核酸檢測在獻血者標本內乙肝病毒檢測中的應用價值分析

黃愛瓊

【摘要】 目的 探究核酸檢測（NAT）在獻血者標本內乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）檢測中的應用價值。方法 51份獻血者乙肝檢驗可疑標本， 所有標本均分別施以電化學發光免疫分析（ECLIA）、酶聯免疫吸附測定法（ELISA）以及NAT檢測。以ECLIA檢測結果作為金標準， 對比其余兩種檢測方法對HBV檢測的準確率、靈敏度和特異度。結果 ECLIA檢測結果顯示， 51份獻血者乙肝檢驗可疑標本中HBV檢測陽性17例， 陰性34例， HBV陽性檢出率為33.33%。NAT對HBV檢測的準確率、靈敏度、特異度依次為98.04%、100.00%、97.06%， ELISA對HBV檢測的準確率、靈敏度、特異性依次為76.47%、70.59%、79.41%， NAT對HBV檢測的準確率、靈敏度、特異度均明顯高于ELISA， 差異具有統計學意義（P<0.05）。結論 乙肝患者HBV檢測中采用NAT可有效提高檢測特異度、敏感度和準確率， 減少窗口期， 提高檢測安全性， 值得臨床信賴和進一步推廣。

【關鍵詞】 核酸檢測;酶聯免疫吸附測定法;乙型肝炎;乙型肝炎表面抗原

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.14.021

乙肝是一種由病毒引發的傳染病， 臨床表現為食欲減退、惡心、上腹部不適、肝區痛、乏力， 患者肝功能明顯下降， 該疾病若不能被有效控制可能導致多種肝臟疾病如肝硬化等[1]。截止2018年， 全球約有乙肝感染者2.57億， 我國約有乙肝感染者9000萬， 對于該疾病的快速診斷和治療已成為全球性公共衛生問

題[2]。HBV為一種反轉錄病毒及DNA病毒， 乙肝表面抗原（HBsAg）為HBV感染的診斷標志， 對其精準判斷可以對乙肝進行快速診斷[3]。HBV可經血及血液制品傳播， 對輸血安全構成威脅， 同時HBV感染是社會上一個比較敏感的問題， 感染者在學習、生活和工作中， 尤其是一些特殊的崗位以及行業會受到限制。

因而， 準確診斷是否感染HBV具有重要的臨床意義。我國現行的獻血法明確規定， HBsAg陽性血液不得用于臨床輸血。乙肝檢測存在一個窗口期的難題， 為了減少受血者通過輸血感染病毒的風險， 保證臨床用血的安全。ELISA作為一種較早的檢測方法， NAT與其存在一定的差異， 為探究NAT應用于獻血工作中HBV檢測中的價值， 現以本中心2018年1月～2019年3月收集的51份獻血者乙肝檢驗可疑標本作為研究對象， 對比ELISA和NAT對HBV檢測的準確率、靈敏度和特異度， 現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2018年1月～2019年3月本中心收集的51份獻血者乙肝檢驗可疑標本， 所有獻血者均符合現行的衛生部（現衛健委）發布的《獻血者健康檢查要求》（GB18467-2001）。獻血者年齡18～50歲， 平均年齡（29.32±6.90）歲;男24例， 女27例。

1. 2 方法 所有標本均分別施以ECLIA、ELISA以及NAT檢測。所有獻血者標本均分別取3份靜脈血， 各5 ml， 分別置于EDTA-K2抗凝管和核酸專用管中， 分別進行血清學檢查和相應的診斷檢測[4]。

1. 3 儀器與相關試劑 檢測儀器：離心機， 酶標儀， 羅氏全自動電化學發光免疫分析儀， 羅氏Roches201核酸檢測儀器， 酶聯免疫檢測分析儀（瑞士Hamilton FAME24/30）， 自動酶聯免疫檢測加樣儀（瑞士Hamilton， STAR）。所用試劑為北京萬泰生物藥業股份有限公司提供的HBsAg血清學標志物檢測試劑盒、羅氏全自動電化學發光免疫分析儀配套試劑、羅氏ROCHEs201核酸檢測試劑。

1. 4 觀察指標 以ECLIA檢測結果為金標準， 對比兩種檢測方法對HBV檢測的準確率、靈敏度和特異度。

1. 5 統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件對數據進行統計分析。計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

ECLIA檢測結果顯示， 51份獻血者乙肝檢驗可疑標本中HBV檢測陽性17例， 陰性34例， HBV陽性檢出率為33.33%。NAT對HBV檢測的準確率、靈敏度、特異度均明顯高于ELISA， 差異具有統計學意義（P<0.05）。見表1， 表2， 表3。

3 討論

HBV由禽嗜肝DNA病毒屬、正嗜肝DNA病毒屬組成， 正嗜肝DNA病毒是引起乙肝的主要菌屬[5]。近年來， 隨著我國醫療科技、基因檢測技術的不斷發展， 基因診斷在疾病的治療中發揮著重要作用， 提取核酸是基因診斷成功的關鍵所在。乙肝的血清學檢查是檢查肝炎病毒的金標準， 主要針對病毒表面抗原的檢測[6]。HBsAg、乙肝表面抗體（抗-HBs）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗體（抗-HBe）、乙肝核心抗體（抗-HBc）被稱為是乙肝五項， 是HBV感染常用的檢測指標[7]。如在乙肝者血液檢查中檢測出HBV的HBsAg、HBeAg、抗-HBc為陽性， 在臨床上稱為“大三陽”;在其血液中檢測出HBV的HBsAg、抗-HBe、抗-HBc為陽性， 在臨床上稱為“小三陽”[8]。HBV的主要傳播途徑是血液傳播， 包括血制品和輸血兩方面， 其次是母嬰傳播， 即在分娩前后， 母體攜帶HBV， 并將HBV傳染給新生兒， 母乳喂養也會傳播HBV[9]。

ELISA是臨床檢測HBV常用方法之一， 方便、快捷、簡單、準確率較高， 但ELISA的檢查存在一定的窗口期， 患病初期可能因病毒水平低而引起假陰性結果， 漏診率較高。NAT是近幾年逐漸推廣的診斷技術， 可從基因水平進行病毒DNA檢測， 準確率高， 可有效縮短窗口期， 有效彌補了ELISA的不足， 同時降低病毒經血液傳播的風險， 安全性更高[10]。NAT是直接檢測病毒核酸， 視為降低血清學窗口期漏檢風險最直接、最可靠的方法， 降低輸血感染的風險， 同時減少血液浪費。ECLIA為HBV檢查的常用方法， 通過三聯吡啶釕與蛋白質、半抗原激素、核酸等各種化合物結合， 對HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc進行檢查。ECLIA在免疫檢驗期間沒有外來光源介入， 消除檢驗中的光散射問題， 消除噪音信號干擾， 提高HBV標志物檢驗靈敏度。

綜上所述， 乙肝患者HBV檢測中采用NAT可有效提高檢測特異度、敏感度和準確率， 減少窗口期， 提高檢測安全性， 值得信賴， 并進一步在血站推廣， 提高用血安全。

參考文獻

[1] 李俊英， 王藝芳， 葛文超， 等. 一種核酸檢測系統應用于血液檢測前的性能確認. 中國輸血雜志， 2019， 32（1）：73-75.

[2] 吳曉敏， 仝巧云， 劉偉. 慢性乙型肝炎的免疫治療. 臨床肝膽病雜志， 2019， 35（11）：2569-2572.

[3] 楊華軍， 甘業美. HBsAg ELISA-/NAT+的HBV血清學模式和病毒變異分析. 國際檢驗醫學雜志， 2017， 38（18）：2569-2572， 2575.

[4] 王志宏， 李輝. 核酸檢測法對血液標本內乙肝病毒的檢測價值分析. 河北醫學， 2016， 22（12）：2097-2099.

[5] 董劍， 許小華. 乙肝病毒DNA檢測2種不同核酸提取方法的性能驗證情況分析. 醫療衛生裝備， 2019， 40（6）：40-43.

[6] 周丹. 血清纖維化標志物檢測評估慢性丁型肝炎肝纖維化程度的臨床意義. 中國實驗診斷學， 2019， 23（3）：408-410.

[7] 劉宓， 魏興， 王偉， 等. 慢性乙肝患者病毒血清學指標與HBV DNA及肝酶的相關性分析. 中國衛生檢驗雜志， 2015， 25（21）：3676-3678， 3684.

[8] 楊傳信. PreS1抗原和HBV血清學標志物與HBV DNA的相關性及臨床意義. 臨床輸血與檢驗， 2019， 21（1）：53-55.

[9] 金建懷， 許友山， 陳波， 等. 化學發光法檢測HBsAg在血液初篩中的應用評估. 中國輸血雜志， 2019， 32（7）：707-709.

[10] 何麗葦， 陳會欣. 乙肝病毒外膜大蛋白檢測在臨床診斷與治療中的意義. 臨床血液學雜志， 2018， 31（8）：588-592.

[收稿日期：2020-02-12]