胃癌組織中Beclin1和LC3的表達水平分析

王穎

【摘要】 目的? ?分析胃癌組織中Beclin1和微管相關蛋白輕鏈3（LC3）的表達水平， 以期為臨床相關工作或研究提供參考。方法 選取75例胃癌組織芯片HStmA150CS02標本為研究對象， 對所有標本實施染色處理。比較胃癌組織與癌旁組織中Beclin1、LC3表達水平， 分析胃癌患者的基本信息和病理特征以及患者病理特征與Beclin1、LC3表達水平之間的關系。結果 胃癌組織中Beclin1、LC3的表達陽性率分別為30.67%、34.67%， 均明顯低于癌旁組織的89.33%、76.00%， 差異具有統計學意義（P<0.05）。Beclin1、LC3表達陽性患者與Beclin1、LC3陰性表達患者的年齡、性別及腫瘤位置比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。Ⅰ～Ⅱ期患者Beclin1、LC3表達陽性率分別為82.61%、80.77%， 均明顯高于Ⅲ～Ⅳ期的17.39%、19.23%， 差異具有統計學意義（P<0.05）;漿膜層內患者Beclin1、LC3表達陽性率分別為86.96%、84.62%， 均明顯高于漿膜層外患者的13.04%、15.38%， 差異具有統計學意義（P<0.05）;淋巴結未轉移患者Beclin1、LC3表達陽性率分別為86.96%、84.62%， 均明顯高于淋巴結轉移患者的13.04%、15.38%， 差異具有統計學意義（P<0.05）;Ⅲ級分化患者Beclin1、LC3表達陽性率分別為8.70%、11.54%， 均明顯低于Ⅰ～Ⅱ級分化患者的91.30%、88.46%， 差異具有統計學意義（P<0.05）。結論 Beclin1、LC3在胃癌組織中的表達陽性率相對較低， 且隨著患者病情的發展， 該兩項指標的表達陽性率會隨之降低。

【關鍵詞】 Beclin1;胃癌;微管相關蛋白輕鏈3;自噬;凋亡

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.087

胃癌是指起源于胃黏膜上皮的一種惡性腫瘤， 在國內各地惡性腫瘤發病率中穩居首位， 該病的發生有顯著地域差異性， 多見于東部沿海與西北地區， 高發于>50歲人群， 男性多于女性， 兩者發病率的比例約為2∶1[1]。近年來， 由于飲食結構與生活方式的變化， 該病發生率有所上升， 且呈年輕化發展趨勢， 當前， 臨床上尚未找到特效治療方法。Beclin1、LC3皆是形成自噬體的重要基因， Beclin1屬于自噬相關基因， 其與Bcl-2基因共同調控自噬， 在自噬溶酶體降解期間可發揮抗腫瘤效果;LC3為一種自噬標志基因， 也是診斷自噬特異的主要指標之一。為分析Beclin1、LC3于胃癌組織中的表達水平， 現對75例胃癌患者展開研討， 詳細報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取上海芯超生物科技有限公司提供的75例胃癌組織芯片HStmA150CS02標本， 均為手術過程中獲取， 且經病理檢查明確判斷。

1. 2 方法 對胃癌芯片進行常規脫蠟， 之后， 利用檸檬酸緩沖液實施抗原修復， 添加3%雙氧水去離子水， 于37℃下孵育18 min。第1抗體（兔抗人Beclin1與LC3多克隆抗體）稀釋至1∶200， 在4℃下過夜， 之后添加相應的試劑于37℃下進行孵育， 時間為20 min。在第2抗（羊抗兔抗體）中添加過氧化物酶進行標記， 然后， 實施顯色， 利用蘇木精實施重新染色;脫水后， 應用中性樹膠進行封片。

1. 3 觀察指標 ①觀察比較胃癌組織與癌旁組織中Beclin1、LC3表達陽性情況。②觀察患者基本信息（年齡、性別及腫瘤位置）分布與Beclin1、LC3表達水平。③對芯片實施免疫組化分析， 所用產品編號為HStmA150CS02（上海芯超生物科技有限公司）， 點陣直徑為1.5 mm， 胃腺癌75例——癌75點/癌旁75點， 并分析75例患者病理特征（病理分級、浸潤深度、淋巴結有無轉移、分化程度）與Beclin1、LC3表達水平之間的關系。

1. 4 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件對數據進行統計分析。計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 胃癌組織與癌旁組織中Beclin1、LC3表達陽性情況對比 胃癌組織中Beclin1、LC3表達陽性率均低于癌旁組織， 差異具有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 75例患者基本信息分布與Beclin1、LC3表達水平分析 Beclin1、LC3表達陽性患者與Beclin1、LC3表達陰性患者的年齡、性別及腫瘤位置比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

2. 3 75例患者病理特征與Beclin1、LC3表達水平之間的關系分析 Ⅰ～Ⅱ期患者Beclin1、LC3表達陽性率均顯著高于Ⅲ～Ⅳ期， 漿膜層內患者Beclin1、LC3表達陽性率均明顯高于漿膜層外患者， 淋巴結未轉移患者Beclin1、LC3表達陽性率均高于淋巴結轉移患者， Ⅲ級分化患者Beclin1、LC3表達陽性率均低于Ⅰ～Ⅱ級分化患者， 差異具有統計學意義（P<0.05）。見表3。

3 討論

自噬在機體的病理與生理過程中均可見到， 其主要是借助溶酶體來降解自身受損的大分子物質與細胞器， 為真核細胞獨有的生命特征[2]。自噬除了參與細胞死亡、分化成熟、生長發育的調控外， 還與腫瘤的出現、演變存在密切的關系。

Beclin1基因又稱為BECNI基因， 為自噬調控因子， 也被臨床上作為腫瘤相關因子。從腫瘤方面， Beclin1參與的自噬反應有以下幾種機理：①清除具有較高遺傳毒性、促使細胞非凋亡方式死亡、合成活性氧的細胞器;②降解必要的、特定的長壽蛋白與細胞器， 調控細胞生長。由此可推斷出， Beclin1可能具有清除腫瘤細胞、阻止腫瘤發展與出現的可能性。現有研究證實[3]， Beclin1于同一或不同腫瘤的不同時期發揮的作用也不盡相同。于前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌細胞內， Beclin1可出現缺失現象。經動物實驗表明， 敲掉Beclin1基因的小鼠， 其體內不同癌癥的發生率顯著大于正常小鼠， 可見Beclin1與癌癥的發生存在明顯的關聯性， 可能為癌癥發生的早期事件[4]。在本研究中， 胃癌組織內的Beclin1表達陽性率顯著低于胃癌旁組織（P<0.05）， 這說明癌癥的發生與Beclin1表達情況存在密切關系。

LC3為哺乳動物的一個ATG同源蛋白， 在細胞中主要分為LC3-Ⅰ與LC3-Ⅱ2種剪切方式。當出現自噬時， LC3-Ⅰ會在泛素樣作用下產生水解衍生物， 即LC3-Ⅱ[5]。LC3-Ⅰ主要分布于細胞質中， LC3-Ⅱ主要是分布于自噬體膜上。當營養不足時， LC3基因會隨之激活， 轉錄出充足的LC3前體。于自噬體膜產生期間， LC3前體在ATG4B剪切成LC3-Ⅰ[6]。LC3-Ⅰ在末端的甘氨酸作用下， 與ATG3與ATG7活性位點部位的半胱氨酸相結合產生硫脂鍵， 促使LC3-Ⅰ和硫脂鍵相結合， 從而生成LC3-Ⅱ[7]。整個反應期間， ATG3與ATG7主要起介導作用， 跟隨自噬體的出現， LC3-Ⅱ開始聚集在自噬體膜上;當此期間， LC3-Ⅱ量不斷增加。然后， 溶酶體與自噬體相融合， 后者隨之降解， 其表面的LC3-Ⅱ于ATG4B作用下， 重新轉變為LC3-Ⅰ，?以實現LC3-Ⅰ于自噬體反應過程中的循環利用[8]。LC3-Ⅱ對自噬體的產生具有重要作用， 有關文獻報道表示[9]， 當把LC3-Ⅱ去除， 將會出現許多非閉合的自噬體結構。由于LC3-Ⅱ數量與自噬體數量呈現為相對應的關系， 故而臨床上將其作為自噬體標志物之一。在本研究中， 胃癌組織內的LC3表達陽性率低于癌旁組織（P<0.05）， 這說明LC3與胃癌的發生有一定關系。

關于Beclin1、LC3水平的表達是否與胃癌患者的性別、年齡及腫瘤位置有一定的相關性， 臨床上有關研究較少， 還需進行求證與研究。本研究中， Beclin1、LC3表達陽性患者與Beclin1、LC3表達陰性患者的年齡、性別及腫瘤位置比較， 差異無統計學意義（P>0.05）。可見Beclin1、LC3在胃癌組織內的表達水平與患者的年齡、性別、腫瘤位置無關系。有關文獻報道[10]， Beclin1、LC3表達水平與癌癥患者病理分級、病理分期、淋巴結轉移、侵及漿膜程度、分化程度有密切關系。在本研究中， Ⅲ～Ⅳ期、漿膜層外、淋巴結轉移、Ⅲ級分化患者的Beclin1、LC3表達陽性率均顯著低于Ⅰ～Ⅱ期、漿膜層內、淋巴結未轉移、Ⅰ～Ⅱ級分化患者， 由此可見患者病理分期越高、侵及漿膜程度越深、淋巴結轉移、分化程度越高， Beclin1、LC3的表達陽性率越低。

總之， Beclin1、LC3在胃癌組織中的表達陽性率相對較低， 且隨著患者病情的發展， 該兩項指標的表達陽性率會隨之降低。

參考文獻

[1] 曹惠華， 束平， 唐兆慶， 等. 美國癌癥聯合會第7版與第8版胃癌TNM分期系統的差異及其對預后評估的比較. 中華消化外科雜志， 2018， 17（6）：605-611.

[2] 李磊， 李冉， 劉江， 等. 自噬調控因子mTOR和Beclin1在良惡性多形性腺瘤中的表達及意義. 重慶醫學， 2017， 46（36）：5083-5085.

[3] 韓濤， 曹明. 乳腺癌組織miR-20a的表達及其對乳腺癌細胞自噬的影響. 安徽醫藥， 2018， 22（10）：1936-1939.

[4] 馬煜， 郝建國， 劉峰. 結腸癌中自噬相關蛋白Beclin-1和p62的表達及臨床意義. 腫瘤研究與臨床， 2017， 29（12）：849-851.

[5] 曹一鑫， 李小琴， 王宏宇， 等. Tensin1蛋白與胃癌臨床病理特征及預后的關系. 中華消化外科雜志， 2018， 17（6）：612-618.

[6] 張文武， 石哲瑋， 革麗莎， 等. 病毒性心肌炎小鼠心肌組織中PI3K/AKT2/mTOR通路對自噬的調控作用. 中華微生物學和免疫學雜志， 2017， 37（12）：921-926.

[7] 王剛， 王黃震， 薛挺. 奧沙利鉑誘導的細胞自噬對胃癌SGC7901細胞耐藥的影響. 國際腫瘤學雜志， 2018， 45（9）：513-518.

[8] 袁清紅， 劉強勝， 劉安鵬， 等. 激活大麻素2型受體對膿毒癥小鼠急性肺損傷的影響：自噬在其中的作用. 中華麻醉學雜志， 2018， 38（12）：1509-1512.

[9] 東星， 王晶， 呂遠. Beclin-1和SIRT-1在大腸癌組織中的表達及意義. 中華普外科手術學雜志， 2019， 13（5）：515-517.

[10] 馬立新， 劉志慧， 劉永良， 等. 膠質瘤中Toll樣受體2與LC3B、Beclin1的表達變化及相關性研究. 中國醫師進修雜志， 2018， 41（10）：896-900.

[收稿日期：2020-01-09]