高效液相色譜法測定C16-18醇聚氧乙烯醚中乙酸含量

沙 美

(南京威爾藥業股份有限公司,江蘇 南京 210042)

脂肪醇聚氧乙烯醚是最重要的一類非離子表面活性劑。分子中的醚鍵不易被酸、堿破壞，所以穩定性較高，水溶性較好，耐電解質，易于生物降解，泡沫小，該類表面活性劑大都以環氧乙烷為乙氧基化試劑，以氫氧化鈉或者氫氧化鉀為催化劑[1]，在后續反應的精制過程中，會用到乙酸來中和多余的催化劑，使產品本身的性質保持在中性或弱酸性，成品中會殘留少量的乙酸，作為雜質會影響到產品質量，常規乙酸方法的測定會采用氣相色譜法[2]，但可能會遇到峰型不佳或者檢測靈敏度偏低的情況，也有文獻報道采用高效液相色譜法[3]，但流動相為甲醇-緩沖液系統，檢測波長為210 nm，因為甲醇的截止波長接近210 nm，所以我們改用乙腈和磷酸鹽緩沖系統，建立了輔料C16-18醇聚氧乙烯醚中乙酸的測定方法，該方法靈敏度和準確度較高。

1 儀器與試劑

儀器：Thermou3000高效液相色譜儀

試劑：乙酸(ACS，色譜級，批號LOT27Y1709DK)，乙腈(ACS，色譜級，批號LOT45Y1708BR)，磷酸二氫鉀(分析純)，磷酸(分析純)，C16-18醇聚氧乙烯醚(南京威爾藥業股份有限公司，批號20190701k)

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：CAPCELL PAK C18(4.6 mm*250 mm，5 μm)；流動相A：乙腈-pH3.0磷酸鹽緩沖液(5∶95)；流動相B：乙腈；柱溫35 ℃；進樣量20 μl；流速1.0 mL·min-1；檢測波長210 nm，流動相梯度見表1。

表1 流動相梯度表

2.2 溶液配制

2.2.1對照品溶液

取乙酸適量，加水溶解并定量稀釋至濃度為25 μg/ml的溶液，作為對照溶液。

2.2.2供試品溶液

取本品100 mg，精密稱定，置20 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1專屬性試驗

取空白溶劑和乙酸對照溶液各20 μl，分別注入液相色譜儀，結果空白溶劑在乙酸出峰位置沒有干擾。

2.3.2檢測限和定量限

取乙酸溶液逐級稀釋至S/N約為10作為定量限，S/N約為3作為檢測限，結果見表2。

表2 乙酸檢測限和定量限

乙酸的定量限濃度為0.25 μg/ml，相當于0.005%可以定量，檢測限濃度為0.125 μg/ml，相當于0.0025%被檢出。

2.3.3線性范圍

分別取濃度約為100 μg/ml的乙酸對照溶液0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0 ml置10 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為不同濃度的對照溶液，分別取不同濃度的乙酸對照溶液20 μl注入液相色譜儀，以濃度C(μg/ml)為橫坐標，以峰面積A為縱坐標進行直線回歸，結果見表3。

表3 乙酸線性

結果表明：乙酸濃度在5.49～54.90 μg/ml之間時，濃度與峰面積線性關系良好。

2.3.4進樣精密度試驗

取線性4#溶液連續進樣6針，考察進樣精密度，結果見表4。

表4 乙酸進樣精密度

結果表明乙酸進樣的相對標準偏差RSD小于2.0%，說明測定數據間的波動性小，即本方法精密度試驗符合要求。

2.3.5重復性

取20190701k批樣品適量，精密稱定，加水溶解并制成每1 ml含5 mg的溶液，作為供試品溶液，取乙酸適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋至濃度約為25 μg/ml的溶液，作為對照溶液，按外標法以峰面積計算，平行測定6份，結果見表5。

表5 乙酸重復性

結果表明：該方法的重復性良好。

2.3.6中間精密度試驗

不同人員不同時間按照測定方法平行測定6份，結果見表6。

表6 乙酸中間精密度

結果表明：該方法的中間精密度良好。

2.3.7回收率試驗

取20190701k樣品適量，加水溶解后，按照限度的80%、100%和120%加入一定量的乙酸溶液，每個水平平行操作3份，計算回收量和回收率，結果如下：

表7 乙酸加樣回收率

結果表明：該方法測定乙酸，回收率良好。

2.3.8溶液穩定性

取供試品溶液，分別于0、2.5、5、7.5、10和16 h進樣，供試品溶液中乙酸的峰面積變化見表8。

表8 乙酸溶液穩定性

結果表明：供試品溶液室溫放置16h穩定。

3 討論

該方法測定C16-18醇聚氧乙烯醚中的殘留的乙酸，準確可靠，可以應用到同類輔料的項目中，具有一定的實用意義。