCG日血清雌、孕激素水平不影響內膜整合素αVβ3和LIF的表達及凍融胚胎移植周期的結局。雌孕激素對子宮內膜容受性的影響是多方面的， 而子宮內膜容受性的標志物也不僅僅只有整合素αVβ3和LIF， 本研究只觀察αVβ3和LIF有其局限性， 需要臨床擴大樣本量來進一步研究， 且需要用更多的具有代表性的內膜容受性標志物來衡量， 才能有更準確的結果。

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[收稿日期：2020-02-17]