microRNA-137基因多態性與缺血性卒中后抑郁的相關性

符家武，吳昊，李君良，葉燁，陳婧，周海紅，李友

廣東醫科大學附屬醫院神經內科，廣東湛江市524001

腦卒中是我國發病率、致殘率、致死率和復發率較高的一種腦血管疾病，已成為我國國民死亡的主要原因[1-3]。卒中后抑郁(post-stroke depression，PSD)是腦卒中最常見的一種精神心理障礙并發癥，是抑郁障礙的特殊類型，在腦卒中患者中的發病率為25%～79%，其中缺血性腦卒中患者PSD 的發病率更高[4-5]。PSD 臨床表現主要為情緒低落和興趣缺失，嚴重者引起認知功能障礙，影響患者神經功能康復，降低患者生活質量[6-7]。

PSD 具體的發病機制尚未完全明確。microRNA通過調控神經系統發育信號通路和靶基因表達，參與神經元的生成、塑形和突觸發育等過程，與神經精神障礙等疾病密切相關[8-10]。魯豫等[11]發現，缺血性PSD患者外周血microRNA-137 表達水平降低。Zhao 等[12]發現，PSD 大鼠腦組織和外周血microRNA-137 表達低于正常對照組，過表達microRNA-137 可改善抑郁行為。本研究以廣東漢族人為對象，分析microRNA-137 基因內含子區rs1625579 位點多態性與缺血性PSD易感性的關系，并探討rs1625579 位點不同基因型與microRNA-137表達水平的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2017 年1 月至2019 年1 月，廣東醫科大學附屬醫院神經內科住院的初發急性缺血性腦卒中患者，均符合全國第四屆腦血管病學術會議通過的缺血性腦卒中診斷標準，并經頭顱MRI 或CT 檢查確診；發病2 周后，17 項漢密爾頓抑郁量表評分≥8 分者納入患者組(n=250)。

納入標準：①年齡≥18 歲；②發病至入院時間≤1周；③能獨立配合完成漢密爾頓抑郁量表評分。

排除標準：①并發可能對患者產生消極影響的其他疾病，如惡性腫瘤、自身免疫性疾病、癲癇、出血性腦卒中、癡呆及甲狀腺功能減退等；②既往有原發性抑郁癥等精神疾病史。

選擇同期本院體檢中心體檢的健康人250 例為對照組。

所有研究對象均為廣東漢族人，相互間無血緣關系。兩組性別、年齡無顯著性差異(P＞0.05)。見表1。

本研究已經廣東醫科大學附屬醫院倫理委員會審核通過。所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 基因型檢測

采集空腹外周靜脈血2 ml，基因組抽提試劑盒(QIAGEN公司)提取基因組DNA。SNaPshot[13]檢測microRNA-137 基因內含子區rs1625579 多態性位點基因型。

rs1625579 位點多重聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)引物序列：

上游5'-TTT AGT CAA CAT TTG CAT TTG GAA GC-3'；

下游5'-CAA CAG ATT CCA AAG GTC TCT AGT GTG C-3'。

1.2.2 外周血單個核細胞microRNA-137檢測

密度梯度離心和TRIzol法分別外周血單個核細胞及其總microRNA，逆轉錄試劑盒將單個核細胞總microRNA 逆轉錄。SYBR?Premix Ex TaqTM熒光定量試劑盒和實時熒光定量PCR 儀檢測microRNA-137 相對表達量，以U6 為內參。PCR 擴增反應體系10 μl，預變性94 ℃3 min，1 個循環；變性94 ℃15 s，退火、延伸和檢測熒光62 ℃40 s，共40個循環。

表1 兩組一般資料比較

U6引物序列：

上游5'-ATT GGA ACG ATA CAG AGA AGA TT-3'；

下游5'-GGA ACG CTT CAC GAA TTT G-3'。

每個樣本重復檢測3次，計算2-ΔΔCt值。

1.3 統計學分析

采用SPSS 19.0 統計軟件分析數據。Hardy-Weinburg 平衡檢驗遺傳平衡吻合度；等位基因和基因型分布組間比較采用χ2檢驗。計量資料以()表示，組間比較采用t檢驗。顯著性水平α=0.05。

2 結果

2.1 等位基因和基因型分布

患者組(P=0.116)和對照組(P=0.379)microRNA-137 基因rs1625579 位點基因型分布符合Hardy-Weinburg 平衡。兩組間TT、GT 和GG 基因型分布有顯著性差異(P＜0.05)；TT 基因型是危險因素(OR=2.139，95%CI 1.272～3.595，P=0.004)；患者組T 等位基因頻率明顯高于對照組(OR=2.033，95%CI 1.255～3.294，P=0.003)。見表2。

2.2 microRNA-137表達

患者組microRNA-137 相對表達量為(0.68±0.32)，顯著低于對照組(1.71±0.48)(t=28.230，P＜0.001)。對照組中，TT 基因型microRNA-137 相對表達量(1.63±0.47)，顯著低于GT和GG基因型(1.92±0.52) (t=3.764，P＜0.001)。

3 討論

PSD 在腦卒中后1 個月內、1～6 個月以及6 個月后，發病率分別約為33%、33%和34%[14-16]。PSD 臨床癥狀多樣，難以被早期識別，許多患者未能得到及時有效治療，延緩神經功能恢復。

microRNA 是一種長度為19～23 個堿基的內源性小RNA 分子，在調控轉錄后基因表達水平中發揮重要作用。microRNAs 廣泛存在于中樞神經系統，參與神經細胞增殖、發育、分化、凋亡，神經元遷移和突觸塑形等過程，與缺血性腦卒中、精神分裂癥和抑郁癥等神經精神疾病密切相關[17-18]。Smalheiser 等[19]發現，抑郁癥患者腦組織microRNA-137 表達水平降低。楊曉煜等[20]發現，缺血性PSD 大鼠外周血和腦組織microRNA-137 表達水平降低，可能通過抑制N-甲基-D-天冬氨酸離子能谷氨酸受體2A 基因的表達參與缺血性PSD發病。

microRNA-137 位于1p21.3。Ripke 等[21]的全基因組關聯分析發現，microRNA-137 基因rs1625579 位點多態性與精神分裂癥易感性相關。本研究以廣東漢族人為對象，首次分析microRNA-137 基因rs1625579 位點多態性與缺血性PSD 易感性的關系，發現TT 基因型可能是缺血性PSD 易感的危險因素，可能因為TT基因型導致microRNA-137 表達下降。rs1625579 多態性影響microRNA-137 表達的具體機制，以及microRNA-137 異常表達參與缺血性PSD 發病機制，有待進一步探討。

本研究樣本量相對小，分析了microRNA-137 基因的rs1625579 位點，存在不足。進一步研究可增加樣本量，并探討microRNA-137 基因其余位點多態性與缺血性PSD 易感性的關系。PSD 在卒中后不同時期均可發病，本研究參考以往文獻，只選取發病2 周后發病的患者為研究對象。可收集卒中后不同時期并發抑郁癥的患者，做進一步分析。

綜上所述，microRNA-137 基因內含子區rs1625579 位點多態性與缺血性PSD 易感性密切相關，TT 基因型可能通過下調microRNA-137 的表達，參與缺血性PSD的發病。

表2 兩組microRNA-137基因rs1625579位點基因型和等位基因分布

利益沖突聲明：所有作者聲明不存在利益沖突。